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Articolo metodologico

Un contrasto di tre tecniche di inoculazione utilizzate per determinare la razza di Fusarium oxysporum sconosciuto f.sp. niveum Isola

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DOI:

10.3791/63181

28 ottobre 2021

* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

La gestione dell'appassimento del Fusarium dell'anguria richiede la conoscenza delle razze patogene presenti. Qui, descriviamo il root-dip, la semina del kernel infestato e i metodi di inoculazione a immersione del vassoio modificati per dimostrare la loro efficacia nella tipizzazione della razza del fungo patogeno Fusarium oxysporum f. sp niveum (Fon).

Abstract

L'appassimento del fusarium dell'anguria (Citrullus lanatus), causato dal Fusarium oxysporum f. sp. niveum (Fon), è riemerso come un importante vincolo di produzione nel sud-est degli Stati Uniti, in particolare in Florida. L'implementazione di strategie di gestione integrata dei parassiti, come le cultivar resistenti specifiche per razza, richiede informazioni sulla diversità e la densità di popolazione dell'agente patogeno nei campi dei coltivatori. Nonostante alcuni progressi nello sviluppo di strumenti diagnostici molecolari per identificare gli isolati di patogeni, la determinazione della razza richiede spesso approcci di biodosaggio.

La tipizzazione della razza è stata condotta mediante inoculazione root-dip, metodo di semina del kernel infestato e metodo di immersione del vassoio modificato con ciascuno dei quattro differenziali di anguria (Black Diamond, Charleston Grey, Calhoun Grey, Plant Introduction 296341-FR). Agli isolati viene assegnata una designazione di razza mediante il calcolo dell'incidenza della malattia cinque settimane dopo l'inoculazione. Se meno del 33% delle piante per una particolare cultivar erano sintomatiche, sono state classificate come resistenti. Quelle cultivar con incidenza superiore al 33% sono state considerate sensibili. Questo articolo descrive tre diversi metodi di inoculazione per accertare la razza, il root-dip, il kernel infestato e l'inoculazione a vassoio modificato, le cui applicazioni variano a seconda del disegno sperimentale.

Introduzione

I funghi terrestri che compongono il complesso di specie Fusarium oxysporum (FOSC) sono patogeni emibiotrofici di impatto che possono causare gravi malattie e perdita di resa in una vasta gamma di colture1. L'appassimento del fusarium dell'anguria, causato da F. oxysporum f. sp. niveum (Fon), è aumentato in portata, incidenza e gravità in tutto il mondo negli ultimi decenni 2,3. Nelle piantine, i sintomi dell'appassimento di Fusarium spesso assomigliano allo smorzamento. Nelle piante più vecchie, il fogliame diventa grigio, clorotico e necrotico. Alla....

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Protocollo

1. Determinazione della razza mediante il metodo root-dip (RDM)

  1. Preparazione dell'ambiente sperimentale
    1. Poiché l'espressione dei sintomi dipende fortemente dalle condizioni ambientali, mantenere le piante in un'area controllata. Monitorare l'umidità relativa, la temperatura, il fotoperiodo e l'intensità della luce (Figura 1).
      1. Impostare la temperatura a 26-28 °C, l'umidità relativa al 50-75% e impostare un fotoperiodo di 16 ore per garantire un'adeguata crescita e salute delle piante.
        NOTA: Per prevenire l'ipossia, l'avvizzimento della piantina e / o la putrefazione dei semi, non innaffiare ecc....

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Risultati

Questi esperimenti aiutano a definire la resistenza relativa delle cultivar comunemente coltivate (Tabella 1). Queste informazioni possono quindi essere utilizzate per guidare le raccomandazioni di gestione basate sulle popolazioni Fon locali. In altre parole, se la razza 0 o 1 è nota per essere presente in un campo commerciale, allora l'agricoltore può essere incline a coltivare una varietà "resistente" come Calhoun Gray, Sunsugar o equivalente. I risultati dei biosaggi che utilizzano tutti i metodi mos.......

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Discussione

Sono stati presentati tre metodi di tipizzazione della razza. Ognuno di questi metodi è più adatto a particolari domande e condizioni sperimentali. Il metodo di inoculazione del kernel infestato (infestazione del suolo) è forse più semplice e diretto, rendendolo particolarmente utile per la valutazione della patogenicità30. L'uso di questo metodo per la semplice digitazione della razza è altamente efficace. Tuttavia, applicare il metodo per determinare la resistenza di una cultivar specifica potre.......

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Dichiarazioni

Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti.

Ringraziamenti

Vorremmo ringraziare il Dr. Ali e il Plant Molecular Diagnostic Laboratory, nonché il Dr. Pingsheng Ji dell'Università della Georgia, la cui leadership e supporto hanno contribuito a stabilire il nostro programma Fon.

....

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
100% più pieno' s EarthSigma-AldrichF200-5KG
1 L di vetro Erlenmeyer FlaskPYREX4980-1L
15 mL provette falconFisher Scientific14-959-49B
Cilindro graduato da 50 mLSafety Supply41121805
50 mL Eppendorf Conical TubesFisher Scientific05-413-921
Involucrodi alluminioReynolds Wrap720
CandegginaWalmart587192290
Bunsen bruciatoreFisher Scientific03-391-301
CaCO3sigma-Aldrich239216
spandiconcime di celluleFisher Scientific08-100-11
CheeseclothLions Services, Inc8305-01-125-0725
Piatti in plastica trasparenteVisions Wave999RP6CLSS~15 cm di diametro
Tubo in vinile trasparente per morsetti per sacchetti di funghi Fornitura6" per borsa piccola, 8" per borsa media, 10" per borsa grande
Batuffoli di cotoneFisherbrand22-456-885Etanolo sterile
Fisher ChemicalA4094100%, quindi combinare con acqua per ottenere il 70% per l'uso
Luci a tubo fluorescenteMaxLumeModello T52800 K Temperatura di colore, agar granulato lungo 24'' o 48''
VWR International90000-786
Flacone spray portatileAbilità Unematocitometro 24122002~0,95 L
Scientific02-671-55AEmatocitometro a due camere
Vassoi da laboratorioFisher Scientific15-236-2A
Sacchetti di plastica grandi e sigillabiliZiploc43080538 cm x 38 cm
Mister / annaffiatoioBar5FB10H22
Sacchetto per funghi MorsettoShroom Supply6" per borsa piccola, 8" per borsa media, 10" per borsa grande
Guanti in nitrileFisher Scientific19-130-1597D
Organic Rifornimentodi funghiSacchetti da 0,5 galloni o 25 libbre
Pipetta e puntali P1000Fisher Scientific14-388-100
Piastre di PetriFisherbrand FB0875713rotonda, diametro 100 mm, altezza 15 mm
Terreni di piantagioneBrocca in plastica Jolly GardenerPro-Line C/B
BrandTechUX06008501 L o superiore
Vasi in plastica Neo/SCI01-1177~15 cm di diametro e ~10 cm di altezza
Pattumiera in plastica, sicura per autoclaveThermo ScientificUX06010223 L
Terreno di agar destrosio di patate a un quarto di forzaCole-ParmerUX1420028Utilizzare la polvere in combinazione con la ricetta della bilancia scientifica QPDA
, che misura in gOhaus30208458Qualsiasi bilancia precisa in grado di contenere e misurare 200 g funzionerà
Taglia #4 foro in sugheroCole-ParmerNC9585352
Piccolo sacchetto per la coltivazione di funghiShroom SupplyFiltro da 0,5 micron, disponibile anche in dimensioni medie e grandi
Cazzuola per terrenoWalmart563876946
Appartamenti in polistirolo (6 x 12 celle)SpeedlingModello TR72A
Appartamenti in polistirolo (8 x 16 cellule)SpeedlingModello TR128A
Siringa (5 o 10 mL)fisher Scientific14-829-19C
TimerWalmartTM-01
V8 Originale 100% Succo di verduraWalmart564638212
vorticeFisher Scientific02-215-418
Semi di anguria - Black DiamondWillhite Seed Inc17
Semi di anguria - Calhoun GrayHolmes Seed Company4440
Semi di anguria - Charleston GrayBonnie Plants7.15339E + 11
Semi di anguria - PI 296341-FRContatta gli autoriContatta gli autori
Chicchi di grano (Maxie var.) (opzionale)Alachua County Feed & Seme
Lab di funghi Fisher di bacche di segale

Riferimenti

  1. Edel-Hermann, V., Lecomte, C. Current status of Fusarium oxysporum formae speciales and races. Phytopathology. 109 (4), 512-530 (2019).
  2. Everts, K. L., Himmelstein, J. C. Fusarium wilt of watermelon: Towards sustainable management of a re-emerging plant dise....

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Ristampe e permessi

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Fusariosimalattia dell'anguriatipizzazione della razzametodo dell'immersione delle radicimetodo del seme infestatometodo dell'immersione del vassoioisolato del patogenoincidenza della malattiacultivar resistenti