Questo lavoro mira a valutare e rivedere la procedura di saggio biologico di letalità dell'Artemia salina , identificata anche come saggio di letalità dei gamberetti di salamoia. Questo metodo semplice ed economico fornisce informazioni sulla tossicità generale (considerata come una valutazione preliminare della tossicità) dei campioni, vale a dire i prodotti naturali.
È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Articolo metodologico
Saggio biologico di letalità con Artemia salina L.
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
I prodotti naturali sono stati utilizzati fin dall'antichità per produrre medicinali. Al giorno d'oggi, ci sono molti farmaci chemioterapici ottenuti da fonti naturali e utilizzati contro una pletora di malattie. Sfortunatamente, la maggior parte di questi composti spesso mostrano tossicità sistemica ed effetti avversi. Al fine di valutare meglio la tollerabilità di campioni selezionati potenzialmente bioattivi, il gambero salamoia (Artemia salina) viene generalmente utilizzato come modello negli studi di letalità. Il test di A. salina si basa sulla capacità dei composti bioattivi studiati di uccidere i microcrostacei nel loro stadio larvale (naupli). Questo metodo rappresenta un comodo punto di partenza per gli studi di citotossicità, nonché per lo screening della tossicità generale di prodotti sintetici, semisintetici e naturali. Può essere considerato un test semplice, rapido e a basso costo, rispetto a molti altri saggi (cellule in vitro o ceppi di lievito, zebrafish, roditori) generalmente adatti agli scopi sopra indicati; Inoltre, può essere facilmente eseguito anche senza alcuna formazione specifica. Nel complesso, il saggio di A. salina rappresenta uno strumento utile per la valutazione preliminare della tossicità di composti selezionati e il frazionamento bioguidato di estratti di prodotti naturali.
Introduzione
I prodotti naturali di piante, animali o microrganismi sono stati una crescente area di interesse nel corso degli anni nello sviluppo di nuove molecole bioattive a causa della loro variegata gamma di attività biologiche e farmacologiche1. Tuttavia, gli effetti collaterali associati, la resistenza ai farmaci o l'inadeguata specificità degli agenti, specialmente se usati come farmaci antitumorali, rappresentano i principali fattori che possono portare a un trattamento inefficace 1,2.
Negli ultimi decenni sono stati scoperti diversi agenti citotossici di origine....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Protocollo
1. Preparazione dell'attrezzatura
- Acquisire attrezzature di schiusa disponibili in commercio. Selezionare un luogo adatto per installare l'attrezzatura di schiusa (Figura 2A). Posizionare il contenitore a forma di imbuto nel supporto nero (incluso nel set) e ruotare l'imbuto in una direzione adatta per vedere il segno di livello e il rubinetto.
- Per realizzare attrezzature di migrazione fatte a mano, tagliare la parte superiore di due bottiglie di plastica da 0,5 L (5,8 cm di diametro) per ottenere un'altezza finale di 12 cm. Creare un foro di 1,5 cm di diametro su un lato a 7 cm dal fondo in ogni botti....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Risultati
La tossicità generale di alcuni prodotti naturali recentemente studiati dal nostro gruppo è stata valutata attraverso il saggio biologico sulla letalità dei gamberetti in salamoia. Quattro estratti (Pa- P. ambigerus; Pb- P. barbatus; Pc- P. cylindraceus; e Pe- P. ecklonii) del genere Plectranthus , noti per la loro attività antiossidante (risultati non pubblicati), sono stati testati. Inoltre, due composti naturali (1 e 2) ottenuti da Plectranthus spp., e tre derivati.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Discussione
Negli ultimi anni, la comunità scientifica ha aumentato la sua attenzione verso modelli alternativi per gli screening di tossicità21. Oltre al saggio biologico sulla letalità di A. salina, vengono solitamente eseguite altre metodologie per la valutazione della tollerabilità del campione e includono saggi biologici di vertebrati (come roditori), invertebrati (come il pesce zebra), metodi in vitro che utilizzano ceppi o cellule di lievito e metodi in silico
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Dichiarazioni
Gli autori non dichiarano conflitti di interesse, finanziari o di altro tipo.
Ringraziamenti
In memoria del professor Amilcar Roberto.
Questo lavoro è stato sostenuto finanziariamente dalla Fundação para a Ciência e a Tecnologia (FCT, Portogallo) nell'ambito dei progetti UIDB/04567/2020 e UIDP/04567/2020 attribuiti a CBIOS e PhD grant SFRH/BD/137671/2018 (Vera Isca).
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Piastre a 24 pozzetti | Thermo Fisher Scientific, Danimarca | 174899 | Thermo Scientific Nunc Up Cell 24 |
| multipiatto Foglio di alluminio | Albal-Può | essere acquistato nel supermercato | |
| Artemio Set | JBL GmbH and Co. KG, D-67141, Neuhofen Germania | 61066000 | Può essere acquistato nei negozi di animali |
| Microscopio binoculare | Ceti, Belgio | 1700.0000 | Flexum-24AED, 220-240 V, 50 Hz |
| Bottiglie | - | - | 0,5 L Diametro: 5,8 cm; Altezza: 12 cm |
| Cisti di artemia salina | JBL GmbH and Co. KG, D-67141, Neuhofen Germania | 3090700 | Può essere acquistato nei negozi di animali |
| Sale per artemia salina | JBL GmbH and Co. KG, D-67141, Neuhofen Germania | 3090600 | Può essere acquistato nei negozi di animali |
| Dimetilsolfossido (DMSO) | Prodotti chimici VWR | CAS: 67-68-5 | Purezza 99% |
| Punte scartabili | Diamante | F171500 | Gamma di volume: 100 - 1000 &; L |
| Eppendorf microprovette | MARCA | 7.80.546 | Microprovette, PP, 2 mL, BIO-CERT PCR QUALITY |
| Pallone di Erlenmeyer | VWR prodotti chimici | 4,47,109 | volume: 100 mL |
| Bicchiere di vetro | Normax | 3.2111654N | Volume: 1000 mL |
| Guanti | Guantes Luna | GLSP3-GraphPad | |
| Prism GraphPad | Software, San Diego, CA, USA-GraphPad | Prism versione 5.00 per Windows, www.graphpad.com, consultato il 5 febbraio 2021; statistica commerciale software di analisi | |
| Fatto in casa A. salina Coltivatore | - | - | Fatto in casa: due bottiglie di plastica collegate da un tubo |
| Colla a caldo | Parkside | PHP500E3 | 230 V, 50 Hz, 25 W |
| Incubatore | Heidolph Instruments, Danimarca | - | Un'apparecchiatura Heidolph Unimax 1010 e una Heidolph Inkubator 1006 |
| Light | Roblan | SKYC3008FE14 | lampadina a LED |
| Micropipette | VWR prodotti chimici | 613-5265 | Gamma di volume: 100 - 1000 &; L |
| Bicromato di potassio (K2Cr2O7) | VWR prodotti | chimici CAS: 7778-50-9 | Purezza 99% |
| Pompa ProAir a50 | JBL GmbH and Co. KG, D-67141, Neuhofen Germania | - | Incluso nel kit Artemio Set+1 |
| Tubo di gomma | - | - | 1,3 cm di diametro esterno e 0,9 cm di diametro interno |
| Asta di agitazione | VWR chemicals | 441-0147 |  6 mm, 250 mm |
| Termometro | VWR prodotti chimici | 620-0821 | 0 - 100 gradi E |
Riferimenti
- Ntungwe, N. E., et al. Artemia species: An important tool to screen general toxicity samples. Current Pharmaceutical Design. 26 (24), 2892-2908 (2020).
- Cragg, G. M., Newman, D. J. Natural products: A continuing sour....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Ristampe e permessi
