L'obiettivo di questo protocollo è quello di rilevare metaboliti fenolici nel plasma utilizzando un metodo di cromatografia-spettrometria di massa semi-mirato.
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Articolo metodologico
Cromatografia semi-mirata ad altissime prestazioni accoppiata all'analisi spettrometrica di massa di metaboliti fenolici nel plasma di anziani
In questo articolo
Sommario
Abstract
A un gruppo di 23 persone anziane sono stati somministrati pasti funzionali (una bevanda e un muffin) appositamente formulati per la prevenzione della sarcopenia (perdita di massa muscolare legata all'età). I campioni di plasma sono stati prelevati all'inizio dell'intervento e dopo 30 giorni di consumo dei pasti funzionali. È stata effettuata una cromatografia semi-mirata ad altissime prestazioni abbinata all'analisi di massa tandem (UPLC-MS/MS) per identificare i composti fenolici e i loro metaboliti. Le proteine plasmatiche sono state precipitate con etanolo e i campioni sono stati concentrati e risospesi nella fase mobile (acetonitrile 1:1: acqua) prima dell'iniezione nello strumento UPLC-MS/MS. La separazione è stata effettuata con una colonna di fase inversa C18 e i composti sono stati identificati utilizzando la loro massa sperimentale, la distribuzione isotopica e il modello di frammento. I composti di interesse sono stati confrontati con quelli delle banche dati e della libreria semi-mirata interna. I risultati preliminari hanno mostrato che i principali metaboliti identificati dopo l'intervento erano acido fenilacetico, glicina, acido 3-idrossifenilvalerico e gomisina M2.
Introduzione
La sarcopenia è un disturbo scheletrico progressivo correlato ad una perdita accelerata di muscoli nella popolazione anziana. Questa condizione aumenta il rischio di cadute e porta a attività limitate della vita quotidiana. La sarcopenia è presente in circa il 5%-10% delle persone di età superiore ai 65 anni e in circa il 50% delle persone di età pari o superiore a 80 anni1. Non sono stati approvati farmaci specifici per il trattamento della sarcopenia, quindi la prevenzione con l'attività fisica e una dieta equilibrata è importante1,2. Gli interventi nutrizionali ....
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Protocollo
I campioni di plasma utilizzati in questo protocollo sono stati raccolti in uno studio precedente seguendo tutte le linee guida etiche e approvati dal Comitato istituzionale di etica e bioetica (CIEB-2018-1-37) dell'Universidad Autónoma de Ciudad Juárez. Il protocollo completo per l'estrazione e l'identificazione dei composti fenolici e dei metaboliti nel plasma da parte di UPLC-MS/MS è rappresentato nella Figura 1.
Figura 1
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Risultati
Il processo passo-passo per l'identificazione dei metaboliti fenolici attraverso l'analisi semi-mirata UPLC-MS/MS, in modalità negativa, di campioni di plasma è illustrato nella Figura 2. In primo luogo, il cromatogramma ionico totale (TIC) dall'estratto fenolico plasmatico (ottenuto dopo la precipitazione proteica del campione plasmatico totale) è stato ottenuto attraverso il software qualitativo dello strumento. Successivamente, è stato utilizzato il cromatogramma ion.......
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Discussione
L'identificazione e la quantificazione dei fitochimici bioattivi che vengono assorbiti dopo il consumo di un alimento o di un integratore alimentare sono cruciali per dimostrare e comprendere i benefici per la salute di questi composti e degli alimenti che li contengono. Nel presente lavoro è stato sviluppato il metodo UPLC-MS/MS, finalizzato unicamente all'identificazione dei principali composti fenolici e dei loro metaboliti che sono aumentati di concentrazione nel plasma dopo un intervento nutrizionale di 30 giorni co.......
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Dichiarazioni
Tutti gli autori non dichiarano alcun conflitto di interessi.
Ringraziamenti
Gli autori sono grati per il sostegno finanziario di CONACYT, Messico (CB- 2016-01-286449) e UACJ-PIVA (Progetti 313-17-16 e 335-18-13). OAMB desidera ringraziare CONACYT per la sua borsa di studio di dottorato. Il supporto tecnico dell'ufficio di produzione multimediale di UACJ è grato.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Acetonitrile | Tedia | Al1129-001 | LC Spettrometria di massa |
| Autocampionatore | Agilent Technologies | G4226A | 1290 Infinity serie |
| C18 colonna di fase inversa | Agilent Technologies | 959757-902 | Zorbax Eclipse plus C18 2,1x50 mm, 1,8 μ m; Centrifuga HD a risoluzione rapida |
| Eppendorf | 5452000018 | Mini Spin; Rotore F-45-12-11 | |
| Vano colonna con termostato | Agilent Technologies | G1316C | 1290 |
| Rivelatore a matrice di diodi serie Infinity (UV-Vis) | Agilent Technologies | G4212B | 1260 Sorgente |
| ionizzazione elettrospray | Infinity Agilent Technologies | G3251B | Spruzzatore doppio Fonte ESI |
| Acido formico | J.T. Baker | 0128-02 | Reagente Baker, ACS |
| Mass Hunter Acquisizione dati | Agilent Technologies | G3338AA | |
| Mass Hunter Personal Compound Datbase e Library Manager | Agilent Technologies | G3338AA | |
| Analisi qualitativa Mass Hunter | Agilent Technologies | G3338AA | |
| Provetta per microcentrifuga | Marca | BR780546 | Provetta per microcentrifuga, 2 mL con coperchio |
| Pure etanolo | Sigma-Aldrich | E7023-1L | 200 proof, per biologia molecolare |
| Q-TOF LC/MS | Agilent Technologies | G6530B | 6530 Pompa |
| quaternaria | Agilent Technologies | G4204A | 1290 Filtro |
| per siringa | Infinity Thermo Scientific | 44514-NN | 17 mm, 0,45 μ m, membrana in nylon |
| Termostato | Agilent Technologies | G1330B | 1290 Fiala serie Infinity |
| Agilent Technologies | 8010-0199 | Ambra, PFTE silicone rosso 2 mL con tappo a vite e tappi blu | |
| Inserto per fiala | Agilent Technologies | 5183-2089 | Inserto per fiala 200 μ L per 2mL apertura standard, acqua conica |
| Tedia | WL2212-001 | LC Spettrometria di massa |
Riferimenti
- Morley, J. E., Anker, S. D., von Haehling, S. Prevalence, incidence, and clinical impact of sarcopenia: facts, numbers, and epidemiology-update 2014. Journal of Cachexia, Sarcopenia and Muscle. 5 (4), 253-259 (2014).
- Cruz-Jentoft, A. J., Sayer, A. A. Sarcopenia.
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Ristampe e permessi
