I modelli di roditori di discinesie indotte da L-DOPA sono strumenti preziosi per identificare interventi terapeutici per attenuare lo sviluppo o alleviare le manifestazioni che emergono a causa della somministrazione ripetuta di L-DOPA. Questo protocollo dimostra come indurre e analizzare movimenti di tipo discinetico nel modello di ratto unilateralmente 6-OHDA-lesioned della malattia di Parkinson.
È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Articolo metodologico
Valutazione delle discinesie indotte da L-DOPA nel modello di ratto unilateralmente 6-OHDA-lesioned della malattia di Parkinson
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
Le discinesie indotte da L-DOPA (LID) si riferiscono a complicanze motorie che derivano dalla somministrazione prolungata di L-DOPA a pazienti con malattia di Parkinson (PD). Il modello più comune osservato nella clinica è la discinesia a dose di picco che consiste in manifestazioni cliniche di movimenti coreiformi, distonici e balistici. Il modello di ratto 6-idrossidopamina (6-OHDA) del PD imita diverse caratteristiche dei LID. Dopo ripetuta somministrazione di l-dopa, ratti con lesione 6-OHDA mostrano movimenti discinetici-simili (ad esempio, movimenti involontari anormali, AIM). Questo protocollo dimostra come indurre e analizzare gli AIM in ratti con lesione 6-OHDA con deplezione dopaminergica del 90%-95% nella via nigrostriatale. La somministrazione ripetuta (3 settimane) di L-DOPA (5 mg/kg, in combinazione con 12,5 mg/kg di benserazide) può indurre lo sviluppo di AIM. L'analisi del decorso temporale rivela un aumento significativo delle AIM a 30-90 minuti (discinesia a dose di picco). I modelli di roditori di LID sono un importante strumento preclinico per identificare efficaci interventi antidiscinetici.
Introduzione
Il precursore della dopamina L-3,4-diidrossifenilalanina (L-DOPA) rappresenta il trattamento più efficace per i sintomi motori della malattia di Parkinson (PD)1. La terapia con l-dopa può migliorare i sintomi motori associati al PD, ma perde efficacia con il tempo. Fluttuazioni motorie come "fluttuazione di usura" o "deterioramento di fine dose" si manifestano clinicamente come una durata ridotta dell'effetto di singole dosi di L-dopa2. In altri casi, le manifestazioni cliniche consistono in movimenti lenti di torsione e posture anomale (distonia)3 e si verificano quando i livelli di dopamina sono....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Protocollo
Tutti gli esperimenti sono stati eseguiti in conformità con il Comitato Etico della Facoltà di Filosofia, Scienze e Lettere di Ribeirão Preto (CEUA/FFCLRP 18.5.35.59.5).
1. Lesione 6-OHDA
- Utilizzare ratti maschi Sprague-Dawley del peso di 200-250 g all'inizio degli esperimenti (6 settimane). Ospitare gli animali (2-3 per gabbia) in condizioni standard di laboratorio (12:12 h ciclo luce/buio, luci accese alle 06:00, impianti a temperatura controllata (22-24 °C), con cibo e acqua disponibili ad libitum.
NOTA: Una descrizione completa di come generare ratti gravi con lesione 6-OHDA è descritta altrove
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Risultati
Sebbene i modelli di AIM osservati nei ratti siano più semplici e limitati rispetto a quelli osservati negli esseri umani e nei primati non umani, questo modello riproduce sia movimenti ipercinetici che distonici indotti dalla somministrazione cronica di L-DOPA. Qui presentiamo i dati raccolti da un gruppo (n = 10) di ratti con lesione unilaterale 6-OHDA trattati cronicamente con L-DOPA (5 mg / kg combinati con 12,5 mg / kg di benserazide) per 3 settimane (dal lunedì al venerdì). Si noti che i dati presentati nelle
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Discussione
Questo protocollo dimostra come indurre e analizzare gli AIM nel modello di ratto di PD indotto da microiniezione unilaterale di 6-OHDA nella MFB. La somministrazione giornaliera cronica di basse dosi di L-DOPA (5 mg/kg, in combinazione con 12,5 mg/kg di benserazide) ha prodotto lo sviluppo di AIM nel corso delle 3 settimane di trattamento. L'analisi temporale ha rivelato un aumento significativo delle AIM e la discinesia di picco si osserva tra 30 e 90 minuti dopo la somministrazione di L-DOPA. Gli AIM sono movimenti ri.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Dichiarazioni
Gli autori non hanno conflitti di interesse.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto dalla Fondazione di ricerca di San Paolo (FAPESP, sovvenzione 2017/00003-0). Siamo grati per il Coordinamento per il miglioramento del personale dell'istruzione superiore (CAPES). Ringraziamo il Dr. Anthony R. West, il Dr. Heinz Steiner e il Dr. Kuei Y. Tseng per il supporto e il mentoring.
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| 6-idrossidopamina bromidrato | Sigma-Aldrich, USA | H6507 | Neurotossina che produce la degenerazione dei terminali catecolaminergici |
| Benzerazide cloridrato | Sigma | B7283 | Inibitore periferico della dopa-decarbossilasi |
| Camera Bullet IR Turbo HD (HD-TVI) 2.8mm B | HIKVISION | DS-2CE16C0T-IRP | Telecamera utilizzata per registrare tutti i comportamenti |
| Imipramina ibitore | trasportatore della noradrenalina (NET) utilizzato per proteggere i neuroni noradrenergici dalla 6-OHDA | ||
| Ketamina cloridrato | Ceva Animal Health | Anestesia per intervento chirurgico | |
| L-3,4-diidrossifenilalanina (L-DOPA) estere metilico (cloridrato) | Cayman Chemical Company | 16149 | precursori |
| della | dopaminaUtilizzato per osservare il comportamento degli animali durante gli esperimenti in tutte le direzioni | ||
| Aghi 0,30 x 13 mm | PrecisionGlide | Aghi utilizzati per iniettare farmaci | |
| Cloruro di sodio (NaCl) | sale | Samtec | |
| 1 ml Siringhe sterili | BD Plastipak | utilizzate per iniettare farmaci | |
| Cilindri trasparenti | esperimenti | ||
| Xilazina cloridrato | Ceva Animal Health | Sedativo, analgesico e miorilassante per intervento chirurgico |
Riferimenti
- Jenner, P. Molecular mechanisms of L-DOPA-induced dyskinesia. Nature Reviews. Neuroscience. 9 (9), 665-677 (2008).
- Nutt, J. G. Levodopa-induced dyskinesia: review, observations, and speculations. Neurology. 40 (2), 340-345 (1990).
- Luquin, M. R....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Ristampe e permessi
