La velocità di filtrazione glomerulare (GFR) è il marker ideale per valutare la funzionalità renale. Tuttavia, il metodo di misurazione standard che utilizza l'iniezione di inulina con analisi seriale del sangue e delle urine non è pratico. Questo articolo delinea un metodo pratico per misurare la GFR transdermica nei suinetti.
È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Articolo metodologico
Misurazione transdermica della velocità di filtrazione glomerulare nei suinetti ventilati meccanicamente
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
La misurazione transdermica della velocità di filtrazione glomerulare (GFR) è stata utilizzata per valutare la funzionalità renale negli animali coscienti. Questa tecnica è ben consolidata nei roditori per studiare il danno renale acuto e la malattia renale cronica. Tuttavia, la misurazione della GFR utilizzando il sistema transdermico non è stata convalidata nei suini, una specie con un sistema renale simile a quello umano. Quindi, abbiamo studiato l'effetto della sepsi sulla GFR transdermica in suini neonatali anestetizzati e ventilati meccanicamente. La sepsi polimicrobica è stata indotta dalla legatura e puntura cecale (CLP). Il sistema di misurazione transdermica della GFR costituito da un sensore di fluorescenza miniaturizzato è stato collegato alla pelle rasata del maiale per determinare la clearance della sinistrina coniugata con fluoresceina-isotiocianato (FITC), un tracciante GFR iniettato per via endovenosa. I nostri risultati mostrano che a 12 ore post-CLP, la creatinina sierica è aumentata con una diminuzione della GFR. Questo studio dimostra, per la prima volta, l'utilità dell'approccio transdermico GFR nel determinare la funzionalità renale nei suini neonatali ventilati meccanicamente.
Introduzione
Una valutazione pratica e quantitativa della funzionalità renale è la misurazione della velocità di filtrazione glomerulare (GFR), che indica quanto bene i reni filtrano il sangue in base al principio di clearance1. Un metodo precedente di misurazione della GFR prevedeva l'iniezione endovenosa di composti esogeni come l'inulina o la sinistrina, conducendo misurazioni seriali dei livelli plasmatici/urinari per rilevarne la clearance 2,3. Questo metodo è macchinoso e richiede la raccolta seriale di campioni di plasma e urina4. Un'alternativa è la misurazione dei pr....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Protocollo
Le procedure sono scritte secondo gli standard nazionali per la cura e l'uso di animali da laboratorio e sono state approvate dall'Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) dell'Università del Tennessee Health Science Center (UTHSC).
NOTA: I suinetti nel gruppo sperimentale sono sottoposti a legatura cecale e puntura, mentre il gruppo fittizio subisce solo l'apertura dell'addome senza legatura o puntura cecale. I suinetti di entrambi i gruppi sono tenuti sotto anestesia per 12 ore dopo la procedura per consentire il tempo sufficiente per la sepsi e il danno renale acuto (AKI) nel gruppo sperimentale. La misurazione transdermica de....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Risultati
In questa sezione, presentiamo per la prima volta i dati rappresentativi dell'uso della GFR transdermica nei suini neonatali. Abbiamo usato un modello di legatura cecale e puntura che ha precedentemente dimostrato di ridurre la funzionalità renale28. Di conseguenza, abbiamo ipotizzato che nei nostri suini CLP, ci dovrebbe essere un calo acuto della GFR corrispondente all'AKI, e questo dovrebbe essere rilevato sul dispositivo GFR transdermico come aumento del tempo di clearance (t1/2), c.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Discussione
Questo articolo descrive i passaggi pratici per determinare la funzionalità renale nei suini utilizzando i monitor GFR transdermici miniaturizzati e la sinistrina FITC in un modello di suino neonatale anestetizzato ventilato meccanicamente. Articoli precedenti hanno stabilito protocolli sperimentali transdermici GFR nei roditori11,12,14, ma non esistono protocolli nei suini.
Recentemente, c'è stata un.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Ringraziamenti
Questo studio è stato supportato dalle sovvenzioni del National Institutes of Health R01 DK120595 e R01 DK127625 assegnate al Dr. Adebiyi. Il contenuto di questo documento è di esclusiva responsabilità degli autori e non rappresenta necessariamente le opinioni ufficiali del National Institutes of Health. Grazie al Dr. Daniel Schock-Kusch, direttore del sito presso MediBeacon GmbH, per i suoi consigli.
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Alpha - Chloralosio | Sigma-Aldrich | C0128-25G | Utilizzato per la manutenzione dell'anestesia |
| Seta intrecciata nera 3-0 | Specialità chirurgiche | SP117 | Cravatta di seta per trazione e legatura dei vasi sanguigni |
| Macchina per centrifugazione AccuSpin 8C | Fischer Scientific | 75-008-821 | Utilizzato per estrarre il plasma da un campione di sangue intero |
| Tubo endotracheale 3.0 non cuffiato | Progressive Medical International | 1109021995 | inserito attraverso la tracheostomia |
| FITC-Sinistrin 1.0 g | MediBeacon Inc. | FTCF S001 | Conservare a temperatura ambiente e proteggere dalla luce |
| GEM Premier 3000 Analizzatore di gas ematici | Strumentazione Laboratorio | 5700 | Per l'analisi dei gas ematici al letto del paziente |
| Termoforo di medie dimensioni 20 pollici x 29 in | Adroit Medical Systems | V029 | Si collega alla pompa per terapia del |
| calore HTP-Pompa per terapia del calore | Adroit Medical Systems | HTP | Consente di impostare la temperatura secondo necessità. |
| IDEXX Catalyst One | IDEXX Laboratories | 89-92525-00 | Analisi della creatinina plasmatica |
| Catetere invasivo per la pressione arteriosa 3,5Fr | Millar | SPR-524 | dell'arteria femorale |
| con regolatore di flusso | True Care | TCRTCBINF033G | Utilizzato per collegare la sacca di fluido IV al catetere venoso |
| Ketamine | Covetrus | 68317 | Utilizzato per l'induzione dell'anestesia |
| Software di analisi MediBeacon versione 3.0 | MediBeacon Inc. | N/A | Programma software utilizzato per l'analisi dei dati per ottenere l'emivita e la curva della clearance della sinistrina |
| Unità filtrante per siringa Millex-GV 0,22 &; m | Millipore Sigma | SLGVR33RS | Filtro per siringa per iniezione di cloralosio |
| Ventilatore per neonati/neonati | Sechrist Millennium | 20409 | Collegato all'alimentazione dell'aria per fornire ventilazione attraverso il tubo endotracheale |
| Fenobarbital Sodico + Fenitoina Sodica (Euthasol) | Covetrus | 72934 | Utilizzato per l'eutanasia |
| Ringer Lattato 500 mL sacca | Baxter | 2B2323Q | Guanti sterili per infusione di fluidi di manutenzione |
| Henry Schein | 104-5920 | Utilizzato dall'operatore durante l'intervento chirurgico | |
| Camice sterile | Halyard Health | 95021 | Utilizzato dall'operatore durante |
| l'intervento chirurgico Asciugamano steril | Medline | 42131704 | Utilizzato come telo per mantenere il campo sterile durante l'operazione |
| Suture 3-0 ago da taglio inverso in seta | Ethicon | NC1842168 | Utilizzato per suturare gli strati della parete addominale |
| Mini monitor GFR transdermico | MediBeacon Inc. | TDM004 | Batteria e connettore USB inclusi nella confezione |
| Cerotto adesivo per monitor transdermico | MediBeacon Inc. | PTC-SM001 | Cerotto adesivo doppio per sonda GFR |
| Nastro ombelicale 1/8 in x 20 yds | Fisher Scientific | NC9303017 | Per fissare il tubo endotracheale |
| Catetere venoso Dimensioni PE/5 | Micro tubo medico | BB31695 | Per l'incannulamento della vena femorale |
| Xilazina | Covetrus | 61035 | Utilizzato per l'induzione dell'anestesia |
Riferimenti
- Pasala, S., Carmody, J. B. How to use... serum creatinine, cystatin C and GFR. Archives of Disease in Childhood Education and Practice Edition. 102 (1), 37-43 (2017).
- Smith, H. W. The Kidney: Structure and Function in Health and Disease. , Oxford Universit....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Ristampe e permessi
