Abilità microchirurgiche di stabilire la cannulazione permanente della vena giugulare nei ratti per il campionamento seriale del sangue del farmaco somministrato per via orale

Sommario

Tecniche microchirurgiche dettagliate sono dimostrate per stabilire un modello di ratto di cannulazione della vena giugulare a lungo termine per la raccolta sequenziale del sangue nello stesso animale. I parametri fisiologici ed ematologici sono stati monitorati durante la fase di recupero del ratto. Questo modello è stato applicato per studiare la farmacocinetica del polifenolo somministrato per via orale senza indurre stress animale.

Abstract

Il prelievo di sangue in piccoli animali da laboratorio è necessario per l'ottimizzazione del piombo farmaceutico, ma può causare gravi danni e stress agli animali da esperimento, che potrebbero potenzialmente influenzare i risultati. La cannulazione venosa giugulare (JVC) nei ratti è un modello ampiamente utilizzato per la raccolta ripetuta di sangue, ma richiede un'adeguata formazione delle abilità chirurgiche e della cura degli animali. Questo articolo descrive in dettaglio le procedure microchirurgiche per stabilire e mantenere un modello di ratto JVC permanente con particolare attenzione al posizionamento e alla sigillatura della cannula giugulare. L'importanza del monitoraggio dei parametri fisiologici (ad esempio, peso corporeo, cibo e assunzione di acqua) ed ematologici, è stata evidenziata con risultati presentati per 6 giorni dopo l'intervento chirurgico durante il recupero del ratto. Il profilo farmaco-concentrazione plasmatica-tempo dell'acido fenolo ellagico naturale somministrato per via orale è stato determinato nel modello di ratto JVC.

Introduzione

L'acquisizione ripetuta di campioni di sangue da piccoli animali da laboratorio, come roditori, porcellini d'India e conigli, è un aspetto importante per l'ottimizzazione del piombo farmaceutico e anche per ridurre il numero di animali utilizzati nella ricerca ^1,2. La pipeline per lo sviluppo di nuovi strumenti diagnostici e la formulazione di farmaci (ad esempio, vaccino) richiede l'accesso a diversi volumi di sangue al fine di valutarne la robustezza e le prestazioni in vivo, come la farmacocinetica (PK), la tossicità e la sensibilità ^3,4,5<....

Protocollo

Le procedure descritte di seguito sono state eseguite nell'ambito di un protocollo approvato dall'Institutional Animal Care and Use Committee della Northwestern Polytechnical University (n. 202101117).

1. Preparazione preoperatoria (il giorno prima dell'intervento)

NOTA: Soluzioni richieste: soluzione salina normale (0,9% p/v di cloruro di sodio), soluzione salina eparinizzata (1% p/v di eparina sodica), soluzione di blocco del catetere, farmaco antinfiammatorio non steroideo (FANS), come la soluzione di meloxicam (2 mg/mL).

1. Preparazione della soluzione
   1. Aliquota 200 μL di soluzi....

Risultati

Questo protocollo ha dimostrato a fondo come stabilire un modello JVC a lungo termine utilizzando competenze microchirurgiche per la raccolta seriale di sangue. La Figura 1A mostra gli strumenti chirurgici essenziali e i materiali utilizzati per condurre l'intervento chirurgico. Viene anche illustrata la specifica del catetere PU con tre segni blu, che è utile per guidare il ricercatore a posizionare la cannula venosa nel passaggio 3.3., come utilizzare i segni sul catetere PU per g.......

Discussione

Padroneggiare la tecnica della cannulazione dei vasi richiede una pratica significativa e l'apprendimento della lezione da ogni operazione. Christakis et al. utilizzando l'analisi della somma cumulativa (CUSUM), hanno scoperto che un ricercatore deve praticare 200 ratti per un periodo di un anno prima di essere pronto per la valutazione PK dei farmaci candidati²⁰. Tuttavia, il tempo operativo richiesto per la cannulazione venosa può essere significativamente ridotto dal numero di ratti eseguiti

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Provetta da 0,5 mL contenente l'anticoagulante EDTA	Xinkang	N/A Raccolta	di campioni di sangue per il test ematologico
Siringa da 0,5*20 mm da 1,0 mL	KLMEDICAL	N/A Lavaggio	o sostituzione del fluido con soluzione fisiologica
Siringa da 0,6*28,5 mm da 5,0 mL	HD	N/A	Iniezione sottocutanea
da 1,0 mL Siringa con punta smussata (22G)	skillsmodel	S4-PKT22G	Iniettare la soluzione salina e raccogliere campioni di sangue attraverso il catetere
Provetta per microcentrifuga sterile da 1,5 mL	Axygen	MCT-150-C-S Conservare	soluzione di blocco del catetere sterile, soluzione salina eparinizzata e soluzione di meloxicam
1,5  provette per microcentrifuga da ml	Biosharp	BS-15-M	raccolta di sangue
1/2  taglio circolare 5*12 mm ago di sutura	skillsmodel	S4-FHZ	Infilare lo strato muscolare per fissare il catetere
taglio a 3/8 di cerchio 7*17 mm ago di sutura	skillsmodel	S5-FHZ	Suturare l'incisione della corteccia di ratto
6-0 filo di sutura di seta sterile non assorbibile	JUNSHENG	Legatura N/A
75% di alcol medico	HONGSONG	N/A	Disinfezione
Nastro adesivo	LIUTAI	N/A	posizionamento del ratto
Nastro di sterilizzazione in autoclave	Biosharp	BS-QT-028	Contrassegnare gli articoli sterilizzati
Contatore automatizzato di cellule del sangue	Sysmex	XN-550	Test ematologico
Castroviejo micro forbici	skillsmodel	WA1010	Tagliare l'apertura nel vaso sanguigno
Centrifuga	Thermo Fisher Scientific	75002402	Preparazione del plasma
Cuscino pulito	Qingjie	N/A	Preparare l'area operatoria
Batuffoli di cotone	HC	N/A	Disinfezione e sterilizzazione delle ferite
Tamponi di cotone	BEITAGOGO	N/A	Disinfezione
Emostatico	curvoskillsmodel	Legatura N/A
DN50 Abilità di contenimento dei ratti in acciaio inossidabile		S4-RGDQ1	Limitare il movimento dei ratti per un facile funzionamento
Acido ellagico	Aladino	E102710-25g	fenolo naturale per somministrazione orale
Forcipe semicurva	skillsmodel	53072	Sollevare lo strato muscolare e il tessuto, isolare la vena giugulare e legare la sutura
Pad riscaldante	Warm mate	N/A	che previene la perdita di calore dell'eparina sodica animale
	Solarbio	H8060	anticoagulante
Iodophor	Xidebao	N/A Pulire	la ferita Forbici dell'iride
	skillsmodel	54002	Separazione Bluent lo strato muscolare
Isoflurano	RWD	R510-22-16
lampada	a LED per anestesiaEMPERORFEEL	N/A	sugery
Cromatografia liquida-spettroscopia di massa	Thermo Fisher Scientific	VQF01-20001/ TSQ02-10002	rilevamento della concentrazione di farmaco nel plasma
Meloxicam	Hongqiang	N/A	Analgesico
Soluzione salina normale	KL	N/A	Preparare la soluzione e proteggere i vasi sanguigni dall'essiccamento
Rasoio per animali domestici	Codos	3180	Rasatura del pelo
Soluzione salina tamponata con fosfato	ZHHC	PW012	Preparazione della soluzione di acido ellagico
Catetere PU	skillsmodel	RJVC-PU	Incannulamento della vena giugulare
Console per anestesia per operazioni su piccoli animali	RWD	68620	Stazione di lavoro operativa
Flacone spray	Altro	/A	workstation asettica
Tappo in acciaio inossidabile (22G)	skillsmodel	S4-PKD22G	Collegare il catetere per garantirne la tenuta
Abilità del trochar in acciaio inossidabilemodello		S$-PKDGZ	Guidare l'esteriorizzazione del catetere
Abilità della soluzione di blocco sterilemodello		SK-FB	bloccare il catetere per garantirne la sterilità Abilità dell'ago
per l'alimentazione diritta		modello N/A	Sonda
orale Sacca chirurgica	BKMAM	N/A	contenitore per la sterilizzazione degli strumenti chirurgici
Forbici chirurgiche	skillsmodel	J21070	Incisione di taglio sulla pelle di ratto
Dilatatore del vaso pinza bilanciata	skillsmodel	WA3020	Espandere il vaso sanguigno e guidare la cannula per far scorrere
ZS-MV Macchina per anestesia per piccoli animali	ZSLab ZSLab	1057003	indurre e mantenere l'anestesia

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