Nel presente protocollo, la funzione di barriera endoteliale della ghiandola sottomandibolare (SMG) è stata valutata iniettando diversi traccianti fluorescenti pesati molecolari nelle vene angolari di modelli animali in vivo sotto un microscopio a scansione laser a due fotoni.
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Articolo metodologico
In vivo Rilevamento della permeabilità vascolare nella ghiandola sottomandibolare del topo
In questo articolo
Sommario
Abstract
La saliva svolge un ruolo importante nella salute orale e generale. La funzione di barriera endoteliale intatta dei vasi sanguigni consente la secrezione di saliva, mentre la disfunzione della barriera endoteliale è correlata a molti disturbi secretori delle ghiandole salivari. Il presente protocollo descrive un metodo di rilevamento della permeabilità paracellulare in vivo per valutare la funzione delle giunzioni strette endoteliali (TJ) nelle ghiandole sottomandibolari di topo (SMG). In primo luogo, dextrans marcati con fluorescenza con diversi pesi molecolari (4 kDa, 40 kDa o 70 kDa) sono stati iniettati nelle vene angolari dei topi. Successivamente, l'SMG unilaterale è stato sezionato e fissato nel supporto personalizzato sotto un microscopio a scansione laser a due fotoni, quindi sono state catturate immagini per vasi sanguigni, acini e condotti. Utilizzando questo metodo, è stata monitorata la perdita dinamica in tempo reale dei traccianti di diverse dimensioni dai vasi sanguigni nei lati basali degli acini e persino attraverso gli epiteli acinosi nei dotti per valutare l'alterazione della funzione della barriera endoteliale in condizioni fisiologiche o fisiopatologiche.
Introduzione
Varie ghiandole salivari producono saliva, che agisce principalmente come prima linea di difesa contro le infezioni e aiuta la digestione, svolgendo così un ruolo essenziale nella salute orale e generale1. L'afflusso di sangue è fondamentale per la secrezione delle ghiandole salivari poiché fornisce costantemente acqua, elettroliti e molecole che formano la saliva primaria. La funzione di barriera endoteliale, regolata dal complesso a giunzione stretta (TJ), limita rigorosamente e delicatamente la permeazione dei capillari, che sono altamente permeabili all'acqua, ai soluti, alle proteine e persino alle cellule che si spostano dai vasi sanguign....
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Protocollo
Tutte le procedure sperimentali sono state approvate dal Comitato etico per la ricerca sugli animali, Centro di scienze della salute dell'Università di Pechino, e sono conformi alla Guida per la cura e l'uso degli animali da laboratorio (pubblicazione NIH n. 85-23, rivista nel 1996). Per il presente studio sono stati utilizzati topi maschi wild-type (WT) nella fascia di età di 8-10 settimane. Gli animali da esperimento sono stati trattati con cura per ridurre al minimo il loro dolore e disagio.
1. Procedure relative agli animali
- Preparare e somministrare gli anestetici e i traccianti.
- Mantenere condizioni s....
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Risultati
Seguendo il protocollo, l'SMG unilaterale è stato collegato a un supporto su misura e la ghiandola è stata tenuta il più lontano possibile dal corpo del topo per evitare che la respirazione causasse artefatti di movimento. Il rapido flusso dei globuli rossi (punti neri) nei vasi sanguigni è stato osservato al microscopio. Dopo aver trovato il campo di tessuto sotto una lente oculare, si deve passare a manipolare il software del microscopio. Nel gruppo di controllo, entrambi i traccianti esistevano nei vasi sanguigni del .......
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Discussione
Il mantenimento e la regolazione della funzione della barriera endoteliale sono essenziali per l'omeostasi vascolare. Le cellule endoteliali e le loro giunzioni intercellulari svolgono un ruolo critico nel mantenimento e nel controllo dell'integrità vascolare12. La forza di taglio del flusso sanguigno, i fattori di crescita e i fattori infiammatori possono causare cambiamenti nella permeabilità vascolare e, quindi, partecipare all'insorgenza e allo sviluppo di malattie sistemiche come ipertensione.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Questo studio è stato sostenuto dalla National Natural Science Foundation of China (sovvenzioni 31972908, 81991500, 81991502, 81771093 e 81974151) e dalla Beijing Natural Science Foundation (grant 7202082).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Microscopio a 2 fotoni (TCS-SP8 DIVE) | Leica, Germania | ||
| destrano marcato con FITC da 4 kDa | Sigma Aldrich | 46944 | |
| destrano marcato con RODAMINA B da 70 kDa | Sigma Aldrich | R9379 | |
| Nichel per la separazione dei tessuti smussato | Bejinghuabo Company | NZW28 | |
| Crema depilatoria | Veet | ||
| Siringa sterile monouso | Zhiyu Company | 1 mL | |
| Image J software | National Institutes of Health | ||
| Siringa per insulina | Becton, Dickinson and Company 0253316 | 1 mL | |
| Leica Application Suite X software | Leica Microsystems | ||
| Microtubes | Axygen | MCT-150-C | 1,5 mL |
| Phosphate buffered soluzione salina 1x | Servicebio | G4207-500 | |
| Forbici per tessuti | Bejinghuabo Company | M286-05 | |
| Tribromoetanolo | JITIAN Bio | JT0781 |
Riferimenti
- Carpenter, G. H. The secretion, components, and properties of saliva. Annual Review of Food Science and Technology. 4, 267-276 (2013).
- Garrett, J. R. The proper role of nerves in salivary secretion: A review. Journal of Dental Research.
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Ristampe e permessi
