Rilevamento di cellule T polifunzionali in bambini vaccinati con vaccino contro l'encefalite giapponese tramite la tecnica della citometria a flusso

Linlin Zhang; Meng Zhang; Mengjia Liu; Junhong Ai; Jiao Tian; Huizheng Ge; Ran Wang; Zhengde Xie

doi:10.3791/64671

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Articolo metodologico

Rilevamento di cellule T polifunzionali in bambini vaccinati con vaccino contro l'encefalite giapponese tramite la tecnica della citometria a flusso

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DOI:

10.3791/64671

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23 settembre 2022

Linlin Zhang^*¹^,² , Meng Zhang^*¹^,²^,³ , Mengjia Liu¹^,² , Junhong Ai¹^,² , Jiao Tian¹^,² , Huizheng Ge⁴ , Ran Wang¹^,² , Zhengde Xie¹^,²

¹Beijing Key Laboratory of Pediatric Respiratory Infectious Diseases, Key Laboratory of Major Diseases in Children, Ministry of Education, National Clinical Research Center for Respiratory Diseases, Laboratory of Infection and Virology, Beijing Pediatric Research Institute, Beijing Children’s Hospital, Capital Medical University, National Center for Children’s Health, ²Research Unit of Critical Infection in Children, 2019RU016, Chinese Academy of Medical Sciences, ³Department of Pediatric Rehabilitation, Beijing Boai Hospital, School of Rehabilitation Medicine, Capital Medical University, China Rehabilitation Research Center, ⁴Center of Excellence (Beijing), Becton Dickinson Medical Devices (Shanghai) Co Ltd

^* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

Il presente protocollo combina la stimolazione ex vivo e la citometria a flusso per analizzare i profili delle cellule T polifunzionali (T PF) nelle cellule mononucleate del sangue periferico (PBMC₎ all'interno di bambini vaccinati con virus dell'encefalite giapponese (JEV). Il metodo di rilevazione e lo schema di colori della citometria a flusso dei TPF specifici di JEV sono stati testati per fornire un riferimento per studi simili.

Abstract

L'immunità mediata dalle cellule T svolge un ruolo importante nel controllo dell'infezione da flavivirus, sia dopo la vaccinazione che dopo l'infezione naturale. La "qualità" di una cellula T deve essere valutata per funzione e una funzione più elevata è associata a una protezione immunitaria più potente. Le cellule T che possono produrre simultaneamente due o più citochine o chemochine a livello di singola cellula sono chiamate cellule T polifunzionali (T_PFs), che mediano le risposte immunitarie attraverso una varietà di meccanismi molecolari per esprimere marcatori di degranulazione (CD107a) e secernere interferone (IFN)-γ, fattore di necrosi tumorale (TNF)-α, interleuchina (IL)-2 o proteina infiammatoria dei macrofagi (MIP)-1α. Vi è una crescente evidenza che le T_PFsono strettamente correlate al mantenimento della memoria immunitaria a lungo termine e alla protezione e che la loro maggiore proporzione è un importante marker di immunità protettiva ed è importante nel controllo efficace dell'infezione virale e della riattivazione. Questa valutazione si applica non solo a specifiche risposte immunitarie, ma anche alla valutazione delle risposte immunitarie cross-reattive. Qui, prendendo come esempio il virus dell'encefalite giapponese (JEV), il metodo di rilevamento e lo schema di colori della citometria a flusso_{dei PF T}specifici di JEV prodotti dalle cellule mononucleate del sangue periferico di bambini vaccinati contro l'encefalite giapponese sono stati testati per fornire un riferimento per studi simili.

Introduzione

Il virus dell'encefalite giapponese (JEV) è un importante virus trasmesso dalle zanzare appartenente al genere Flavivirus all'interno della famiglia Flaviviridae¹. Molti paesi dell'Asia-Pacifico hanno affrontato a lungo enormi sfide per la salute pubblica a causa dell'enorme carico di malattia causato dall'encefalite giapponese (JE), ma questo è migliorato notevolmente con la crescente disponibilità di vari tipi di vaccinazioni². Le risposte immunitarie protettive adattative evocate dall'infezione naturale o dalla vaccinazione contribuiscono alla prevenzione e alla regolazione antivirale. L'immunità umorale e l'....