Qui, descriviamo la preparazione e i dettagli tecnici del trapianto di cuore eterotopico murino utilizzando un cuore di donatore a morte circolatoria.
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Articolo metodologico
Qui, descriviamo la preparazione e i dettagli tecnici del trapianto di cuore eterotopico murino utilizzando un cuore di donatore a morte circolatoria.
L'obiettivo di questo protocollo è quello di mettere a punto un modello di trapianto di cuore eterotopico di ratto con donazione dopo morte circolatoria (DCD) di cuori da donatore. Esistono due configurazioni per questo protocollo: la configurazione del donatore di cuore e la configurazione del ricevente. Nella configurazione del donatore di cuore, i ratti Sprague Dawley sono anestetizzati, intubati endotrachealmente e ventilati. L'arteria carotide destra è incannulata per erogare eparina e l'agente paralitico vecuronio-bromuro. Il processo DCD viene avviato terminando la ventilazione. Dopo 20 minuti, il cuore è esposto e l'aorta distale al ramo brachiocefalico è bloccata. A 25 minuti dall'interruzione del ventilatore, la soluzione ghiacciata dell'Università del Wisconsin (UW) viene perfusa attraverso il catetere carotideo per lavare il cuore. Il cuore viene prelevato dividendo l'aorta, l'arteria polmonare, le vene cave e le vene polmonari e conservato in una soluzione UW per l'impianto. Nella configurazione del ricevente, il ratto Lewis viene anestetizzato con isoflurano. La buprenorfina a lento rilascio viene somministrata per via sottocutanea per facilitare un recupero postoperatorio senza intoppi. Attraverso un'incisione addominale sulla linea mediana, l'aorta infra-renale e la vena cava inferiore vengono isolate e bloccate con un clamp vascolare atraumatico. L'aorta cardiaca e l'arteria polmonare del donatore vengono suturate rispettivamente all'aorta addominale e alla vena cava riceventi, con un 8-0 Prolene. Il morsetto vascolare viene rimosso per riperfondere il cuore. La parete addominale viene chiusa e il ratto viene recuperato. Dopo un intervallo prestabilito (da 24 ore a 2 settimane), il ratto ricevente viene anestetizzato, il cuore trapiantato viene esposto e un catetere a palloncino viene inserito nel ventricolo sinistro attraverso l'apice per registrare la pressione sviluppata e il dP/dt utilizzando un sistema di acquisizione dati. Il tessuto cardiaco viene raccolto per l'istologia, l'immunologia o l'analisi molecolare. Un modello di trapianto di cuore di ratto da donatore DCD consentirà ulteriori studi sugli approcci cardioprotettivi per migliorare i risultati del trapianto di cuore da donatori di DCD.
Un piccolo modello animale di trapianto di cuore (HTx) è fondamentale per condurre ricerche che studiano le condizioni fisiopatologiche che colpiscono il cuore trapiantato. L'HTx eterotopica in un modello murino, come descritto da Oto e Lindsey, ha permesso ai ricercatori di studiare i cambiamenti fisiopatologici osservati nelle condizioni di ischemia e riperfusione1. Tradizionalmente, i cuori dei donatori per il trapianto sono stati procurati da donatori a cuore battente, noti anche come donatori di donazione dopo la morte cerebrale (DBD); tuttavia, c'è stato un aumento sproporzionato del numero di pazienti ch....
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Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati condotti in conformità con le linee guida istituzionali e la Guida per la cura e l'uso degli animali da laboratorio, pubblicata dal National Institutes of Health (NIH Publication No. 86-23, rivista nel 2011)8. Le seguenti procedure sono state approvate dal Comitato Istituzionale per la Cura e l'Uso degli Animali della Virginia Commonwealth University. Tutte le procedure sono state eseguite seguendo le linee guida OSHA (Occupational Safety and Health Administration) e le tecniche sterili raccomandate9. I ratti Sprague Dawley sono stati allogg....
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Da 24 a 14 giorni dopo il trapianto di cuore eterotopico, l'addome può essere riaperto e il cuore può essere esposto per misurare la pressione sviluppata dal ventricolo sinistro. Un catetere a palloncino viene inserito nel ventricolo sinistro del cuore DCD (o CBD) per misurare la pressione sviluppata (DP), il max +dP/dt e il min -dP/dt. La Figura 7 mostra un esempio di DP, +dP/dt e -dP/dt attesi di un cuore DCD rispetto a un cuore CBD 24 ore dopo il trapianto. Rispetto ai cuori CBD, il DP de.......
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Per un HTx eterotopico di ratto DCD di successo, è fondamentale stabilire una configurazione meticolosa e ponderata dell'esperimento. La configurazione dettagliata prende in considerazione diversi fattori, tra cui 1) la selezione di ratti giovani come donatori di DCD, 2) l'utilizzo dell'isoflurano come agente anestetico di scelta, 3) l'efficace somministrazione di cardioplegia al cuore del donatore, 4) la conservazione del cuore del donatore in una soluzione ghiacciata, 5) la limitazione.......
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Gli autori di questo manoscritto non hanno conflitti di interesse da rivelare.
Questo lavoro è stato supportato da una borsa di studio per la revisione del merito assegnata al Dr. Mohammed Quader (1I01 BX003859) e da fondi del Pauley Heart Center a Mohammed Quader e al Dr. Stefano Toldo.
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| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Sutura in nylon 5-0 monofilamento in poliammide | Aros Surgical | SP17A05N-45 | |
| Sutura in seta 5-0 | Specialità chirurgiche | Sutura monofilamento SP116 | |
| 8-0 | Autoclave Aros Surgical | T06A08N14-13 | |
| Steris | Amsco Lab 250 | ||
| BD con ago staccabile Siringhe da 1 mL | Scientific | 14-820-28 | |
| Siringa BD con punte Luer-Lok (senza ago) Siringhe da 10 ml Fisher | Scientific | 14-823-16E | |
| Soluzione per celle frigorifere della Belzer University of Wisconsin | Bridge to Life Northbrook IL USA | Adenosina 1,34 g/L, Allopurinolo 0,136 g/L, Glutatione 0,922 g/L, Acido lattobionico (come lattone) 35,83 g/L, Solfato di magnesio eptaidrato 1,23 g/L, Pentafrazione 50 g/L, Idrossido di potassio 5,61 g/L, Fosfato di potassio monobasico 3,4 g/L, Raffinosio pentaidrato 17,83 g/L | |
| Buprenorfin SR Lab | Zoopharm LLC | ||
| Debakey Pinza vascolare multi-angolo pediatrica atraumatica | Aesculap | F341T | |
| Exel International Safelet monouso Cateteri per flebo 14 G | Fisher Scientific | 14-841-10 | |
| Exel International Safelet monouso I.V. Cateteri 22 G | Fisher Scientific | 14-841-20 | |
| Catetere Fogarty misura 4F | Edwands Lifesciences | 120404F | |
| Pinze con punte curve | Accurato Chirurgico e Scientific Instruments Corporation | ASSI.228 | |
| Pompa di riscaldamento Gaymar | Braintree Scientific, Braintree, MA, USA | TP700 | |
| Germinator-500 | Braintree Scientific Iniezione | ||
| sodio di eparina, USP 1.000 U/mL | Pfizer | NDC 0069-0137-01 | |
| Micro-forbici a iride con punte dritte | Accurato Chirurgico & Scientific Instruments Corporation | ASSI.5253 | |
| Isoflurano USP | Patterson Veterinario | NDC 14043070406 | |
| Ketamina HCl 100 mg/mL | Henry Schein | NDC 6745710810 | |
| Lidocaina HCl 2% | Aspen Veterinario | 07-892-4325 | |
| McKesson General Medical 6IN Q-TIPS 2STER WOOD 100/PACK | Fisher Scientific NC0650323 | sterile applicatori con punta in cotone | |
| Microforbici, punte ad angolo retto e curve | Braintree Scientific | SC-MS 154 | |
| Porta aghi | Accurato Chirurgico & Società di Strumenti Scientifici | ASSI. BSL158 | con il meccanismo di blocco rimosso |
| Soluzione salina normale | Baxter Forniture | ||
| Stazione PowerLab | AD Instruments, Denver, CO | sistema di acquisizione dati | |
| Idrossido di sodio/acido | regolare la soluzione a pH 7,4 | ||
| Sprague Dawley rats | maschio, 8... 16 settimane di età, < 400 g di peso | ||
| Microscopio operatorio | Leika | Modello M525 F40 | |
| Surgicel | Ethicon | emostatico assorbibile | |
| Sonda di temperatura Therma Impermeabile Tipo T Termocoppia ad alta precisione | Thermoworks | THS-232-107 | |
| Pinzetta con punta ad alta precisione | Excelta | 17-456-109 | |
| Vecuronio Bromuro | Sigma-Aldrich | PHR1627 | diluito in PBS per 100 mg/mL |
| Ventelite | Harvard Apparatus, Holliston, MA, USA | ||
| Xilazina 100 mg/mL | Pivetal Anased | NDC 04606675002 |
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