Qui mostriamo diversi test in vivo (potenziale evocato visivo flash, elettroretinogramma pattern e tomografia a coerenza ottica) in macaco di capra e rhesus per comprendere la struttura e la funzione del nervo ottico e dei suoi neuroni.
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Articolo metodologico
In vivo Metodi per valutare la funzione e la struttura delle cellule gangliari retiniche e del nervo ottico in animali di grandi dimensioni
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il nervo ottico raccoglie i segnali degli assoni dalle cellule gangliari retiniche e trasmette il segnale visivo al cervello. I grandi modelli animali di lesioni del nervo ottico sono essenziali per tradurre nuove strategie terapeutiche dai modelli di roditori all'applicazione clinica a causa delle loro somiglianze più strette con gli esseri umani in termini di dimensioni e anatomia. Qui descriviamo alcuni metodi in vivo per valutare la funzione e la struttura delle cellule gangliari retiniche (RGC) e del nervo ottico (ON) in animali di grandi dimensioni, tra cui il potenziale evocato visivo (VEP), l'elettroretinogramma pattern (PERG) e la tomografia a coerenza ottica (OCT). Sia la capra che il primate non umano sono stati impiegati in questo studio. Presentando questi metodi in vivo passo dopo passo, speriamo di aumentare la riproducibilità sperimentale tra diversi laboratori e facilitare l'uso di grandi modelli animali di neuropatie ottiche.
Introduzione
Il nervo ottico (ON), costituito da assoni delle cellule gangliari retiniche (RGC), trasmette il segnale visivo dalla retina al cervello. Le malattie ON, come il glaucoma, la neuropatia ottica traumatica o ischemica, spesso causavano una degenerazione irreversibile di ON / RGC e una devastante perdita visiva. Sebbene attualmente ci siano molte scoperte nella rigenerazione ON e nella protezione RGC nei modelli di roditori1,2,3,4,5,6, i trattamenti clinici per la maggior parte delle malattie ON sono rimasti essenzialmente gli stessi nell'ultimo mezzo secolo con esiti insoddisfacenti7,8
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Protocollo
Gli esperimenti sono stati condotti rigorosamente in conformità con le linee guida ARRIVE e la guida del National Institutes of Health per la cura e l'uso di animali da laboratorio e aderiscono ai protocolli approvati dall'Institutional Animal Care and Use Committee della Wenzhou Medical University (WMU) e del Joinn Laboratory (Suzhou). Le capre Saanen maschio, di età compresa tra 4 e 6 mesi con peso di 19-23 kg, sono state ospitate nella struttura per animali WMU. I macachi Rhesus maschi, di età compresa tra 5 e 6 anni con un peso di 5-7 kg, sono stati ospitati nella struttura per animali di Joinn. Tutti gli animali sono stati mantenuti in una stanza climatizzata a t....
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Risultati
La Figura 1A mostra i risultati rappresentativi di FVEP nella capra. Sebbene le forme d'onda con la stessa intensità del flash abbiano una somiglianza relativa, raccomandiamo comunque di esaminare le forme d'onda due volte. Le onde elettromagnetiche generate dai dispositivi elettronici interferiranno con i segnali elettrici raccolti, con conseguente elevato rumore di base e scarsa ripetibilità della forma d'onda. Pertanto, si raccomanda di assicurarsi che non vi siano dispositivi elettronici.......
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Discussione
In questo studio, presentiamo un protocollo di VEP, PERG e OCT in capra e macaco rhesus. Questi metodi in vivo possono essere applicati in modelli animali di grandi dimensioni di varie neuropatie ottiche, come il glaucoma, la neuropatia ottica ischemica o traumatica e la neurite ottica9.
PVEP è più stabile e sensibile di FVEP17; tuttavia, non può essere suscitato in goat9. Come tale, FVEP viene eseguito in capra e.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno conflitti di interesse da divulgare.
Ringraziamenti
Questo studio è stato finanziato dalle seguenti sovvenzioni: National Key R&D Program of China (2021YFA1101200); Progetto di ricerca medica di Wenzhou (Y20170188), National Key R&D Program of China (2016YFC1101200); Fondazione nazionale di scienze naturali della Cina (81770926; 81800842); Programma chiave di ricerca e sviluppo della provincia di Zhejiang (2018C03G2090634); e Key R & D Program del Wenzhou Eye Hospital (YNZD1201902). Lo sponsor o l'organizzazione di finanziamento non ha avuto alcun ruolo nella progettazione o nella conduzione di questa ricerca.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Monitor da 47,6 x 26,8 cm | DELL Inc. | E2216HV | Gli stimoli visivi delle scacchiere in bianco e nero con inversione di contrasto sono stati visualizzati su schermi |
| Tubo tracheale da 6,0 mm | Henan Tuoren Medical Device Co., Ltd | PVC 6.0 | garantire che la clip |
| coccodrillo | |||
| atropina | Guangdong Jieyang Longyang Animal pharmaceutical Co., Ltd. | ridurre la secrezione bronchiale e proteggere il cuore dall'attivazione del nervo vagale | |
| Carbomer Eye Gel | Fabrik GmbH Filiale di Bausch & Lomb | inumidire la cornea e stabilizzare gli elettrodi di registrazione | |
| ERG-Jet Elettrodi di registrazione | Roland Consult Stasche& Finger GmbH | 2300 La Chaux-De-Fonds | ERG registrazione |
| oculare speculum | Shanghai Jinzhong Medical Device Co., Ltd | ZYD020 | fessura palpebrale aperta |
| Heidelberg Spectralis OCT system Heidelberg | Engineering | OCT system | |
| Imaging | ( https://www.heidelbergengineering.com/media/e-learning/Totara-US/files/pdf-tutorials/2238-003_Spectralis-Training-Guide.pdf) | ||
| isoflurano | RWD Life Science Co., Ltd | R510-22 | isoflurano anestesia |
| capra Saanen maschio | Caimu Livestock Company, paese (Hangzhou, Cina) | Le capre Saanen maschio, di età compresa tra 4 e 6 mesi con peso di 19– Elettrodo ad ago da 23 kg | |
| Roland Consult Stasche& Finger GmbH | U51-426-G-D | uso per elettrodo di terra FVEP ed elettrodi di riferimento PERG | |
| catetere venoso periferico per via endovenosa | BD shanghai Medical Device Co., Ltd | 383019 | accesso endovenoso per atropina e propofol |
| propofol | Xian Lipont Enterprise Union Management Co., Ltd. | indurre l'anestesia con isoflurano in | |
| gocce oculari di fenilefrina | di capra SANTEN OY, Giappone | cloridrato tropicale al 5% e fenilefrina cloridrato al 5% | |
| Gotec Co., Ltd | GT-2008V-III | uso per FVEP & PERG | |
| xilazina | Huamu Animal Health Products Co., Ltd. | Anestesia con xilazina: iniezione intramuscolare di xilazina 3 mg/kg | |
| di zoletil50 | Virbac | induce l'anestesia con isoflurano nella scimmia |
Riferimenti
- Benowitz, L., Yin, Y. Rewiring the injured CNS: lessons from the optic nerve. Experimental Neurology. 209 (2), 389-398 (2008).
- Park, K. K., et al. Promoting axon regeneration in the adult CNS by modulation of the PTEN/mTOR pathway. Science. ....
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Ristampe e permessi
