Dissociazione meccanica ed enzimatica combinata del tessuto ippocampale cerebrale del topo

Madison Trujillo; Taylor McElroy; Taurean Brown; Pilar Simmons; Fabio Ntagwabira; Antiño R. Allen

doi:10.3791/63007

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Articolo metodologico

Dissociazione meccanica ed enzimatica combinata del tessuto ippocampale cerebrale del topo

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DOI:

10.3791/63007

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21 ottobre 2021

Madison Trujillo¹^,²^,³ , Taylor McElroy¹^,²^,³ , Taurean Brown¹^,²^,³ , Pilar Simmons¹^,² , Fabio Ntagwabira¹^,²^,³ , Antiño R. Allen¹^,²^,³

¹Division of Radiation Health, University of Arkansas for Medical Sciences, ²Department of Pharmaceutical Sciences, University of Arkansas for Medical Sciences, ³Neurobiology & Developmental Sciences, University of Arkansas for Medical Sciences

In questo articolo

Sommario

Questo protocollo di dissociazione delle cellule neurali è destinato a campioni con una bassa quantità di materiale di partenza e produce una sospensione monocellulare altamente vitale per l'analisi a valle, con fasi opzionali di fissazione e colorazione.

Abstract

Questo protocollo di dissociazione neurale (un adattamento del protocollo che accompagna un kit di dissociazione cerebrale adulto commerciale) ottimizza l'elaborazione dei tessuti in preparazione di analisi dettagliate a valle come la citometria a flusso o il sequenziamento a singola cellula. La dissociazione neurale può essere condotta tramite dissociazione meccanica (come l'uso di filtri, tecniche di taglio o triturazione di pipette), digestione enzimatica o una combinazione di questi. La natura delicata delle cellule neuronali può complicare gli sforzi per ottenere la vera sospensione monocellulare altamente vitale con detriti cellulari minimi necessari per l'analisi a singola cellula. I dati dimostrano che questa combinazione di dissociazione meccanica automatizzata e digestione enzimatica produce costantemente una sospensione unicellulare altamente vitale (>90%), superando le difficoltà di cui sopra. Mentre alcuni dei passaggi richiedono destrezza manuale, questi passaggi riducono la gestione del campione e la potenziale perdita di cellule. Questo manoscritto descrive in dettaglio ogni fase del processo per dotare altri laboratori di dissociare con successo piccole quantità di tessuto neurale in preparazione per l'analisi a valle.

Introduzione

L'ippocampo fu descritto per la prima volta da un anatomista bolognese, Giulio Cesare Aranzio, nel 1500¹. Nel nominare questa nuova struttura, Aranzio è stato probabilmente ispirato dalla sua strana somiglianza con il cavalluccio marino del genere Hippocampus¹. L'ippocampo è coinvolto nelle risposte allo stress, ma è ampiamente noto per il suo ruolo nell'apprendimento e nella memoria. Più specificamente, l'ippocampo è responsabile della codifica e del recupero della memoria dichiarativa e spaziale¹.

L'ippocampo, o ippocampo vero e proprio, è diviso nei sottocam....