Method Article

Generazione di un modello di ischemia-riperfusione del gancio utilizzando un embrione di pulcino in via di sviluppo di tre giorni

DOI:

10.3791/63288

⸱

February 19th, 2022

 ,  ,  ,  ,  , 
1Laboratory for Stem Cell and Restorative Neurology, Department of Biotechnology, Era’s Lucknow Medical College Hospital, Era University, 2Era University, 3Department of Stem Cell Biology and Regenerative Medicine, Era University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Questo documento descrive la modellazione ischemia-riperfusione (I / R) in un embrione di pulcino di 3 giorni utilizzando un gancio personalizzato con ago spinale per comprendere meglio lo sviluppo e il trattamento I / R. Questo modello è semplice, veloce e poco costoso.

Abstract

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I disturbi da ischemia e riperfusione (I / R), come infarto miocardico, ictus e malattia vascolare periferica, sono alcune delle principali cause di malattia e morte. Molti modelli in vitro e in vivo sono attualmente disponibili per lo studio del meccanismo I/R in malattie o tessuti danneggiati. Tuttavia, ad oggi, non è stato riportato alcun modello I/R in ovo, il che consentirebbe una migliore comprensione dei meccanismi I/R e uno screening farmacologico più rapido. Questo documento descrive la modellazione I / R utilizzando un gancio personalizzato con ago spinale in un embrione di pulcino di 3 giorni per comprendere i meccanismi di sviluppo e trattamento I / R. Il nostro modello può essere utilizzato per studiare le anomalie a livello di DNA, RNA e proteine. Questo metodo è semplice, veloce e poco costoso. Il modello attuale può essere utilizzato indipendentemente o in combinazione con modelli I/R esistenti in vitro e in vivo.

Introduction

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La lesione tissutale da ischemia-riperfusione è stata collegata a una serie di patologie, tra cui infarti, ictus ischemico, traumi e malattie vascolari periferiche1,2,3,4,5. Ciò è dovuto principalmente alla mancanza di una comprensione completa della progressione della malattia e alla mancanza di un modello di ricerca efficace. La lesione ischemica si verifica quando l'afflusso di sangue a un'area specifica del tessuto viene interrotto. Di conseguenza, il tessuto ischemico alla fine necrotizza, anche se il ....

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Protocol

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L'Institutional Animal Ethical Committee presso il Lucknow Medical College and Hospital di Era ha emesso una rinuncia scritta affermando che non era richiesta alcuna approvazione formale per condurre questi esperimenti in conformità con il Comitato per lo scopo del controllo e della supervisione degli esperimenti sugli animali (CPCSEA). Tuttavia, sono state seguite procedure operative standard per ridurre al minimo qualsiasi potenziale di sofferenza embrionale.

1. Preparazione del tampone (tabella 1)

  1. Preparare la soluzione di Ringer
    1. Per preparare la soluzione di Ringer, sciogliere 0,72 g di NaCl (123 mM), ....

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Results

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La tecnica Doppler Blood Flow Imaging è stata utilizzata per valutare l'efficacia del nostro modello. In breve, abbiamo confrontato i dati del gruppo di controllo con i dati del gruppo RVA per determinare il successo della nostra creazione. La Figura 4A raffigura un flusso tipico associato all'animale di controllo, mentre la Figura 4B illustra i risultati ottenuti da un RVA. Il numero 1-8 rappresenta i vari eventi associati alle fasi I/R. In breve, il numero 1-3.......

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Discussion

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L'obiettivo della ricerca ischemia-riperfusione è quello di creare strategie terapeutiche che prevengano la morte cellulare e promuovano il recupero29,30. Per superare gli attuali vincoli nella ricerca I/R, abbiamo progettato un modello di embrione di pulcino Hook I/R per produrre un modello I/R affidabile e riproducibile. Per quanto ne sappiamo, il nostro è il primo modello I / R mai creato in un embrione di pulcino di 3 giorni per esperimenti I / R di routine, .......

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Disclosures

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Gli autori non dichiarano interessi concorrenti.

Acknowledgements

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Vogliamo esprimere la nostra gratitudine a Hari Shankar per i suoi input critici durante la videografia e il montaggio, Baqer Hussain per la voce fuori campo, Asghar Rizvi per il montaggio video, Mohammad Haider per le riprese video, Mohammad Danish Siddiqui per l'assistenza durante gli esperimenti.

....

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
(-80° C) congelatoreHaier,
Tubo da centrifugaTARSONS, India500010X
100mm Petri dish (sterile)Tarsons, India460050
18G Ago (18G&volte; 1,5 (1,25&volte; 38mm)Ramsons, India13990
Siringa da 1 mlDISPO VAN-26G
Ago (26G&volte; 1/2 (10,45x13mm)DISPO VAN, india30722D
37° C incubatrice per uova con percentuale di umidità regolabileGentek, IndiaGL-100
37° incubatore da laboratorio CSCIENCE TECH, IndiaCB 101-14
3-metiladenina (3-MA)Sigma Aldrich, USAM9281
Pipetta da pascolo da 3 mlTARSONS, India940050
Bicchiere da 50 mlTARSONS,India-Siringa
5 mlDISPO VAN, IndiaIP53
70% etanoloMerck Millipore, Stati Uniti64-17-5
Nastro adesivo/nastro per violoncelloSunrise,India-Ambra1
primersApplied Biosystems, Foster city, USAHs00387943_m1
IgG anti-topo, USA7076S
Anti-Rabbit IgGJackson Immuno Research Laboratories, USA711-035-152
Atg7R& D Systems, USAMAB6608
Atg7 primersApplied Biosystems, città di Foster, USAHs00893766_m1
Autoclave BagTarsons, India550022
Autoclave MachineLocal made, Lucknow,India-Beclin-1
Proteintech, USA66665-1-Ig
Beta ActinImmunoTag, USAITT07018
Albumina sierica bovinaHimedia, Mumbai, IndiaTC194
Cloruro di calcioHimedia, Mumbai, IndiaGRM534
CatalasiImmunoTag, USAITT5155
Salviette detergentiKimberly-Clark, India370080
Caspasi scissa3ImmunoTag, USAITT07022
di-sodio idrogeno fosfato eptaidratoHimedia, Mumbai, IndiaGRM39611
Doppler misuratore di flusso sanguignoStrumento Moors, Regno UnitomoorVMS-LDF1
Portauova--
Portauova--
GAPDHImmunoTag, USAM1000110
Primer GAPDHApplied Biosystems, Foster city, USA
GlycineHimedia, Mumbai, IndiaMB013
Vassoio renaleHOSPITO-LC3A
/ BTecnologia di segnalazione cellulare, USA4108S
, Mumbai, IndiaM0252
MicromanipolatoreNarishige, GiapponeM-152
N-acetil-L-cisteina (NAC)Sigma Aldrich, USAA7250
NaringeninSigma Aldrich, USA67604-48-2
NF-kβThermo Fisher Scientific, USA51-0500
NLRP3ImmunoTag, USAITT07438
Pinza per nasoProduzione locale, Lucknow,India-Pinze
oculariStoelting, Germania52106-40
per iride oculareJaipur, IndiaMicro forbici Vannas per età dura angolate 8 cm / 3 1/8 "
OHP pennarelloCamlin,
ImmunoTag, USAITT08329
Forbice appuntita a lama affilataStoelting, Germania52132-11
Cloruro di potassioHimedia, Mumbai, IndiaMB043
Fosfato di potassio monobasico anidroHimedia, Mumbai, IndiaMB050
Inibitore della proteasiAbcam, Stati UnitiAb65621
SOD-1ImmunoTag, USAITT4364
Cloruro di sodioFisher Scientific, Mumbai, India27605
Sodio dodecil solfatoHimedia, Mumbai, IndiaGRM886
Ago spinale 25GA; 3,50 POLLICI (90,51 X 90 mm)Ramson, IndiaGS-2029
Microscopio operatorio stereo zoomOlympus, GiapponeSZ2-STU3
Scartatore di siringheBIOHAZARD882210
Pinze dentateStoelting, Germania52102-30
Tris BaseG Biosciences, Stati UnitiRC1217
Tris Acido cloridricoHimedia, Mumbai, IndiaMB030
Tween 20G Biosciences, Stati UnitiRC1227
Pollo Livornese Bianco 0 uova di giorno--
Z-Val-Ala-Asp(OMe)-FMKMP Biomedicals, LLC, USAFK009
Cina-1.5mL da Tecnologia di segnalazione cellulareHs02758991_g1 Laboratori Rankem di metanoloStrumenti chirurgici Tufft, India-ORP-150

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Fauzia, E., et al. Chick Embryo: A Preclinical Model for Understanding Ischemia-Reperfusion Mechanism. Frontiers in Pharmacology. 21 (9), 1034(2018).
  2. Eltzschig, H. K., Eckle, T. Ischemia and reperfusion--from mechanism to translation. Nature Med....

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Ischemia ReperfusionChick Embryo ModelIn Ovo ModelHook Ischemia ModelDoppler Blood FlowRight Vitelline ArteryWestern BlottingAutophagy MarkersInflammatory CytokinesApoptosis Pathways

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