Tessuto trattato con radioligandi attivati da fluorescenza per determinare l'origine cellulare del segnale radioattivo

Quentin Amossé; Kelly Ceyzériat; Stergios Tsartsalis; Benjamin B. Tournier; Philippe Millet

doi:10.3791/62883

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Articolo metodologico

Tessuto trattato con radioligandi attivati da fluorescenza per determinare l'origine cellulare del segnale radioattivo

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DOI:

10.3791/62883

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10 settembre 2021

Quentin Amossé¹^,² , Kelly Ceyzériat¹^,³^,⁴ , Stergios Tsartsalis¹^,⁵ , Benjamin B. Tournier¹^,² , Philippe Millet¹^,²

¹Division of Adult Psychiatry, Department of Psychiatry, University Hospitals of Geneva, ²Department of Psychiatry, University of Geneva, ³Division of Nuclear medicine and Molecular Imaging, University Hospitals of Geneva, ⁴Division of Radiation Oncology, Department of Oncology, University Hospitals of Geneva, ⁵Department of Brain Sciences, Faculty of Medicine, Imperial College London

In questo articolo

Sommario

Fluorescence-Activated Cell Sorting-Radioligand Treated Tissue (FACS-RTT) è un potente strumento per studiare il ruolo della proteina traslocatore 18 kDa o dell'espressione del recettore della serotonina 5HT_2A nella malattia di Alzheimer su scala cellulare. Questo protocollo descrive l'applicazione ex-vivo di FACS-RTT nel modello di ratto TgF344-AD.

Abstract

Le cellule gliali hanno probabilmente una notevole implicazione nella fisiopatologia delle malattie neurodegenerative, come il morbo di Alzheimer (AD). Le loro alterazioni sono forse associate a uno stato pro-infiammatorio. Il ceppo di ratto TgF344-AD è stato progettato per esprimere i geni umani APP e PS1_ΔE9umani, codificando per le proteine amiloidi Aβ-40 e Aβ-42 e mostra patologia amiloide e deficit cognitivi con l'invecchiamento. Il modello di ratto TgF344-AD viene utilizzato in questo studio per valutare l'origine cellulare del legame della proteina traslocatrice 18 kDa (TSPO, un marcatore di attivazione delle cellule gliali) e dei livelli del recettore della serotonina 5HT_2A (5HT_2AR) che sono potenzialmente interrotti nell'AD. La tecnica qui presentata è Fluorescence-Activated Cell Sorting to Radioligand Treated Tissue (FACS-RTT), una tecnica quantitativa specifica per tipo cellulare complementare alle tecniche in vivo PET o SPECT o autoradiografia ex vivo / in vitro . Quantifica lo stesso tracciante radiomarcato utilizzato in precedenza per l'imaging, utilizzando un contatore di γ dopo lo smistamento delle cellule citometriche. Ciò consente di determinare l'origine cellulare della proteina radiomarcata con elevata specificità e sensibilità cellulare. Ad esempio, studi con FACS-RTT hanno dimostrato che (i) l'aumento del legame TSPO era associato alla microglia in un modello di ratto di neuroinfiammazione indotta da lipopolisaccaride (LPS), (ii) un aumento del legame TSPO a 12 e 18 mesi è stato associato prima agli astrociti, e poi alla microglia nei ratti TgF344-AD rispetto ai ratti wild type (WT) e (iii) alla densità striatale di 5HT_2A R diminuisce negli astrociti a 18 mesi nello stesso modello di AD di ratto. È interessante notare che questa tecnica può essere estesa praticamente a tutti i radiotraccianti.

Introduzione

Le malattie neurodegenerative, come il morbo di Alzheimer (AD), sono caratterizzate da una perdita neuronale associata ad un aumento dei sintomi. L'AD, la causa più comune di demenza, che rappresenta il 60%-70% dei casi, colpisce circa 50 milioni di persone in tutto il mondo¹. A livello neuropatologico, le due principali caratteristiche dell'AD sono l'accumulo di placche extracellulari amiloide-β (Aβ) e grovigli neurofibrillari intracellulari Tau. Alterazioni delle cellule gliali sono state anche associate all'AD² e alla possibile interruzione di diversi sistemi di neurotrasmettitori ^3,4