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Articolo metodologico

Piattaforma di coltura d'organo del segmento anteriore per il monitoraggio delle lesioni Open Globe e delle prestazioni terapeutiche

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DOI:

10.3791/62649

25 agosto 2021

In questo articolo

Sommario

Le lesioni agli occhi open globe possono non essere trattate per più giorni in scenari rurali o militari rilevanti, con conseguente cecità. Le terapie sono necessarie per ridurre al minimo la perdita della vista. Qui, descriviamo in dettaglio un modello di lesione open globe per la coltura di organi. Con questo modello, le potenziali terapie per stabilizzare queste lesioni possono essere valutate correttamente.

Abstract

Le lesioni open globe hanno scarsi risultati visivi, spesso con conseguente perdita permanente della vista. Ciò è in parte dovuto a un ritardo prolungato tra lesioni e interventi medici in ambienti rurali e applicazioni di medicina militare in cui l'assistenza oftalmica non è prontamente disponibile. Le lesioni non trattate sono suscettibili di infezione dopo che l'occhio ha perso il suo sigillo a tenuta stagna, così come la perdita di vitalità tissutale a causa dell'ipotensione intraoculare. Le terapie per sigillare temporaneamente le lesioni a globo aperto, se adeguatamente sviluppate, possono essere in grado di ripristinare la pressione intraoculare e prevenire l'infezione fino a quando non è possibile un'adeguata cura oftalmica. Per facilitare lo sviluppo del prodotto, qui è dettagliato l'uso di una piattaforma di lesioni open globe per la coltura di organi del segmento anteriore per il monitoraggio delle prestazioni terapeutiche per almeno 72 ore dopo l'infortunio. Il tessuto del segmento anteriore suino può essere mantenuto in piatti di coltura di organi progettati su misura e mantenuto a pressione intraoculare fisiologica. Le lesioni da foratura possono essere create con un sistema pneumatico in grado di generare lesioni fino a 4,5 mm di diametro, simili alle dimensioni delle lesioni rilevanti per l'esercito. La perdita di pressione intraoculare può essere osservata per 72 ore dopo l'infortunio confermando la corretta induzione della lesione e la perdita della tenuta stagna dell'occhio. Le prestazioni terapeutiche possono essere monitorate mediante applicazione all'occhio dopo l'induzione della lesione e quindi il monitoraggio della pressione intraoculare per più giorni. Inoltre, il modello di lesione del segmento anteriore è applicabile ai metodi ampiamente utilizzati per il monitoraggio funzionale e biologico della fisiologia del segmento anteriore, come la valutazione della trasparenza, della meccanica oculare, della salute dell'epitelio corneale e della vitalità dei tessuti. Nel complesso, il metodo qui descritto è un passo successivo necessario verso lo sviluppo di terapie biomateriali per sigillare temporaneamente le lesioni a globo aperto quando la cura oftalmica non è prontamente disponibile.

Introduzione

Le lesioni a globo aperto (OG) possono causare la perdita permanente della vista se non trattate o almeno stabilizzate a seguito dilesioni 1. I ritardi, tuttavia, sono prevalenti in aree remote in cui l'accesso all'intervento oftalmico non è prontamente disponibile, come nelle aree rurali o sul campo di battaglia in scenari militari. Quando il trattamento non è prontamente disponibile, l'attuale standard di cura è quello di proteggere l'occhio con uno scudo rigido fino a quando non è possibile l'intervento medico. In medicina militare, questo ritardo è attualmente fino a 24 ore, ma si prevede che aumenterà fino a 72 ore nelle future operazioni ....

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Protocollo

Prima di eseguire questo protocollo, essere consapevoli del fatto che esistono requisiti legali ed etici per l'uso degli animali nella ricerca e nella formazione. Se gli animali vivi vengono utilizzati per la fonte di tessuto oculare, chiedere l'approvazione dell'autorità etica o legale locale (IACUC o comitato etico, ecc.) prima di iniziare. Se c'è qualche dubbio nell'ottenere l'approvazione per l'uso di animali, non procedere. In precedenza abbiamo determinato e riportato che gli occhi suini freschi ottenuti e utilizzati entro 24 ore post-mortem rispetto al più vicino alla fisiologia in vivo e sono andati bene per questi studi (Animal Technologies, Tyler, T....

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Risultati

Le immagini acquisite tramite tomografia a coerenza ottica (OCT) vengono mostrate per gli occhi feriti OG per illustrare come appare un'induzione di lesioni di successo. La Figura 3 mostra le immagini per il controllo e il tessuto AS danneggiato da OG immediatamente dopo l'infortunio e 72 ore dopo. Vengono mostrate due viste: immagini in sezione trasversale attraverso il sito della lesione e proiezione di intensità massima (MIP) dall'alto verso il basso per visualizzare l'area della superfic.......

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Discussione

Ci sono passaggi critici con la piattaforma di lesioni ASOC OG che dovrebbero essere evidenziati per migliorare la probabilità di successo quando si utilizza la metodologia. In primo luogo, durante la dissezione del segmento anteriore, preservare la rete trabecolare è essenziale ma difficile da fare correttamente. Se la Meditazione Trascendentale viene interrotta, l'occhio non manterrà la pressione fisiologica e non soddisferà i criteri di ammissibilità per l'uso sperimentale. Si raccomanda di praticare prima il processo.......

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Dichiarazioni

Gli autori non dichiarano interessi concorrenti. Le opinioni espresse in questo articolo sono quelle degli autori e non riflettono la politica o la posizione ufficiale del Dipartimento medico dell'esercito degli Stati Uniti, del Dipartimento dell'esercito, del Dipartimento della Difesa o del governo degli Stati Uniti.

Ringraziamenti

Questo materiale si basa sul lavoro sostenuto dal Dipartimento della Difesa degli Stati Uniti attraverso un accordo interagenzia (# 19-1006-IM) con il programma di acquisizione temporary corneal repair (United States Army Medical Materiel Development Agency).

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
10-32 Spina diritta in policarbonato, connettore per tubo filettato maschioMcMaster-Carr51525K431
10-32 Vite a brugola, ½ "McMaster-Carr92196A269
Siringa da 10 mlBD302995
Siringa da 20 mlBD302830
Anti-AntiGibco15240-096
Chiave a L con estremità sfericaMcMaster-Carr5020A25
BetadineFisher ScientificNC1696484
BD  Intramedico PE 160 TubingFisher Scientific14-170-12E
Cotton fiocPuritan25-8061WC
DMEM mediaATCC30-2002
FBSATCC30-2020
Pinze finiWorld Precision Instruments15914
GarzaCovidien8044
GentamicinGibco15710-064
GlutamaxGibco35050-061
O-ring in silicone per alte temperature, larghezza 2 mm, ID 4 mmMcMaster-Carr5233T47
Pinza grandeWorld Precision Instruments500365
Forbici chirurgiche grandiPrecision Instruments503261
Pinza a denti mediWorld Precision Strumenti501217
Chiodo (oggetto da puntura)McMaster-Carr97808A503
Filtri per siringhe in nylonFisher09-719C
PBSGibco10010-023
Piastra di Petri (100 mm)FisherFB0875713
Rubinetto in policarbonato, a tre vie, con maschio  luer  lucchettoFisherNC9593742
Lama di rasoioFisher12-640
Acciaio inossidabile 18 G  90 gradi  ago di dosaggio angolareMcMaster-Carr75165A81
Acciaio inox 18 G dritto ½ '’ ago di dosaggioMcMaster-Carr75165A675
Becher sterili da 100 mL con coperchiVWR15704-092
Vannas  forbiciWorld Precision InstrumentsWP5070
World

Riferimenti

  1. Hilber, D., Mitchener, T. A., Stout, J., Hatch, B., Canham-Chervak, M. Eye injury surveillance in the US Department of Defense, 1996-2005. American Journal of Preventive Medicine. 38, 1 Suppl 78-85 (2010).
  2. Linde, A. S., McGinnis, L. J., Thompson, D. M.

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Ristampe e permessi

Tag

Lesione a globo apertoMonitoraggio delle prestazioni terapeutichePressione intraoculareSalute dell epitelio cornealeModello di occhio sucinoTomografia a coerenza otticaViabilit tissutaleInduzione di lesione da punturaTerapie con biomateriali