È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.

Articolo metodologico

Valutazione ecografica non invasiva della progressione del cancro dell'endometrio nella delezione diretta da Pax8 dei soppressori tumorali Arid1a e Pten nei topi

2.7K visualizzazioni

⸱

DOI:

10.3791/64732

⸱

17 febbraio 2023

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 

In questo articolo

Sommario

Questo protocollo descrive un metodo per monitorare la progressione dei cambiamenti morfologici nel tempo nell'utero in un modello murino inducibile di cancro dell'endometrio utilizzando l'imaging ad ultrasuoni con correlazione ai cambiamenti grossolani e istologici.

Abstract

I tumori uterini possono essere studiati nei topi a causa della facilità di manipolazione e manipolazione genetica in questi modelli. Tuttavia, questi studi sono spesso limitati a valutare la patologia post-mortem negli animali sottoposti a eutanasia in più punti temporali in diverse coorti, il che aumenta il numero di topi necessari per uno studio. L'imaging dei topi negli studi longitudinali può monitorare la progressione della malattia nei singoli animali, riducendo il numero di topi necessari. I progressi nella tecnologia a ultrasuoni hanno permesso di rilevare cambiamenti a livello micrometrico nei tessuti. L'ecografia è stata utilizzata per studiare la maturazione del follicolo nelle ovaie e la crescita dello xenotrapianto, ma non è stata applicata ai cambiamenti morfologici nell'utero del topo. Questo protocollo esamina la giustapposizione della patologia con confronti di imaging in vivo in un modello murino di cancro dell'endometrio indotto. Le caratteristiche osservate dagli ultrasuoni erano coerenti con il grado di cambiamento osservato dalla patologia grossolana e dall'istologia. L'ecografia è risultata altamente predittiva della patologia osservata, supportando l'incorporazione dell'ecografia negli studi longitudinali delle malattie uterine come il cancro nei topi.

Introduzione

I topi rimangono uno dei modelli animali più importanti per i disturbi riproduttivi 1,2,3. Esistono diversi modelli di roditori geneticamente modificati o indotti di tumori ovarici e uterini. Questi studi in genere si basano su più coorti eutanasiche in diversi punti temporali per catturare le tendenze longitudinali nei cambiamenti morfologici e patologici. Ciò impedisce la capacità di acquisire dati continui sullo sviluppo del cancro in un singolo topo. Inoltre, senza conoscere lo stato di progressione della malattia del singolo topo, gli studi di intervento si basano su pun....

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Protocollo

Tutte le procedure e gli esperimenti che coinvolgono i topi sono stati eseguiti secondo i protocolli approvati dal Johns Hopkins Animal Care and Use Committee. Per tutte le procedure, sono stati indossati DPI appropriati, compresi guanti e camici isolanti monouso. Sono state prese precauzioni durante la manipolazione di oggetti taglienti, che sono stati smaltiti correttamente in contenitori di taglienti a scatola rossa immediatamente dopo l'uso. Vedere la tabella dei materiali per i dettagli su tutti i materiali e le attrezzature utilizzati in questo protocollo.

1. Induzione del cancro dell'endometrio in topi iPAD ( <....

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Risultati

I topi transgenici a doppia delezione (iPAD) Pax8-Cre-Arid1a-Pten sono stati mantenuti su un background genetico misto (129S, BALB/C, C57BL/6), come descritto in precedenza14. I topi sono stati tutti alimentati con doxiciclina per 2 settimane per indurre Cre ricombinasi. In precedenti lavori del nostro gruppo, la doxiciclina è stata dosata con sonda gastrica14; Tuttavia, in questo studio, il metodo di induzione del mangime per doxiciclina ha funzionato in .......

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Discussione

Questo protocollo esamina l'utilità degli ultrasuoni per valutare i cambiamenti morfologici uterini nella progressione dell'adenocarcinoma nell'utero nei topi. In questo studio, seguendo l'induzione del cancro dell'endometrio nei topi longitudinalmente, i dettagli anatomici rilevati dagli ultrasuoni sono risultati essere indicatori di patologia grossolana e istologica. Questo apre la porta all'uso di studi longitudinali con un numero minore di topi monitorati mediante ultrasuoni in più punti temporali per seguire la prog.......

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Dichiarazioni

Gli autori non hanno conflitti di interesse da rivelare.

Ringraziamenti

Siamo grati per il finanziamento del programma NCI Ovarian Cancer SPORE P50CA228991, del programma di formazione post-dottorato 5T32OD011089 e del Richard W. TeLinde Endowment, Johns Hopkins University. Il progetto è stato anche in parte finanziato dai sussidi per le spese correnti agli istituti privati di istruzione superiore della Promotion and Mutual Aid Corporation for Private Schools of Japan.

....

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Reagenti e attrezzature utilizzate per la cura degli animali
Dieta per roditori (2018, 625 doxiciclina)EnvigioTD.01306Mangime per topi
Reagenti e apparecchiature utilizzate per l'imaging a ultrasuoni
10 mL iniettabile 0,9% NaCl Hospira, IncRL-7302per fluido isotonico
con supportoin plastica DaiggerEF8313Cuscinetti assorbenti
Camere di induzione per anestesiaApparato Harvard75-2029
Kit assorbitore per anestesia con contenitore assorbitore, supporto, tubo e adattatoriCWE, Inc13-20000Cono e tubo
Aquasonic Clear Gel per ultrasuoni (0,25 litri)Parker Laboratoies08-03Gel per ultrasuoni
BD Plastipak Siringa da 3 mlBD BiosciencesSiringaper 309657
F/Air Scavenger Contenitore di carboneOMNICON80120Sistema di evacuazione per anestesia
Isoflurano, USPVet One502017Agente per anestesia
M1050 Macchina per anestesia mobile non rerespirabileScivena ScientificM1050Vaporizzatore Anestetico
MX550S, Trasduttore 25-55 MHz, 15mm, Trasduttore Linearead Ultrasuoni VisualSonicsMX550S(Sonda)
Nair Hair Aloe & Lozione depilatoria alla lanolina - 9,0 onceNairCrema depilliante
Philips Norelco Multigroomer All-in-One Trimmer Series 7000Philips North AmericaMG7750Clippers
PrecisionGlide 25 G 1" AgoBD Biosciences305125Ago
Puralube Unguento oftalmicoDechra17033-211-38Collirio lubrificante
Vevo 3100 Imaging SistemaVisualSonicsVevo 3100Ecografo
Vevo LAB 5.6.1VisualSonicsVevo LAB 5.6.1Software di analisi degli ultrasuoni
Pad riscaldante in vinile con coperchio, 12 x 15"Sunbeam731-500-000RPad riscaldante
Wd Elements 2TB Archiviazione di baseWestern Digital ElementsWDBU6Y0020BBK-WESNArchiviazione dati
Reagenti e apparecchiature utilizzate per l'immunoistochimica
10% p/v FormalinaFischer ScientificSF98-4Tampone per la fissazione tissutale
Bloccante e diluente senza animali, R.T.U.Laboratori vettoriali Inc.  SP5035Antibody Blocker
Caricato Super Frost Plus VetriniVWR4831-703Vetrini per montaggio su tessuto Tampone
citratoMilliporeSigma  C9999-1000MLEpitope Retrival Buffer (pTEN)
Cytoseal – 60Thermo Scientific8310-4Resina per sigillatura di vetrini
Coperchio con guarnizione in oroThermo Scientific3322Coverslide
Harris Modified HematoxylinMilliporeSigmaHHS32-1LCounterstain
Buffer Hybridization Incubator (Dual Chamber)Fischer Scientific13-247-30QForno per fondere
substrato di parraffina ImmPACT DAB, perossidasi (HRP)Vector Laboratories Inc.SK-4105Substrato di sviluppo del segnale
Kit di rilevamento del polimero IgG anti-coniglio di capra ImmPRESS HRP, PerossidasiVector Laboratories Inc.MP-7451Anticorpo IHC secondario
Oster 5712 Vaporiera digitale per alimentiOster5712Vaporiera per verdure Epitope Retrival
rabbit mAB anti-ARID1aabcamab182560Anticorpo IHC primario (1:1.000)
mAB di coniglio anti-PTENSegnalazione cellulare9559Anticorpo IHC primario (1:100)
Sostituto dell'acqua di rubinetto ScottsMilliporeSigmaS5134-100MLCassetta tampone "Blueing"
Tissue Path IV FischerScientific22272416Cassetta per fissazione tissutale
Trilogy BufferCell Marque  920P-10Epitope Retrival Buffer (ARID1a)
Tampone assorbente il

Riferimenti

  1. Ajayi, A. F., Akhigbe, R. E. Staging of the estrous cycle and induction of estrus in experimental rodents: an update. Fertility Research and Practice. 6, 5(2020).
  2. Kim, S. W., Kim, Y. Y., Kim, H., Ku, S. Y. Animal models closer to intr....

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Ristampe e permessi

Esplora altri articoli

Imaging ecograficomodello murinodelezione di un soppressore tumoraleimaging longitudinalepatologia uterinavalutazione non invasivaimmunoistochimicaistopatologiaprogressione del cancro uterino