Articolo metodologico

Test di attivazione dei basofili per la diagnosi di allergia

DOI:

10.3791/62600

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31 maggio 2021

 ,  ,  , 
1Allergy Unit, Hospital Regional Universitario de Málaga, 2Allergy Research Group, Instituto de Investigación Biomédica de Málaga-IBIMA, 3Universidad de Málaga, Departamento de Biología celular, Genética y Fisiología, Universidad de Málaga, 4Departamento de Medicina, Universidad de Málaga, 5Nanostructures for Diagnosing and Treatment of Allergic Diseases Laboratory, Andalusian Center for Nanomedicine and Biotechnology-BIONAND

* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

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Il test di attivazione dei basofili è un test diagnostico complementare in vitro per la valutazione delle reazioni allergiche IgE-mediate basato sulla rilevazione dell'attivazione dei basofili in presenza di uno stimolo specifico attraverso la misura dei marcatori di attivazione mediante citometria a flusso.

Abstract

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Il test di attivazione dei basofili (BAT) è un test diagnostico complementare in vitro che può essere utilizzato in aggiunta alla storia clinica, al test cutaneo (ST) e alla determinazione specifica delle IgE (sIgE) nella valutazione delle reazioni allergiche IgE-mediate al cibo, al veleno degli insetti, ai farmaci e ad alcune forme di orticaria cronica. Tuttavia, il ruolo di questa tecnica negli algoritmi diagnostici è altamente variabile e non ben determinato.

La BAT si basa sulla determinazione della risposta dei basofili all'attivazione incrociata delle IgE allergene/farmaco attraverso la misurazione di marcatori di attivazione (come CD63, CD203c) mediante citometria a flusso. Questo test può essere uno strumento utile e complementare per evitare test di provocazione controllati per confermare la diagnosi di allergia, specialmente nei soggetti che manifestano gravi reazioni potenzialmente letali. In generale, le prestazioni delle BAT devono essere prese in considerazione se i) l'allergene/farmaco produce risultati falsi positivi nella ST; ii) non esiste una fonte di allergeni/farmaci da utilizzare per la determinazione di ST o sIgE; iii) vi è discordanza tra la storia del paziente e la determinazione ST o sIgE; iv) i sintomi suggeriscono che la ST può provocare una risposta sistemica; v) prima di prendere in considerazione un CCT per confermare l'allergene/farmaco colpevole. I principali limiti del test sono legati alla sensibilità non ottimale, soprattutto nell'allergia ai farmaci, alla necessità di eseguire il test non più di 24 ore dopo l'estrazione del campione e alla mancanza di standardizzazione tra i laboratori in termini di procedure, concentrazioni e marcatori cellulari.

Introduzione

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La diagnosi allergica IgE-mediata si basa sull'anamnesi, sui test cutanei (ST), sulla quantificazione delle IgE sierospecifiche (sIgE) e, se richiesto e indicato, sui challenge test controllati (CCT)1,2,3,4,5,6. Tuttavia, l'anamnesi clinica può essere inaffidabile poiché potrebbe esserci una mancanza di informazioni accurate e ST e CCT non sono procedure prive di rischio che possono essere controindicate nei soggetti che manifestano gravi reazioni p....

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Protocollo

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L'esecuzione del protocollo è stata condotta secondo i principi della Dichiarazione di Helsinki e approvata dal Comitato Etico locale (Comité de Ética para la Investigación Provincial de Málaga, Spagna). Tutti i soggetti sono stati informati oralmente dello studio di ricerca e hanno firmato il corrispondente modulo di consenso informato.

NOTA: Il presente protocollo descrive in dettaglio la procedura BAT che gli autori utilizzano quotidianamente. Tuttavia, questo non è un metodo standardizzato ed esistono differenze con le procedure pubblicate da altri autori. Le principali modifiche del protocollo sono legate all'uso di IL-3 nel t....

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Risultati

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La BAT eseguita con allergeni o farmaci consente di studiare le reazioni di ipersensibilità IgE-dipendenti. La reattività dei basofili deve essere misurata in almeno due concentrazioni ottimali per ottenere i migliori risultati34 e l'attivazione viene visualizzata dalla sovraregolazione di CD63 sulla superficie cellulare. Nel caso di allergeni, inoltre, per confermare la reattività dei basofili, la sensibilità dei basofili dovrebbe essere analizzata misurando la reattività a concentrazioni multipl.......

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Discussione

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La BAT è un test diagnostico complementare in vitro per la valutazione delle reazioni allergiche IgE-mediate che si è dimostrato utile nella diagnosi di reazioni indotte da diversi fattori scatenanti come farmaci, alimenti o inalanti, nonché in alcune forme di orticaria cronica. In generale, le prestazioni delle BAT devono essere considerate se i) l'allergene/farmaco produce risultati falsi positivi nella ST; ii) l'allergene/farmaco non è disponibile per essere utilizzato per la quantificazione ST o sIgE; iii) e.......

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Dichiarazioni

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Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Ringraziamenti

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Ringraziamo Claudia Corazza per il suo prezioso supporto in lingua inglese. Questo lavoro è stato sostenuto dall'Istituto di Sanità ''Carlos III'' (ISCIII) del MINECO (sovvenzione cofinanziata dal FESR: "Una manera de hacer Europa"; Sovvenzioni n. PI20/01715; PI18/00095; PI17/01410; PI17/01318; PI17/01237 e RETIC ARADYAL RD16/0006/0001; Ministero regionale andaluso della sanità (concessione n. PI-0127-2020, PIO-0176-2018; PE-0172-2018; PE-0039-2018; PC-0098-2017; PI-0075-2017; PI-0241-2016). ID è uno sperimentatore clinico (B-0001-2017) e AA detiene un contratto post-dottorato senior (RH-0099-2020), entrambi supportati dal Ministero della Salute regionale andaluso (co....

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Materiali

Provetta in

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
polistirene a fondo tondo da 5 mL, senza tappo, non sterileCorning352008
APC anticorpo CD193 (CCR3) AnticorpoBioLegend310708
BD FACSCalibur Citometro a flussoBD Biosciences
Cloruro di calcioSigma-AldrichC1016
FITC anticorpo CD63 umanoBioLegend 353006
HEPES (1 M)Thermo-Fisher15630106
soluzione di lisi 10x concentratoBD Biosciences349202
cloruro di magnesioSigma-AldrichM8266
N-Formyl-Met-Leu-PheSigma-AldrichF3506
PE anti-umano CD203c (E-NPP3) AnticorpoBioLegend324606
Cloruro di potassioSigma-AldrichP9541
topo purificato anti-umano IgEBD Biosciences555857
Ricombinante umano IL-3R & D Systems203-IL
Fluido per guainaBD Biosciences342003
Cloruro di sodioSigma-AldrichS3014
TUBO 9 mL LH Litio eparinaGreiner Bio-One455084
Tween 20Sigma-AldrichP1379

Riferimenti

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  1. Mayorga, C., et al. In vitro tests for drug hypersensitivity reactions: an ENDA/EAACI Drug Allergy Interest Group position paper. Allergy. 71 (8), 1103-1134 (2016).
  2. Romano, A., et al. Towards a more prec....

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Allergia mediata da IgEcitometria a flussomarcatori di attivazionemarcatore CD63marcatore CD203callergia ai farmaciorticaria cronicatest allergico in vitro

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