Metodologie ecotossicologiche per valutare biomarcatori a diverse scale negli anuri neotropicali

Sommario

In questo articolo, vengono presentati metodi ecotossicologici standardizzati per la valutazione di biomarcatori in specie di anuri neotropicali. In particolare, questo articolo descrive in dettaglio diverse metodologie a diverse scale di valutazione ecotossicologica, come i livelli genetico, istologico-cellulare, biochimico, morfologico e individuale.

Abstract

Le nuove domande in ecotossicologia evidenziano l'importanza di applicare una batteria di biomarcatori, in quanto ciò si traduce in previsioni ecotossicologiche che migliorano non solo l'interpretazione degli effetti dei fattori di stress ambientale sugli organismi, ma anche la determinazione del loro possibile impatto. È noto che l'uso di biomarcatori ecotossicologici a diversi livelli di organizzazione consente la previsione delle risposte biologiche degli organismi ai fattori di stress ambientale, utile nella valutazione del rischio ambientale.

Tuttavia, è necessario considerare l'ottimizzazione delle procedure di base, generare dati storici in gruppi di controllo e impiegare specifici saggi biologici per valutare le risposte in organi e tessuti al fine di chiarire la natura e la variazione degli effetti osservati. Pertanto, il presente lavoro si propone di descrivere diverse metodologie ecotossicologiche impiegate in tutti gli stadi degli anuri neotropicali a diversi livelli ecologici e di validarle come biomarcatori utili da utilizzare sia in fauna selvatica che in condizioni di laboratorio. In questo lavoro, questi biomarcatori sono stati applicati a livello individuale/organismico (indice di condizione corporea), istologico/fisiologico (istopatologia, analisi istometriche e pigmentarie), biochimico (enzimi dello stress ossidativo) e genetico (danno diretto e ossidativo nel DNA mediante saggio della cometa).

Sebbene queste metodologie presentino piccole variazioni o modifiche a seconda della specie, queste tecniche forniscono biomarcatori efficaci per valutare l'effetto degli xenobiotici sugli anuri, che possiedono determinate caratteristiche che li rendono utili specie indicatrici degli ecosistemi acquatici e terrestri. In conclusione, la batteria di biomarcatori impiegati nel presente studio si è dimostrata adeguata per stimare le risposte tossiche negli anuri neotropicali e può essere ulteriormente raccomandata come bioindicatore per identificare l'impatto degli inquinanti sugli ecosistemi acquatici della regione. Infine, si raccomanda di raggiungere la standardizzazione di questi importanti biomarcatori per gli anuri in regioni specifiche, nonché di includerli eventualmente nelle valutazioni del rischio e nel processo decisionale.

Introduzione

L'immissione di fattori di stress ambientale nei corpi idrici naturali può influire sulla salute dell'ecosistema acquatico¹. L'esposizione a questi fattori di stress ambientale può influenzare la sopravvivenza o l'idoneità degli organismi acquatici attraverso diversi meccanismi di tossicità, tra cui l'esposizione diretta (sia a breve che a lungo termine)². Pertanto, i biotest di laboratorio standardizzati per valutare gli endpoint tossicologici correlati alla fitness e alla sopravvivenza possono essere una stima inaffidabile dei numerosi effetti indiretti dello stress sul campo. Inoltre,....

Protocollo

Le tecniche successive includono il precedente sacrificio dell'animale, che è stato effettuato in conformità con gli standard etici internazionali 46,47,48, e la successiva dissezione e ablazione degli organi. Gli animali sono stati catturati con l'autorizzazione del Ministero dell'Ambiente, dell'Agricoltura e della Produzione della Provincia di San Luis (Risoluzione 49-PMA2019). Le modalità di sacrificio e di eutanasia degli animali sono state debitamente approvate dai protocolli del Comitato Istituzionale per la Cura e l'Uso degli Animali (....

Risultati

Tutte le tecniche di biomarcatori qui presentate sono metodi semplici, rapidi, convenienti, sensibili, a basso costo e accurati. Per ogni biomarcatore, è importante notare quanto segue.

Livello individuale
Indice di massa in scala
Scattare fotografie su scala millimetrica è di grande importanza poiché questo valore verrà utilizzato per calibrare il software, e questo si traduce in una migliore obiettività rispetto alla misura del calibro quando si prende.......

Discussione

I biomarcatori a livello individuale sono molto semplici da determinare e molto economici, poiché l'esame di questi biomarcatori richiede solo poche attrezzature che di solito sono disponibili in qualsiasi laboratorio di ricerca. Inoltre, questi biomarcatori forniscono informazioni generali sulla salute e l'idoneità degli animali. Il numero di animali impiegati in ciascun protocollo è fondamentale per ottenere risultati affidabili. A causa della variabilità dei dati, è necessario un mini.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Bilancia
Alimentazione per elettroforesi	Enduro	E0203-250V
Eosin	Fotomicroscopio
	Olimpo	BX50	Dotato di un'appropriata combinazione
di filtri Ematossilina di Harris	Merck
Fotocamera ad alta risoluzione			>16 megapixel
Omogeneizzatore
Camera di elettroforesi orizzontale	Sigma
Microcentrifuge	Denver Instrument
Microscope	Leica	DM4000 B	Dotato di sistema di acquisizione delle immagini Leica DFC 280
Microtomo	Leica	2265
Paraplast	Sigma	P3558
Personal Computer			Equipaggiato con Mac OS X, Lynux o Windows
Centrifuga
refrigerata UV– Spettrofotometro Vis	Rayleigh	723G	con lampada UV

analitica a fluorescenza Merck