Qui, il protocollo presenta la preparazione della soluzione di naringenina per la somministrazione intraperitoneale in vivo . La naringenina è completamente sciolta in una miscela di dimetilsolfossido, Tween 80 e soluzione salina. Gli effetti osteoporotici antidiabetici della naringenina sono stati valutati mediante test della glicemia, colorazione con fosfatasi acida resistente ai tartrati e saggio immunoassorbente enzimatico.
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Articolo metodologico
Preparazione della soluzione di Naringenin per l'applicazione in vivo
In questo articolo
Sommario
Abstract
La preparazione di una soluzione composta (fitochimica) è un passaggio trascurato ma critico prima della sua applicazione in studi come lo screening farmacologico. La completa solubilizzazione del composto è necessaria per il suo uso sicuro e risultati relativamente stabili. Qui, un protocollo per la preparazione della soluzione di naringenina e la sua somministrazione intraperitoneale in una dieta ricca di grassi e un modello diabetico indotto da streptozotocina (STZ) è dimostrato come esempio. Una piccola quantità di naringenina (3,52-6,69 mg) è stata utilizzata per testare la sua solubilizzazione in solventi, tra cui etanolo, dimetilsolfossido (DMSO) e DMSO più Tween 80 ricostituito in soluzione fisiologica (PS), rispettivamente. La completa solubilizzazione del composto viene determinata osservando il colore della soluzione, la presenza di precipitati dopo la centrifugazione (2000 x g per 30 s) o lasciando riposare la soluzione per 2 ore a temperatura ambiente (RT). Dopo aver ottenuto un composto stabile/soluzione fitochimica, la concentrazione/quantità finale del composto necessaria per gli studi in vivo può essere preparata in una soluzione madre di solo solvente (senza PS) e quindi diluita/miscelata con PS come desiderato. Gli effetti osteoporotici antidiabetici della naringenina nei topi (somministrazione intraperitoneale a 20 mg/kg p.c., 2 mg/ml) sono stati valutati misurando la glicemia, la massa ossea (micro-CT) e la velocità di riassorbimento osseo (colorazione TRAP ed ELISA). I ricercatori alla ricerca di preparazioni dettagliate di soluzioni organiche / fitochimiche trarranno beneficio da questa tecnica.
Introduzione
Con l'aumento degli studi sull'uso di composti fitochimici per lo screening dei farmaci, vale la pena prestare attenzione agli approcci per preparare soluzioni fitochimiche per valutare i loro effetti ottimali. Molti aspetti come la metodologia di dissoluzione, il dosaggio e la concentrazione devono essere considerati quando si prepara il composto1.
La dissoluzione a base di solvente è ampiamente utilizzata per la preparazione di composti organici1. I solventi comunemente usati includono acqua, olio, dimetilsolfossido (DMSO), metanolo, etanolo, acido formico, Tween, glicerina, ecc
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Protocollo
Le indagini descritte erano conformi alle linee guida per la cura e l'uso degli animali da laboratorio del Consiglio nazionale delle ricerche e sono state approvate dal Comitato per la cura e l'uso degli animali dell'Università di Shanghai della medicina tradizionale cinese. Quando si eseguono gli esperimenti, sono necessari camici da laboratorio, guanti monouso in nitrile e occhiali protettivi per motivi di sicurezza.
1. Preparazione dei solventi e stima della naringenina necessaria per l'applicazione in vivo
- Preparare i seguenti solventi: Tween-80 (intervallo di concentrazione finale: 0,5% -1%), DMSO, glicerina (interva....
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Risultati
Il peso corporeo dei topi diabetici alimentati con dieta ad alto contenuto di grassi e indotti da STZ è diminuito rispetto a quello dei gruppi di controllo da 0-8 settimane dopo il trattamento con STZ. La perdita di peso dei topi trattati con naringenina è stata significativa rispetto ai topi non trattati (gruppo STZ) alla settimana 4. I gruppi di controllo e STZ sono stati somministrati con lo stesso volume di PS (Tabella 1). Il livello di glucosio nel sangue nei topi diabetici è aumentato drasticamente.......
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Discussione
La preparazione della soluzione fitochimica è la base per la sua applicazione in vivo. In questo protocollo, la preparazione della soluzione di naringenina è stata dimostrata utilizzando diversi solventi, come etanolo, DMSO, Tween 80 e 0,9% PS. La soluzione in stato completamente disciolto deve essere ulteriormente monitorata lasciandola rimanere a temperatura ambiente per alcune ore prolungate, e quindi filtrata prima di essere utilizzata in vivo.
La determinazione del solve.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto dalla National Natural Science Foundation of China (81973607 e 81573992).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| 1,5 mL di microprovette | Corning Science (Wujiang) Co. | 23218392 | Liquido di mantenimento |
| Essiccatore automatico | Leica Microsystems (Shanghai) Co. | LEICA ASP 300S | Campioni di disidratazione |
| Strisce reattive per la glicemia | Johnson & Johnson (Cina) Medical Equipment Co. | ||
| Centrifuga | MIULAB | Centrifuga Centrifuga | Soluzione centrifuga |
| Essiccatore | Leica Microsystems (Shanghai) Trading Co. | LEICA ASP300S | Disidratazione |
| DMSO | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | Kit | E918BA0041 co-solvente |
| Elabscience Biotechnology Co., Ltd | Kit ELISA per topo COL1 (collagene di tipo I): E-EL-M0325c Mouse Kit CTX I ELISA: E-EL-M0366c Kit ELISA PICP per topo: E-EL-M0231c Kit ELISA PINP per topo: E-EL-M0233c | ||
| Etanolo assoluto | Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd | 10009218 | Co-Solvent |
| Glicole etilenico monoetilete | etere Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | A501118-0500 | Colorazione TRAP |
| Acido etilendiamminotetraacetico (EDTA) | Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd | 10009617 | anticalcare |
| Merck Millpore LTD. | Millex-GP, 0,22 & micro; m | soluzione filtrante | |
| Acido glaciale | Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd | 10000218 | TRAP colorazione |
| Glucometro | Johnson & Johnson (Cina) Medical Equipment Co. | One Touch Ultra Vue | Numero di serie: COJJG8GW |
| Grinder | Shanghaijingxin Tecnologia sperimentale | Tissuelyser-24 | |
| Ematossilina | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | D005 | TRAP colorazione |
| Siringa da insulina | Shanghai Kantaray Medical Devices Co. | 0,33 mm x 13 mm, RW LB | Iniezione intraperitoneale |
| acido tartarico L-(+) | Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd | 100220008 | Colorazione TRAP |
| Microscopio | OLYMPUS | sz61 | Microtomo di osservazione |
| Leica Microsystems (Shanghai) Trading Co. | LEICA RM 2135 | Sezione | |
| Mini centrifuga | Hangzzhou Miu Instruments Co., Ltd. | Mini-6KC | Centrifuga |
| Naftolo AS-BI fosfato | SIGMA-ALDRICH | BCBS3419 | TRAP colorazione |
| Naringenin | Jiangsu Yongjian Pharmaceutical Co., Ltd | 102764 | Stazione |
| inclusione di soluto paraffina | Leica Microsystems (Shanghai) Co. | LEICA EG 1150 H, LEICA EG 1150 C | Embed campioni |
| pararosanilina base | BBI Life Sciences | E112BA0045 | colorazione TRAP |
| Pipette | eppendorf | 2– 20 µ L, 100– 1000 µ L, 20– 200 µ L | transferre Lettore di piastre liquide |
| BioTek Instruments USA, Inc. | Lettore di immagini BioTek CYTATION 3 | ELISA | |
| Shanghai | Yyang Instrument Co., Ltd. | Balsamo neutro | TRAP |
| soluzione salina per colorazione (0,9 PS) | Baxter Healthcare (Shanghai) Co., Ltd | A6E1323 | Solvente |
| Acetato di sodio anidro | Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd | Merck-1.06268.0250 | 250g | Colorazione TRAP |
| Nitrito di sodio | Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd | 10020018 | Colorazione TRAP |
| Tween-80 | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | E819BA0006 | |
| Emulsionante Perline di zirconia | Shanghaijingxin Tecnologia sperimentale | 11079125z 454g | Macinazione |
Riferimenti
- Stoye, D. Solvents. Ullmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry. , Wiley Online Library. (2000).
- Bouchard, D., et al. Optimization of the solvent-based dissolution method to sample volatile organic compound vapors for compound-specific iso....
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Ristampe e permessi
