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Articolo metodologico

Bioprospezione dei microrganismi estremofili per affrontare l'inquinamento ambientale

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DOI:

10.3791/63453

30 dicembre 2021

In questo articolo

Sommario

L'isolamento di microbi resistenti ai metalli pesanti dalle sorgenti geotermiche è un argomento caldo per lo sviluppo di biosistemi di biorisanamento e monitoraggio ambientale. Questo studio fornisce un approccio metodologico per isolare e identificare i batteri tolleranti ai metalli pesanti dalle sorgenti termali.

Abstract

Le sorgenti geotermiche sono ricche di vari ioni metallici a causa dell'interazione tra roccia e acqua che avviene nella falda acquifera profonda. Inoltre, a causa della variazione stagionale del pH e della temperatura, la fluttuazione della composizione degli elementi viene periodicamente osservata all'interno di questi ambienti estremi, influenzando le comunità microbiche ambientali. I microrganismi estremofili che prosperano nelle bocche termiche vulcaniche hanno sviluppato meccanismi di resistenza per gestire diversi ioni metallici presenti nell'ambiente, prendendo così parte a complessi cicli biogeochimici metallici. Inoltre, gli estremofili e i loro prodotti hanno trovato un ampio punto d'appoggio nel mercato, e questo vale soprattutto per i loro enzimi. In questo contesto, la loro caratterizzazione è funzionale allo sviluppo di biosistemi e bioprocessi per il monitoraggio ambientale e il biorisanamento. Ad oggi, l'isolamento e la coltivazione in condizioni di laboratorio di microrganismi estremofili rappresentano ancora un collo di bottiglia per sfruttare appieno il loro potenziale biotecnologico. Questo lavoro descrive un protocollo semplificato per l'isolamento di microrganismi termofili da sorgenti termali e la loro identificazione genotipica e fenotipica attraverso le seguenti fasi: (1) Campionamento di microrganismi da siti geotermici ("Pisciarelli", un'area vulcanica dei Campi Flegrei a Napoli, Italia); (2) Isolamento di microrganismi resistenti ai metalli pesanti; (3) Identificazione di isolati microbici; (4) Caratterizzazione fenotipica degli isolati. Le metodologie descritte in questo lavoro potrebbero essere generalmente applicate anche per l'isolamento di microrganismi provenienti da altri ambienti estremi.

Introduzione

Gli ambienti estremi del nostro pianeta sono eccellenti fonti di microrganismi in grado di tollerare condizioni difficili (cioè temperatura, pH, salinità, pressione e metalli pesanti)1,2, essendo Islanda, Italia, STATI UNITI, Nuova Zelanda, Giappone, Africa centrale e India, le aree vulcaniche più riconosciute e studiate 3,4,5,6,7,8,9 . I termofili si sono evoluti in ambienti diff....

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Protocollo

1. Campionamento di microrganismi da siti geotermici

  1. Scegliere il sito per il campionamento utilizzando come criterio i luoghi con la temperatura e il pH desiderati. Misurare i parametri fisici attraverso una sonda termocoppia digitale, inserendola nelle piscine o nei fanghi selezionati.
  2. Raccogliere 20 g di campioni di terreno (in questo caso, dal fango nel sito idrotermale di Pisciarelli Solfatara), raccogliendoli con un cucchiaio sterilizzato. Prelevare almeno due campioni per ogni sito scelto.
  3. Mettere i campioni in tubi di polipropilene sterile da 50 ml e chiudere immediatamente.
  4. Misura pH e temperatura con u....

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Risultati

Sito di campionamento
Questo protocollo illustra un metodo per l'isolamento di batteri resistenti ai metalli pesanti da una sorgente calda. In questo studio, l'area di Pisciarelli, un ambiente geotermico acido-solfidico, è stata utilizzata come sito di campionamento (Figura 1). Questo ecosistema è caratterizzato dal flusso di fluidi solforosi aggressivi derivati da attività vulcaniche. È stato dimostrato che le comunità microbiche nei sistemi geotermici a.......

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Discussione

Le sorgenti termali contengono una diversità non sfruttata di microbiomi con capacità metaboliche altrettanto diverse12. Lo sviluppo di strategie per l'isolamento di microrganismi in grado di convertire efficacemente i metalli pesanti in composti meno tossici10 rappresenta un'area di ricerca di crescente interesse a livello mondiale. Questo documento mira a descrivere un approccio semplificato per lo screening e l'isolamento dei microbi con la capacità di resistere alle sos.......

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Dichiarazioni

Gli autori dichiarano di non avere conflitti di interesse.

Ringraziamenti

Questo lavoro è stato supportato da ERA-NET Cofund MarTERA: "FLAshMoB: Functional Amyloid Chimera for Marine Biosensing", PRIN 2017-PANACEA CUP:E69E19000530001 e da GoodbyWaste: ObtainGOOD products-exploit BY-products-reduce WASTE, MIUR 2017-JTNK78.006, Italia. Si ringraziano la Dott.ssa Monica Piochi e la Dott.ssa Angela Mormone (Istituto Nazionale di Geofisica e Vulcanologia, Sezione di Napoli Osservatorio Vesuviano, Italia) per l'identificazione e la caratterizzazione del sito geotermico.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
AmpicillinaSigma AldrichA9393
Aura Minibio air s.c.r.l.Cappa biologica
BacitracinSigma AldrichB0125
Cloruro di cadmioSigma Aldrich202908
CloramfenicoloSigma AldrichC0378
CiprofloxacinaSigma Aldrich17850
Cloruro di cobaltoSigma AldrichC8661
Cloruro dirameSigma Aldrich224332
EritromicinaSigma AldrichE5389
Servizio EsternoDSMZIstituto Leibniz DSMZ-Collezione Tedesca di Microrganismi e Colture Cellulari GmbH
Kit di Purificazione del DNA GenomicoThermo Scientific#K0721
Solfato di KanamicinaSigma Aldrich60615
MaxQTM 4000 Agitatore orbitale da bancoThermo ScientificSHKE4000
Cloruro di mercurioSigma Aldrich215465
NanoDrop 1000 SpettrofotometroThermo Scientific
Cloruro di nichelSigma Aldrich654507
Orion Star A221 Misuratore di pH portatileThermo ScientificSTARA2218
Sodio (meta) arsenitoSigma AldrichS7400
Arseniato di sodio eptaidrato bibasicoSigma AldrichA6756
Cloruro di sodioSigma AldrichS5886
StreptomicinaSigma AldrichS6501
TetraciclinaSigma Aldrich87128
Triptone BioChemicaApplichem PanreacA1553
VancomicinaSigma AldrichPHR1732
Estratto di lievito per biologia molecolareApplichem Panreac  A3732

Riferimenti

  1. Arora, N. K., Panosyan, H. Extremophiles: applications and roles in environmental sustainability. Environmental Sustainability. 2, 217-218 (2019).
  2. Gallo, G., Puopolo, R., Carbonaro, M., Maresca, E., Fiorentino, G.

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Ristampe e permessi

Tag

Resistenza ai metalli pesantiBiorisanamento ambientaleSorgenti geotermicheIsolamento microbicoCaratterizzazione fenotipicaEstrazione di DNA genomicoConcentrazione minima inibenteResistenza agli antibioticiCicli biogeochimici