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Articolo metodologico

Modello elettromagnetico controllato a testa chiusa di lieve lesione cerebrale traumatica nei topi

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DOI:

10.3791/64556

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28 settembre 2022

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In questo articolo

Sommario

Il protocollo descrive una lieve lesione cerebrale traumatica in un modello murino. In particolare, viene spiegato un protocollo passo-passo per indurre un lieve trauma cranico chiuso della linea mediana e la caratterizzazione del modello animale.

Abstract

Modelli animali altamente riproducibili di lesioni cerebrali traumatiche (TBI), con patologie ben definite, sono necessari per testare gli interventi terapeutici e comprendere i meccanismi di come un TBI altera la funzione cerebrale. La disponibilità di più modelli animali di TBI è necessaria per modellare i diversi aspetti e gravità del TBI osservati nelle persone. Questo manoscritto descrive l'uso di un trauma cranico chiuso della linea mediana (CHI) per sviluppare un modello murino di trauma cranico lieve. Il modello è considerato lieve perché non produce lesioni cerebrali strutturali basate sul neuroimaging o sulla perdita neuronale grossolana. Tuttavia, un singolo impatto crea abbastanza patologia che il deterioramento cognitivo è misurabile almeno 1 mese dopo l'infortunio. Un protocollo passo-passo per indurre un CHI nei topi utilizzando un impattatore elettromagnetico guidato stereotassicamente è definito nel documento. I vantaggi del modello CHI della linea mediana lieve includono la riproducibilità dei cambiamenti indotti da lesioni con bassa mortalità. Il modello è stato caratterizzato temporalmente fino a 1 anno dopo la lesione per cambiamenti neuroimaging, neurochimici, neuropatologici e comportamentali. Il modello è complementare ai modelli a cranio aperto di impatto corticale controllato utilizzando lo stesso dispositivo di impatto. Pertanto, i laboratori possono modellare sia TBI diffusi lievi che TBI focali da moderati a gravi con lo stesso impattatore.

Introduzione

La lesione cerebrale traumatica (TBI) è causata da una forza esterna sul cervello, spesso associata a cadute, lesioni sportive, violenza fisica o incidenti stradali. Nel 2014, i Centers for Disease Control and Prevention hanno stabilito che 2,53 milioni di americani hanno visitato il pronto soccorso per cercare assistenza medica per incidenti correlati al TBI1. Poiché il TBI lieve (mTBI) rappresenta la maggior parte dei casi di TBI, negli ultimi decenni sono stati adottati più modelli di mTBI, che includono caduta di peso, trauma cranico chiuso guidato da pistone e impatto corticale controllato, lesione rotazionale, lieve lesione da percussione....

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Protocollo

Gli esperimenti eseguiti sono stati approvati dall'Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) dell'Università del Kentucky, e durante lo studio sono state seguite sia le linee guida ARRIVE che la Guida per la cura e l'uso degli animali da laboratorio.

1. Configurazione chirurgica

NOTA: I topi sono alloggiati in gruppi di 4-5 / gabbia, l'umidità nella stanza dell'alloggiamento è mantenuta al 43% -47% e la temperatura è mantenuta a 22-23 ° C. Ai topi viene dato accesso ad libitum a cibo e acqua ed esposti a un ciclo luce/buio di 12 ore / 12 ore (7:00/19:00).

  1. Utilizzare u....

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Risultati

Questo dispositivo di impatto elettromagnetico stereotassico è versatile. Viene utilizzato sia per un impatto corticale controllato a cranio aperto (CCI) o per un intervento chirurgico di trauma cranico chiuso (CHI). Inoltre, la gravità della lesione può essere modulata modificando i parametri della lesione come la velocità dell'impatto, il tempo di permanenza, la profondità dell'impatto, la punta del dispositivo d'urto e l'obiettivo della lesione. Qui è descritto un intervento chirurgico CHI utilizzando un impattatore d.......

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Discussione

Diversi passaggi sono coinvolti nella ricreazione di un modello di lesione coerente utilizzando il modello descritto. In primo luogo, è fondamentale fissare correttamente l'animale nella cornice stereotassica. La testa dell'animale non dovrebbe essere in grado di muoversi lateralmente e il cranio dovrebbe essere completamente piatto con bregma e lambda che leggono le stesse coordinate. Posizionare correttamente le barre auricolari è l'aspetto più difficile di questo intervento chirurgico, e questo può essere appreso solo.......

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Dichiarazioni

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Ringraziamenti

Questo lavoro è stato supportato in parte dal National Institutes of Health con i numeri di premio R01NS120882, RF1NS119165 e R01NS103785 e il numero di premio del Dipartimento della Difesa AZ190017. Il contenuto è di esclusiva responsabilità degli autori e non rappresenta le opinioni ufficiali del National Institutes of Health o del Dipartimento della Difesa.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Applicatore Autoclip da 9 mmBraintree scientificACS- APLSurgery
Dispositivo di rimozione Autoclip da 9 mmBraintree scientificACS- RMVSurgery
Autoclip da 9 mm, Confezione da 1.000 clipBraintree scientificACS- CSSurgery (Staples)
Software Aperio ImageScope Leica BioSystemsNA IHC
BladeFLASK Blade RemoverFisher Scientific22-444-275Chirurgia
Applicatore di punte in cotoneVWR89031-270Chirurgia
Cornice stereotassica digitale del mouseStoelting51730DChirurgia
Dumont #7 PinzeRobozRS-5047Chirurgia
Barre auricolariStoelting51649Chirurgia
EthoVision XT 11.0 Noldus Information TechnologyNARAWM 
Fiber-LiteDolan-Jeffer IndustriesUN16103-DGChirurgia
Fisherbrand Lampadina per piccole pipetteFisher Scientific03-448-21Apparato di supporto per la testa
Gemini Avoidance SystemSan Diego InstrumentsNACuscinetto riscaldante per evitamento attivo
Sunbeam 732500000UPreparazione chirurgica
HRP capra coniugata anti-coniglio IgG Laboratori di ricerca immunologica Jackson111-065-144 IHC
Camera di induzioneKent ScientificVetFlo-0530XSPreparazione chirurgica
Isoflurano, USPCovetrusNDC: 11695-6777-2Chirurgia
Supporto per testa per anestesia gassosa di topoStoelting51609M
Chirurgia Neuropactor Impactor stereotassicoStrumenti per neuroscienzen/aChirurgia: Formalmente distribuito da Lecia come impact one
NexGen Mouse 500Allentown n/aPost-operatorio, gabbia di supporto
ParafilmBemisPM992Apparecchio di supporto per
la testa Peanut - Tagliacapelli professionaleWhal8655-200 Preparazione alla chirurgia
Soluzione di iodio povidone USP, 10% (p/v), 1% (p/v) disponibile Iodio, per laboratorioRicca3955-16Chirurgia
Puralube Vet Unguento, unguento oftalmico di petrolati, lubrificante oculare sterileDechra17033-211-38Chirurgia
Coniglio anti-GFAP DakoZ0334IHC
Coniglio anti-IBA1 Wako019-19741IHC
Labirinto d'acqua a braccio radiale a 8 bracciMazeEngineersn/aRAWM 
BilanciaOHAUS CS serieBAL-101Preparazione chirurgica
Bisturi Manico #7 Solido 6.25" RobozRS-9847Spray
Alcohol Prep Pads (alcol isopropilico 70% v/v)Fisher Brand22-363-750Preparazione chirurgica
Sistema di anestesia a basso flusso SumnoSuiteKentScientific SS-01Surgery
Siringa da 10 ml Chirurgia Luer-Lok TipBD Bard-Parker302995Apparecchio di supporto per la testa
TimerFisher Scientific6KED8Chirurgia
Crema anestetica topicaL.M.X 4NDC 0496-0882-15Preparazione alla chirurgia
Triplo unguento antibioticoMajorNDC 0904-0734-31post-operatorio
MasterFlex96410-16Apparecchio di supporto per la testa
Vaporizzatore Sistema di anestesia a canale singoloKent ScientificVetFlo-1210SPreparazione alla chirurgia
Tubo

Riferimenti

  1. Capizzi, A., Woo, J., Verduzco-Gutierrez, M. Traumatic brain injury: An overview of epidemiology, pathophysiology, and medical management. The Medical Clinics of North America. 104 (2), 213-238 (2020).
  2. Bodnar, C. N., Roberts, K. N., Higgins, E. K., Bachstetter, A. D.

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Ristampe e permessi

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