Il presente protocollo stabilisce un modello murino di dialisi peritoneale (PD) di fibrosi peritoneale indotta da clorexidina gluconato (CG). Il modello attuale è semplice e facile da usare rispetto ad altri modelli animali PD.
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Articolo metodologico
Un modello di topi di danno peritoneale indotto da clorexidina gluconato
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
La fibrosi peritoneale è un'importante complicanza della dialisi peritoneale (PD). Per indagare e affrontare questo problema, è necessario un modello animale appropriato di PD. Il presente protocollo stabilisce un modello di fibrosi peritoneale indotta da clorexidina gluconato (CG) che imita la condizione di un paziente con PD. La fibrosi peritoneale è stata indotta mediante iniezione intraperitoneale dello 0,1% di CG in etanolo al 15% per 3 settimane (somministrato a giorni alterni), per un totale di nove volte nei topi maschi C57BL / 6. I test funzionali peritoneali sono stati quindi eseguiti il giorno 22. Dopo che i topi sono stati sacrificati, sono stati raccolti il peritoneo parietale della parete addominale e il peritoneo viscerale del fegato. Erano più spessi e più fibrotici se analizzati al microscopio dopo la colorazione tricromatica di Masson. La velocità di ultrafiltrazione è diminuita e il trasporto di massa di glucosio ha indicato un aumento della permeabilità peritoneale indotto da CG. Il modello PD così stabilito può avere applicazioni nel miglioramento della tecnologia PD, nell'efficacia della dialisi e nel prolungamento della sopravvivenza del paziente.
Introduzione
La dialisi peritoneale (PD) è un tipo di terapia sostitutiva renale. Tuttavia, il PD ha problemi che non possono essere risolti. Ad esempio, il trattamento a lungo termine della malattia di Parkinson può causare danni peritoneali, portando infine al fallimento dell'ultrafiltrazione e alla sospensione del trattamento 1,2,3,4,5,6. La fibrosi peritoneale è una delle complicanze più gravi 7,8. La fibrosi peritoneale è ....
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Protocollo
Tutti gli esperimenti sui topi sono stati approvati dal Laboratory Animal Center dell'E-DA Hospital / I-Shou University e sono stati gestiti secondo la "Guida per la cura e l'uso degli animali da laboratorio" (NRC, USA 2011). Per il presente studio sono stati utilizzati topi maschi C57BL/6, di 7-8 settimane.
1. Preparazione chimica
- Preparare l'irritante chimico diluendo lo 0,1% di clorexidina gluconato (CG, vedi Tabella dei materiali) in etanolo al 15%.
2. Trattamento degli animali
- Assegnare tre topi come gruppo di controllo. Eseguire l'....
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Risultati
Nella Figura 1A,B, il peritoneo parietale della parete addominale era marcatamente più spesso e più fibrotico sotto la colorazione tricromatica di Masson17, indicando che nel gruppo esposto a CG, la fibrosi peritoneale è più grave rispetto al gruppo salino di controllo (NS). Nella Figura 2A,B, il peritoneo viscerale delle superfici epatiche era anche marcatamente più spesso e più fibrotico, dimostrando così che nel gruppo.......
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Discussione
In questo studio, un modello di PD murino è presentato mediante iniezione i.p. di CG e i risultati hanno mostrato fibrosi peritoneale e deterioramento funzionale in questo modello, che imitava le condizioni del paziente PD.
Ci sono diversi passaggi critici nel protocollo. In primo luogo, per eseguire un'iniezione i.p. di CG o NS, la pelle della parete addominale del topo deve essere prelevata usando una pinza per prevenire danni agli organi intraperitoneali indotti dalla puntura. In secondo lu.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Ringraziamo sinceramente Shin-Han Tseng per la discussione critica e l'esecuzione parziale dello studio. Questo studio è stato supportato da EDAHP110003 e NCKUEDA110002 della Research Foundation dell'E-DA Hospital e della National Cheng Kung University, Taiwan.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| 0,9% Soluzione salina normale | Y F CHEMICAL CORP., New Taipei City, | Taiwan-10 | |
| % formalina tamponata neutra | Taiwan Burnett International Co., Ltd., Taipei City, Taiwan | 00002A | |
| Analizzatore biochimico automatico | Hitachi Ltd., Tokyo, Giappone | Labospect Serie 008 | per la determinazione della concentrazione di glucosio |
| Soluzione di clorexidina digluconato, 20% in H2O | Sigma-Aldrich, MO, USA | C9394 | diluito allo 0,1% con etanolo al 15% per iniezione |
| Ethanol | Avantor Performance Materials, LLC, PA, USA | BAKR8006-05 | diluito al 15% con soluzione fisiologica normale per la concentrazione di lavoro |
| Glucosio (Dianeal) | Baxter International, Inc., IL, USA | FNB9896 | Soluzione per dialisi commerciale (4,25%) |
| GraphPad Prism 8.0 | GraphPad Software, Inc., CA, US | ||
| L-type Glu 2 assay | FUJIFILM Wako, Giappone | 461-32403 | |
| Xilazina 20 | Juily Pharmaceutical Co., Ltd., New Taipei City, | Taiwan-Zoletil | |
| 50 | Virbac Laboratories, Carros, Francia | - |
Riferimenti
- Han, S. H., et al. Improving outcome of CAPD: twenty-five years' experience in a single Korean center. Peritoneal Dialysis International. 27 (4), 432-440 (2007).
- Kawaguchi, Y., Hasegawa, T., Nakayama, M., Kubo, H., Shigematu, T.
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Ristampe e permessi
