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Prima dell'inizio della sperimentazione:
- Ottenere l'approvazione IACUC
- Sterilizzare strumenti chirurgici e Q-tips
I. Harvest tessuto del donatore
- Euthanize topo donatore (in conformità con SOP dell'istituzione)
- Capelli bagnati dalla base dell'orecchio con l'alcol
- Harvest pelle donatore tagliando orecchio alla base
- Tessuto posto in lamiera su ghiaccio
- Orecchio Spalato: i lati pizzico ventrale e dorsale del tessuto alla base di orecchio con denti di topo forcipe; delicatamente separare tessuti; tessuto galleggiante dorsale, superficie interna verso il basso, in PBS su ghiaccio; scartare collagene lembo ventrale
II. Preparare destinatari per trapianti
- Anestetizzare il mouse utilizzando la procedura approvata
- Somministrare analgesici per il post-operatorio del dolore (cioè 0,05-0,1 mg / g ip Bupernex)
- Del mouse posto in posizione laterale
- Eseguire pizzico dito per assicurare animale è sufficientemente sedato
- Capelli bagnati con l'alcol e la barba torace
- Pulire zona pulita con tampone imbevuto di alcool
III. Trapianto di pelle
- Fare ~ 1 incisione cm: pelle tenda con denti di topo pinze e tagliare ~ 0,25-0,5 cm sotto forcipe
- Togliere la pelle del donatore da PBS, posto in cima a letto innesto (con superficie interna della pelle dell'orecchio di fronte letto innesto), e rimuovere l'eccesso con PBS sterile Q-tip
- Rifilare con cura il via l'eccesso di pelle del donatore così che il trapianto è nettamente in letto innesto (assicurandosi che i bordi del trapianto non siano piegati sotto e che non sbornia innesto sulla pelle del tronco destinatario)
- Destinatario avvolgere in bendaggio sterile (con la non-adesivo segmento garza posta sopra l'innesto di pelle)
- Assicurarsi che bendaggio non troppo stretto (valutare la respirazione animale) e che le armi sono liberamente mobili
- Bendaggio sicuro con un unico 2-0 di sutura di seta
- Luogo animale in gabbia pulita (sotto la lampada di riscaldamento fino a animale ha sufficientemente recuperato da anestesia)
- Monitor destinatario 1-2/day per i segni di disagio e, se necessario somministrare analgesici per alleviare il dolore
IV. Bendaggio di rimozione (6-7 giorni dopo il trapianto)
- Anestetizzare il mouse utilizzando la procedura approvata
- Tagliare e rimuovere sutura di seta
- Utilizzando le forbici senza punta, con attenzione tagliare bendaggio (facendo attenzione a non disturbare innesto) e rimuovere delicatamente
- Ritorna mouse per gabbia pulita
- Controllare innesto ~ 8 ore dopo la rimozione del bendaggio per i segni di formazione di croste o di contrazione. Se presente, innesto potrebbe non essere riuscito a vascolarizzano e dovrebbe essere considerato un guasto tecnico.
- Monitorare giorno per segni di rifiuto (di solito definito come necrosi ~ 80% del tessuto del donatore)
- Trapianti di pelle allogenico di solito rifiutano tra D8-12 post-op
Suggerimenti utili V.
- La raccolta dei tessuti del donatore vicino alla base dell'orecchio saranno: 1) massimizzare la dimensione dell'innesto, e 2) forniscono una sporgenza irregolare ventrale che faciliterà la suddivisione
- Usare sempre una nuova lama di rasoio per radersi destinatario
- Se analgesico deve essere dato ip, somministrare prima del trapianto procedura per ridurre al minimo la gestione post-op (ridurre al minimo la possibilità di interrompere il trapianto)
- Se possibile, rimuovere i guanti prima di applicare la benda. Guanti tendono ad attaccare la benda e complicare l'applicazione
- Esecuzione di una sutura singola, alla fine bendaggio minimizzare prematura rimozione
- Avvolgere bendaggio stretto quanto consentito e valutare la respirazione Prima di immettere sutura. Se la fasciatura è troppo stretta, animale smettere di respirare. Se la fasciatura è troppo lenta, animale rimuoverlo.