Articolo metodologico

Induzione dell'infiammazione della superficie oculare e raccolta dei tessuti coinvolti

DOI:

10.3791/63890

⸱

4 agosto 2022

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Internal Medicine 3-Rheumatology and Immunology, Friedrich-Alexander-University Erlangen-Nürnberg and Universitätsklinikum Erlangen, 2Deutsches Zentrum für Immuntherapie, Friedrich-Alexander-University Erlangen-Nürnberg and Universitätsklinikum Erlangen

In questo articolo

Sommario

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

L'infiammazione della superficie oculare danneggia i tessuti della superficie oculare e compromette le funzioni vitali dell'occhio. Il presente protocollo descrive un metodo per indurre l'infiammazione oculare e raccogliere i tessuti compromessi in un modello murino di disfunzione della ghiandola di Meibomio (MGD).

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Le malattie della superficie oculare comprendono una serie di disturbi che disturbano le funzioni e le strutture della cornea, della congiuntiva e della rete di ghiandole superficiali oculari associate. Le ghiandole di Meibomio (MG) secernono lipidi che creano uno strato di copertura che impedisce l'evaporazione della parte acquosa del film lacrimale. I neutrofili e le trappole del DNA extracellulare popolano la MG e la superficie oculare in un modello murino di malattia allergica dell'occhio. Le trappole extracellulari aggregate di neutrofili (aggNET) formulano una matrice simile a una maglia composta da cromatina extracellulare che occlude le prese di MG e condiziona la disfunzione della MG. Qui viene presentato un metodo per indurre l'infiammazione della superficie oculare e la disfunzione MG. Le procedure per la raccolta di organi relativi alla superficie oculare, come la cornea, la congiuntiva e le palpebre, sono descritte in dettaglio. Utilizzando tecniche consolidate per l'elaborazione di ciascun organo, vengono anche mostrate le principali caratteristiche morfologiche e istopatologiche della disfunzione MG. Gli essudati oculari offrono l'opportunità di valutare lo stato infiammatorio della superficie oculare. Queste procedure consentono lo studio di interventi antinfiammatori topici e sistemici a livello preclinico.

Introduzione

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ogni battito di ciglia riempie il film lacrimale liscio disperso sulla cornea. Gli epiteli della superficie oculare facilitano la distribuzione e il corretto orientamento del film lacrimale sulla superficie oculare. Le mucine sono fornite dalla cornea e dalle cellule epiteliali congiuntiva per aiutare a posizionare la parte acquosa del film lacrimale proveniente dalle ghiandole lacrimali sulla superficie degli occhi. Infine, MG secerne lipidi che creano uno strato di copertura che impedisce l'evaporazione della parte acquosa del film lacrimale 1,2,3. In questo modo, le funzioni coordinate di tutti gli organi oculari proteggono la superficie oculare da agenti patogeni o lesioni invasori e supportano una visione cristallina senza alcun dolore o disagio.

In una superficie oculare sana, la scarica oculare o il reum oculare spazza via polvere, cellule epiteliali morte, batteri, muco e cellule immunitarie. Le trappole extracellulari di neutrofili aggregati (aggNET) formulano una matrice simile a una maglia composta da cromatina extracellulare e incorporano questi componenti nel reum dell'occhio. Gli AggNET risolvono l'infiammazione mediante la degradazione proteolitica di citochine e chemochine pro-infiammatorie4. Tuttavia, quando diventano disfunzionali, questi aggNET aberranti guidano la patogenesi di malattie come le occlusioni vascolari in COVID-195, calcoli biliari6 e sialolitiasi7. Allo stesso modo, gli aggNET sulla superficie oculare svolgono un ruolo protettivo e contribuiscono a risolvere l'infiammazione della superficie altamente esposta8. Una formazione esagerata o la mancanza di aggNET nella superficie oculare possono compromettere la stabilità del film lacrimale e / o causare ferite corneali, congiuntivite cicatrizzante e malattia dell'occhio secco. Ad esempio, l'ostruzione della MG è una delle principali cause di malattia dell'occhio secco9. Gli AggNET sono anche noti per tappare il flusso di secrezione lipidica dai dotti di MG e causare la disfunzione della ghiandola di Meibomio (MGD). La congestione degli orifizi MG da parte di aggNET provoca una mancanza di fluido grasso che avvolge la superficie oculare e il fluido imbottigliato retrogrado, con conseguente disfunzione della funzione ghiandolare e danni acinosi. Questa disfunzione può provocare evaporazione del film lacrimale, fibrosi dei margini sulle palpebre, infiammazione oculare e danni dannosi alla MG10,11.

Diversi modelli animali sono stati sviluppati nel corso degli anni per imitare il processo patologico della MGD nell'uomo. Ad esempio, topi C57BL / 6 di età pari o superiore a 1 anno hanno contribuito a studiare gli effetti legati all'età sulla malattia dell'occhio secco (DED) e MGD, riflettendo la patologia della malattia oculare in pazienti di età pari o superiore a 50 anni12,13,14. Inoltre, i conigli sono modelli appropriati per studiare gli effetti degli interventi farmacologici. Pertanto, l'induzione di MGD nei conigli è stata riportata sia dalla somministrazione topica di adrenalina che dall'introduzione sistemica di acido 13-cis-retinoico (isotretinoina)15,16,17,18,19.

Sebbene questi modelli animali fossero adeguati per determinare i diversi fattori che contribuiscono alla fisiopatologia della MGD, erano limitati nel loro utilizzo. Ad esempio, il modello murino di MGD legata all'età era ideale per decifrare elementi solo negli anziani e, quindi, i conigli sembravano essere il modello animale più adatto per studiare le malattie della superficie oculare, in quanto consentono lo studio di molteplici meccanismi fisiopatologici. Tuttavia, a causa della mancanza di strumenti analitici completi per rilevare le proteine sulla superficie oculare e poiché molte parti del genoma del coniglio non sono annotate, sono limitate per le indagini20,21.

Inoltre, questi modelli animali utilizzati per studiare la patogenesi della malattia dell'occhio secco non hanno fornito dettagli adeguati per analizzare il braccio immunologico del disturbo che istiga l'infiammazione della superficie oculare. Di conseguenza, il modello murino di MGD sviluppato da Reyes et al. ha mostrato un'associazione tra malattia allergica dell'occhio nei topi e MGD nell'uomo e ha evidenziato l'eziologia immunitaria responsabile della MGD21 ostruttiva. Questo modello associa la malattia allergica dell'occhio con una risposta TH17 che recluta neutrofili alla congiuntiva e alla palpebra, causando MGD e infiammazione oculare cronica21. L'induzione della MGD e dell'infiammazione oculare in questo modello murino è uno strumento prezioso per studiare gli eventi a monte durante lo sviluppo dell'infiammazione locale guidata da una risposta immunitaria in corso21. L'attuale protocollo descrive l'infiammazione della superficie oculare accompagnata da MGD ostruttiva. In questo metodo, i topi vengono immunizzati e, dopo 2 settimane, sfidati sulla superficie oculare con l'immunogeno per 7 giorni. Inoltre, vengono descritti i passaggi per isolare l'essudato oculare e gli organi oculari associati durante l'infiammazione acuta e la dissezione della cornea, della congiuntiva e delle palpebre.

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Protocollo

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tutte le procedure che coinvolgono gli animali sono state condotte secondo le linee guida istituzionali sul benessere degli animali e approvate dalla commissione per il benessere degli animali della Friedrich-Alexander-University Erlangen-Nuremberg (FAU) (numero di autorizzazione: 55.2.2-2532-2-1217). Per il presente studio sono stati utilizzati topi femmina C57Bl/6, di età compresa tra 7 e 9 settimane. I topi sono stati ottenuti da fonti commerciali (vedi Tabella dei materiali) e tenuti in condizioni specifiche prive di agenti patogeni con cicli giorno/notte di 12 ore.

1. Induzione dell'infiammazione della superficie oculare murina

  1. Eseguire la preparazione immunogena per l'immunizzazione.
    1. Preparare l'immunogeno fresco il giorno dell'immunizzazione, mescolando l'ovoalbumina (OVA, 50 mg/ml) e la tossina della pertosse (100 μg/ml) in soluzione salina e l'adiuvante idrossido di alluminio (40 mg/ml) (vedi Tabella dei materiali) in proporzione 1:1.
      ATTENZIONE: Eseguire l'apertura, la ricostituzione e la preparazione immunogena della tossina della pertosse in un armadio di sicurezza laminare. Indossare indumenti protettivi ed evitare qualsiasi contatto con la pelle.
    2. Incubare l'immunogeno e la miscela adiuvante a temperatura ambiente per 30 minuti e caricare 100 μL in una siringa da 1 ml.
    3. Eseguire l'iniezione intraperitoneale della soluzione immunogena in un topo non anestetizzato.
      1. Tieni il mouse dolcemente per la coda mentre afferri la griglia della gabbia. Tenere saldamente la pelle della schiena e la regione del collo tra il pollice e l'indice e fissare la coda e gli arti inferiori tra l'anello e il mignolo contro il palmo della mano.
      2. Tieni il mouse fisso con la testa verso il basso.
      3. Iniettare 100 μL della soluzione immunogena preparata nel quadrante destro o sinistro della cavità addominale inferiore.
  2. Eseguire la sfida della superficie oculare 2 settimane dopo l'immunizzazione.
    1. Anestetizzare il topo con isoflurano (2,5%).
    2. Applicare 5 μL di OAV (50 mg/ml) o soluzione salina (0,9% NaCl) per occhio su entrambi gli occhi e attendere che la goccia venga assorbita dall'occhio. Questo richiede ~ 5 min.
    3. Ripetere la procedura 1 volta al giorno per 7 giorni.
      NOTA: La somministrazione topica di farmaci può essere effettuata allo stesso modo.

2. Raccolta degli essudati oculari

  1. Recuperare gli essudati oculari formati durante la fase di challenge applicando 50 μL di soluzione salina sterile sull'occhio subito dopo la sfida.
  2. Per ottenere una sospensione unicellulare, trattare la secrezione oculare raccolta con MNasi ricombinante (2 x 106 gel U/mL, vedi Tabella dei materiali) contenente il calcio cofattore (5 mM) a 37 °C per 20 min.
  3. Centrifugare a 400 x g per 7 minuti a temperatura ambiente.
  4. Isolare il surnatante e misurare le citochine e le chemochine utilizzando ELISA multiplex secondo le istruzioni del produttore (vedere Tabella dei materiali).
    NOTA: Il surnatante ottenuto può essere utilizzato per l'analisi delle proteine e il pellet per saggi funzionali come immunofenotipizzazione, fagocitosi, degranulazione ed espressione genica.

3. Asportazione dei tessuti superficiali oculari

  1. Seziona le palpebre e il globo oculare seguendo i passaggi seguenti.
    1. Eutanasia del topo mediante asfissia da CO2 e lussazione cervicale.
    2. Posizionare il mouse su una superficie piana.
    3. Disinfettare l'area orbitale intorno all'occhio con un tampone impregnato di etanolo al 70%.
    4. Fare un'incisione tra l'orecchio e il seno retro-orbitale e lungo la superficie sopra l'osso squamoso verticalmente, estendendo l'incisione orizzontalmente sotto la palpebra inferiore lungo l'osso mascellare e sopra la palpebra superiore lungo l'osso frontale. Questo forma un'incisione intorno all'occhio (Figura 1).
    5. Tenere con cura il tessuto sezionato intorno all'occhio usando una pinza curva e tirare fuori il tessuto e il bulbo oculare.
    6. Posizionare gli organi asportati in PBS sterile.
    7. Tagliare il tessuto muscolare facciale in eccesso intorno alle palpebre superiori asportate usando un bisturi e sotto lo stereomicroscopio.
  2. Raccogli la congiuntiva seguendo i passaggi seguenti.
    1. Posizionare la palpebra superiore su una capsula di Petri asciutta sotto lo stereomicroscopio.
    2. Usando una pinzetta fine e un bisturi, staccare lo strato biancastro-mucoso molto delicatamente dalla superficie interna della palpebra.
  3. Quindi, sezionare la cornea seguendo i passaggi seguenti.
    1. Posizionare il globo oculare su una nuova capsula di Petri asciutta sopra il ghiaccio secco per 3 minuti.
    2. Portare la capsula di Petri sulla superficie del banco in una posizione stabile.
    3. Fai una piccola incisione sul bordo della cornea vicino al limbus usando sottili forbici affilate.
    4. Prolungare l'incisione con il bisturi intorno al globo oculare, separando la sclera dalla cornea.
    5. Rimuovere i resti dell'iride e della lente dalla parte posteriore della cornea sciacquando generosamente con soluzione salina.

4. Documentazione dell'ostruzione della ghiandola di Meibomio (MG)

  1. Per valutare la MG e i suoi orifizi, posizionare le palpebre asportate in posizione verticale sotto lo stereomicroscopio (Figura 2).
  2. Cattura immagini con luce bianca epi-illuminazione in base al tempo di esposizione della fotocamera e alle impostazioni ISO.
    NOTA: L'analisi morfometrica di queste immagini fornisce una quantificazione affidabile della dimensione del tappo all'uscita delle ghiandole. La quantificazione può essere eseguita delineando con lo strumento bacchetta i tappi oculari ed eseguendo il comando "Analizza particelle" del software Image J (vedi Tabella dei Materiali).

5. Transilluminazione delle palpebre (morfologia della ghiandola di Meibomio)

  1. Per valutare l'area MG, posizionare le palpebre asportate in posizione orizzontale e accendere la retroilluminazione dello stereomicroscopio dotato di una telecamera a infrarossi (Figura 3).
  2. Acquisire immagini regolando il tempo di esposizione in base all'ISO della fotocamera (vedere Tabella dei materiali).
    NOTA: L'imaging a infrarossi di queste palpebre transilluminate sotto lo stereomicroscopio può aiutare a misurare la forma e le dimensioni di ogni acini. L'analisi morfometrica di queste immagini fornisce una quantificazione affidabile delle dimensioni e del numero di MG. La quantificazione può essere eseguita delineando la MG con lo strumento bacchetta ed eseguendo il comando "Analizza particelle" del software Image J.

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Risultati

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Il presente protocollo descrive i passaggi sequenziali per stabilire un modello murino di infiammazione della superficie oculare. I protocolli mirano a mostrare come applicare le terapie localmente, ottenere essudati oculari e asportare organi accessori associati come palpebre sane e infiammate (Figura 2), la cornea e la congiuntiva. Bisogna prestare attenzione quando le palpebre superiori vengono sezionate per l'isolamento della congiuntiva e deve essere conservato in 1x PBS durante la diss...

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Discussione

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

La secrezione oleosa delle ghiandole di Meibomio è di grande importanza per un occhio sano22. Tuttavia, l'ostruzione di queste ghiandole sebacee da parte di trappole extracellulari di neutrofili aggregati (aggNET) che si allineano come filamenti paralleli situati sulle placche tarsali di entrambe le palpebre può interrompere il film lacrimale23. Questa interruzione provoca disfunzione della ghiandola di Meibomio (MGD)1 e un'evaporazione lacrimale acc...

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Dichiarazioni

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Gli autori non hanno conflitti di interesse da rivelare.

Ringraziamenti

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Questo lavoro è stato parzialmente sostenuto dalla Fondazione tedesca per la ricerca (DFG) 2886 PANDORA Project-No.B3; SCHA 2040/1-1; MU 4240/2-1; CRC1181(C03); TRR241(B04), H2020-FETOPEN-2018-2020 Project 861878, e dalla Volkswagen-Stiftung (Grant 97744) a MH.

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
1x PBSGibco
Idrossido di alluminioImject allume adiuvante77161 40mg/ mL
Concentrazione finale: in vivo: 1 mg/ 100 &; micro; L
C57Bl/6 topi, di 7 anni– 9 settimaneCharles River Laboratories 
CalcioCarl rothCN93.11 M
Concentrazione finale: 5 mM
Pinza curvaFST di Dumont SVIZZERA5/45 11251-35
Forbice affilata fineFST Acciaio inossidabile, Germania15001-08
Armadio di sicurezza laminareHerasafe
Macrophotography CameraCanonEOS6D
Macrophotography Camera (senza filtro IR)NikonD5300
MnaseNew England biolabsM0247S2 x 106 gel U/mL
il dosaggio a flusso multi-analita (Custom mouse 13-plex panel)BiolegendCLPX-200421AM-UERLAN
NaCl 0,9% (soluzione salina)B.Braun
Ovoalbumina (OVA)Endofit, Invivogen9006-59-110 mg/200 µ L nella
tossina salina della pertosse ThermoFisher Scientific PHZ117450 µ g/ 500 µ L in soluzione salina
Concentrazione finale: in vivo: 100 µ g/ 100 µ L
PetridishGreiner bio-one628160
BisturiFeather bisturi monouson. 21 Concentrazione finale: in vivo:  300 ng/ 100 µ L
StereomicroscopioZeissStemi508
Siringa (lavaggio corneale/iride)BD Microlane27 G x 3/4 - Nr.20 Siringa 0,4 x 19 mm
(immunizzazione i.p)BD Microlane24 G1"-Nr 17, 055* 25 mm
Kit per

Riferimenti

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Gilbard, J. P., Rossi, S. R., Heyda, K. G. Tear film and ocular surface changes after closure of the meibomian gland orifices in the rabbit. Ophthalmology. 96 (8), 1180-1186 (1989).
  2. Mishima, S., Maurice, D. M. The oily layer of the tear film and evaporation from the corneal surface. Experimental Eye Research. 1, 39-45 (1961).
  3. Gipson, I. K. The ocular surface: The challenge to enable and protect vision: The Friedenwald lecture. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 48 (10), 4391-4398 (2007).
  4. Hahn, J., et al. Aggregated neutrophil extracellular traps resolve inflammation by proteolysis of cytokines and chemokines and protection from antiproteases. The FASEB Journal. 33 (1), 1401-1414 (2019).
  5. Leppkes, M., et al. Vascular occlusion by neutrophil extracellular traps in COVID-19. EBioMedicine. 58, 102925(2020).
  6. Munoz, L. E., et al. Neutrophil extracellular traps initiate gallstone formation. Immunity. 51 (3), 443-450 (2019).
  7. Schapher, M., et al. Neutrophil extracellular traps promote the development and growth of human salivary stones. Cells. 9 (9), 2139(2020).
  8. Mahajan, A., et al. Frontline science: Aggregated neutrophil extracellular traps prevent inflammation on the neutrophil-rich ocular surface. Journal of Leukocyte Biology. 105 (6), 1087-1098 (2019).
  9. DEWS Definition and Classification Subcommittee. The definition and classification of dry eye disease: Report of the Definition and Classification Subcommittee of the International Dry Eye Workshop. The Ocular Surface. 5 (2), 75-92 (2007).
  10. Nichols, K. K., et al. The international workshop on meibomian gland dysfunction: Executive summary. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 52 (4), 1922-1929 (2011).
  11. Mahajan, A., et al. Aggregated neutrophil extracellular traps occlude Meibomian glands during ocular surface inflammation. The Ocular Surface. 20, 1-12 (2021).
  12. Jester, B. E., Nien, C. J., Winkler, M., Brown, D. J., Jester, J. V. Volumetric reconstruction of the mouse meibomian gland using high-resolution nonlinear optical imaging. The Anatomical Record. 294 (2), 185-192 (2011).
  13. Nien, C. J., et al. Age-related changes in the meibomian gland. Experimental Eye Research. 89 (6), 1021-1027 (2009).
  14. Parfitt, G. J., Xie, Y., Geyfman, M., Brown, D. J., Jester, J. V. Absence of ductal hyper-keratinization in mouse age-related meibomian gland dysfunction (ARMGD). Aging. 5 (11), 825-834 (2013).
  15. Lambert, R. W., Smith, R. E. Pathogenesis of blepharoconjunctivitis complicating 13-cis-retinoic acid (isotretinoin) therapy in a laboratory model. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 29 (10), 1559-1564 (1988).
  16. Jester, J. V., Nicolaides, N., Kiss-Palvolgyi, I., Smith, R. E. Meibomian gland dysfunction. II. The role of keratinization in a rabbit model of MGD. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 30 (5), 936-945 (1989).
  17. Jester, J. V., et al. In vivo biomicroscopy and photography of meibomian glands in a rabbit model of meibomian gland dysfunction. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 22 (5), 660-667 (1982).
  18. Lambert, R., Smith, R. E. Hyperkeratinization in a rabbit model of meibomian gland dysfunction. American Journal of Ophthalmology. 105 (6), 703-705 (1988).
  19. Knop, E., Knop, N., Millar, T., Obata, H., Sullivan, D. A. The international workshop on meibomian gland dysfunction: Report of the subcommittee on anatomy, physiology, and pathophysiology of the meibomian gland. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 52 (4), 1938-1978 (2011).
  20. Huang, W., Tourmouzis, K., Perry, H., Honkanen, R. A., Rigas, B. Animal models of dry eye disease: Useful, varied and evolving (Review). Experimental and Therapeutic Medicine. 22 (6), 1394(2021).
  21. Reyes, N. J., et al. Neutrophils cause obstruction of eyelid sebaceous glands in inflammatory eye disease in mice. Science Translational Medicine. 10 (451), (2018).
  22. Knop, E., Korb, D. R., Blackie, C. A., Knop, N. The lid margin is an underestimated structure for preservation of ocular surface health and development of dry eye disease. Developments in Ophthalmology. 45, 108-122 (2010).
  23. Knop, N., Knop, E. Meibomian glands. Part I: anatomy, embryology and histology of the Meibomian glands. Ophthalmologe. 106 (10), 872-883 (2009).
  24. Nien, C. J., et al. Effects of age and dysfunction on human meibomian glands. Archives of Ophthalmology. 129 (4), 462-469 (2011).
  25. Lio, C. T., Dhanda, S. K., Bose, T. Cluster analysis of dry eye disease models based on immune cell parameters - New insight into therapeutic perspective. Frontiers in Immunology. 11, 1930(2020).
  26. Nguyen, D. D., Luo, L. J., Lai, J. Y. Thermogels containing sulfated hyaluronan as novel topical therapeutics for treatment of ocular surface inflammation. Materials Today Bio. 13, 100183(2022).
  27. Lin, P. H., et al. Alleviation of dry eye syndrome with one dose of antioxidant, anti-inflammatory, and mucoadhesive lysine-carbonized nanogels. Acta Biomaterialia. 141, 140-150 (2022).
  28. Yu, D., et al. Loss of beta epithelial sodium channel function in meibomian glands produces pseudohypoaldosteronism 1-like ocular disease in mice. American Journal of Pathology. 188 (1), 95-110 (2018).
  29. Mauris, J., et al. Loss of CD147 results in impaired epithelial cell differentiation and malformation of the meibomian gland. Cell Death & Disease. 6 (4), 1726(2015).
  30. Ibrahim, O. M., et al. Oxidative stress induced age dependent meibomian gland dysfunction in Cu, Zn-superoxide dismutase-1 (Sod1) knockout mice. PloS One. 9 (7), 99328(2014).
  31. McMahon, A., Lu, H., Butovich, I. A. A role for ELOVL4 in the mouse meibomian gland and sebocyte cell biology. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 55 (5), 2832-2840 (2014).
  32. Miyake, H., Oda, T., Katsuta, O., Seno, M., Nakamura, M. Meibomian gland dysfunction model in hairless mice fed a special diet with limited lipid content. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 57 (7), 3268-3275 (2016).
  33. Schaumberg, D. A., et al. The international workshop on meibomian gland dysfunction: Report of the subcommittee on the epidemiology of, and associated risk factors for, MGD. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 52 (4), 1994-2005 (2011).
  34. Lee, S. Y., et al. Analysis of tear cytokines and clinical correlations in Sjogren syndrome dry eye patients and non-Sjogren syndrome dry eye patients. American Journal of Ophthalmology. 156 (2), 247-253 (2013).
  35. Nakae, S., et al. Antigen-specific T cell sensitization is impaired in IL-17-deficient mice, causing suppression of allergic cellular and humoral responses. Immunity. 17 (3), 375-387 (2002).
  36. von Vietinghoff, S., Ley, K. IL-17A controls IL-17F production and maintains blood neutrophil counts in mice. Journal of Immunology. 183 (2), 865-873 (2009).
  37. Langrish, C. L., et al. IL-23 drives a pathogenic T cell population that induces autoimmune inflammation. Journal of Experimental Medicine. 201 (2), 233-240 (2005).
  38. Chen, Y., et al. Anti-IL-23 therapy inhibits multiple inflammatory pathways and ameliorates autoimmune encephalomyelitis. Journal of Clinical Investigation. 116 (5), 1317-1326 (2006).

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Ristampe e permessi

Richiedi il permesso di riutilizzare il testo o le figure di questo articolo JoVE

Richiedi permesso

Tag

Ocular Surface InflammationMeibomian Gland DysfunctionNeutrophil Extracellular TrapsOcular Exudate CollectionCornea DissectionConjunctiva IsolationEyelid ExcisionInfrared ImagingHistological AnalysisSingle Cell Sequencing

Articoli correlati