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Articolo metodologico

Un modello murino eterotopico per lo studio del trapianto laringeo

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DOI:

10.3791/63619

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13 gennaio 2023

 ,  ,  ,  , 

* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

Lo scopo di questo manoscritto è quello di descrivere le fasi microchirurgiche necessarie per eseguire un trapianto laringeo eterotopico nei topi. I vantaggi di questo modello murino rispetto ad altri modelli animali di trapianto laringeo sono il suo rapporto costo-efficacia e la disponibilità di saggi e dati immunologici.

Abstract

Il trapianto eterotopico laringeo, sebbene sia una procedura tecnicamente impegnativa, offre maggiori analisi scientifiche e benefici in termini di costi rispetto ad altri modelli animali. Sebbene descritta per la prima volta da Shipchandler et al. nel 2009, questa tecnica non è ampiamente utilizzata, probabilmente a causa delle difficoltà nell'apprendimento della tecnica microchirurgica e del tempo necessario per padroneggiarla. Questo documento descrive in dettaglio i passaggi chirurgici, nonché le potenziali insidie da evitare, al fine di incoraggiare un uso efficace di questa tecnica.

In questo modello, le arterie carotidi bilaterali della laringe donatrice sono anastomizzate, all'arteria carotide ricevente e alla vena giugulare esterna, consentendo il flusso sanguigno attraverso l'innesto. Il flusso sanguigno può essere confermato intraoperatoriamente dalla visualizzazione del riempimento del sangue nelle arterie carotidi bilaterali dell'innesto, dall'arrossamento delle ghiandole tiroidee dell'innesto e dal sanguinamento dai micro vasi nell'innesto. Gli elementi cruciali per il successo includono la delicata conservazione dei vasi dell'innesto, l'arteriotomia e la venotomia delle dimensioni corrette e l'utilizzo del numero appropriato di punti di sutura sulle anastomosi arterioso-arteriose e arterioso-venose per fissare i vasi senza perdite e prevenire l'occlusione.

Chiunque può diventare esperto in questo modello con una formazione sufficiente ed eseguire la procedura in circa 3 ore. Se eseguito con successo, questo modello consente di eseguire studi immunologici con facilità e a basso costo.

Introduzione

Per i pazienti affetti da danni irreparabili alla laringe o cancro della laringe, una laringectomia totale è spesso l'unica opzione1. La laringectomia totale lascia i pazienti senza la capacità di respirare e parlare da soli, oltre a sperimentare disagio sociale e psicologico2. I pazienti con cancro della laringe che necessitano di una laringectomia totale sono eccellenti potenziali candidati per il trapianto laringeo. Mentre è stato eseguito il trapianto laringeo umano nel contesto di danni laringei irreparabili, l'allotrapianto della laringe è attualmente evitato in questi pazienti a causa del timore di recidiva del tu....

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Protocollo

Questa ricerca è stata eseguita in conformità con il Mayo Clinic Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC). I topi BalbC (10-12 settimane) sono stati utilizzati come donatori e i topi C57 / BL6 (10-12 settimane) sono stati utilizzati come riceventi perché i loro principali complessi di istocompatibilità, H-2Db e H-2Kb, rispettivamente, sono immunologicamente incompatibili e quindi la risposta immunitaria all'innesto può essere ulteriormente studiata. Tutti gli strumenti utilizzati durante l'intervento chirurgico sono stati sterilizzati (vedi Figura supplementare S1 e Figura supplementare S2) e il campo chirurgico è stato mantenuto sterile pe....

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Risultati

Conferma del successo del trapianto
Utilizzando il protocollo sopra descritto, è possibile valutare il flusso sanguigno al complesso LTE osservando la pulsazione dell'arteria carotide del donatore dopo aver rimosso i morsetti dei vasi. La pulsazione è tipicamente visibile e l'immediata colorazione rossa dell'arteria donatrice conferma il flusso sanguigno attivo (Figura 4A). Se l'anastomosi non è efficace, l'arteria non avrà pulsazione, apparirà parzialmente collassata e s.......

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Discussione

L'incidenza e la prevalenza del cancro della laringe sono aumentate rispettivamente del 12% e del 24% negli ultimi tre decenni e molti di questi pazienti subiscono una laringectomia per il trattamento10. Questa procedura peggiora significativamente la qualità della vita di una persona e quindi è necessario un trattamento alternativo. L'allotrapianto composito vascolarizzato della laringe può migliorare la capacità del paziente di respirare e parlare; Tuttavia, la ricerca è ancora necessaria prima .......

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Dichiarazioni

Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti. Le spese di viaggio e soggiorno di Egehan Salepci per la ricerca sono state finanziate dal Consiglio per la ricerca scientifica e tecnologica della Turchia (TUBITAK).

Ringraziamenti

Vorremmo ringraziare Randall Raish per la sua eccellente videografia e assistenza al montaggio.

....

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
#1 Graffette, graffetteOP-7404le clip sono sagomate manualmente per essere utilizzate come divaricatori
Siringhe da insulina da 1 cc BD 32941227 G 5/8
10-0 Ethilon Nylon SutureEthicon2870G
25 G Ago di scorrimento di precisioneBD 305125
Siringa con punta Luer-Lok da 1 su 3 mLBD 
30 G Aghi smussati standard steriliCellinkNZ5300505001
5-0 Suture MonocrylEthiconY822G
8-0 Suture in nylon EthilonEthicon2815G
Pinza AdsonFine Science Tools11027-12Dritto, 1 x 2 denti
Forbici avventizianeS & TSAS-1019 mm, 10 cm,
pinza ad angoloStrumenti per la scienza fine00109-1145/11 cm
Lacrime artificiali Lubrificante Unguento oftalmicoAkorn Animal Health59399-162-35
Cerotto in tessuto Punta delle ditaCardinal Healthcare299399
Betadine Solution SwabsticksPurdue Products67618-153-01
Buprenex IniezioneCIII12495-0757-10,3 mg/mL
Pinza per l'applicazione di pinze senza bloccoAccurato Chirurgico & Strumenti ScientificiASSI. CAF514 cm
Cotton SwabsPuritan10806-001-PK
DeBakey pinze
Dermabond MiniCardinal Healthcare315999
Tavole da dissezioneMopec22-444-314
Falcon sterile monouso Petri Dish Corning25373-04135 millimetri
finistrumenti di scienza fine14029-10curvo affilato-smussato 10 cm
dorato A5 2 velocità lama clipper Oster008OST-78005-140# 10
Depilatore Formula sensibileNair2260000033
Eparina Meitheal Pharmaceuticals71288-4O2-1010.000 unità USP per 10 mL
di isofluranoPiramal Healthcare66794-013-25
Cautere a punta fine micro a bassa temperaturaBovie MedicalAA90
Mercian Visibility Materiale di sfondoSynovis Micro CompaniesVB3
Morsetto approssimatore microvascolare verde senza telaioAccurato Chirurgico e Amp; Strumenti ScientificiASSI. ABB11V0,4-1 mm Diametro vaso
Kit maschera facciale per topoXenotecXRK-S
Piccolo portaaghiS & TC-14 W5,5", 8 mm, 0,4 mm
Press n' SealGlad70441
BisturiBraunBA21010 lame
Morsetto per mini vaso singoloAccurato Chirurgico e Strumenti ScientificiASSI. ABB11M.31(8 mm), 3 x 1 mm Rnd. Bl., Coppia nera
StereomicroscopioOlympusSZ61
Tamponi sterili per la preparazione dell'alcol Fisherbrand06-669-62
Fogli sterili monousoper teli DynarexDYN4410-CASE
Garze steriliDukal1212
Soluzione salina sterile Hospira236173NaCl 0,9%
Guanti chirurgici steriliGammex851_A
Pinze dritteStrumenti per scienze fini00108-1111 cm
Accurato Chirurgico e Strumenti ScientificiASSI. JFLP313,5 cm, 8 mm, 0,3 mm
Forbici per modelli Vannas Accurato Chirurgico & Strumenti ScientificiASSI. SDC15RV15 cm, 8 mm, lama curva da 7 mm
Forbici a molla VannasFine Science Tools15000-10Tagliente da 3 mm, punta curva
dilatatore del vaso Fine Science Tools00126-11Diametro 0,1 mm/Dilatatore per vasi angolato 10/11 cm
, linea classicaS& TD-5a.3 L9 mm, 0.3 mm, angolato 10
, 309657 dritto forbici Pinze per tessuti da del

Riferimenti

  1. Strome, M., et al. Laryngeal transplantation and 40-month follow-up. The New England Journal of Medicine. 344 (22), 1676-1679 (2001).
  2. Hilgers, F. J. M., Ackerstaff, A. H., Aaronson, N. K., Schouwenburg, P. F., Zandwijk, N. Physical and psychosocial consequences of t....

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