Qui viene presentato un protocollo per dimostrare che la capsula di Bazi Bushen (BZBS) può regolare la via di segnalazione RANKL/OPG nel modello di roditore ovariectomizzato attraverso il suo effetto estrogeno-simile.
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Articolo metodologico
Qui viene presentato un protocollo per dimostrare che la capsula di Bazi Bushen (BZBS) può regolare la via di segnalazione RANKL/OPG nel modello di roditore ovariectomizzato attraverso il suo effetto estrogeno-simile.
Questo studio mira a mostrare l'effetto estrogeno-simile della capsula di Bazi Bushen (BZBS), un composto erboristico cinese, nei topi ovariectomizzati. Le femmine di ratto Sprague-Dawley (SD) sono state divise casualmente in sei gruppi: un gruppo operato da sham, un gruppo modello (OVX), un gruppo progynova e gruppi BZBS (1, 2 e 4 d/kg/d). Un'ovariectomia è stata eseguita su tutti i ratti ad eccezione di quelli del gruppo operato con sham. La tomografia micro-computerizzata (micro-CT), la colorazione con ematossilina ed eosina (H&E), l'immunoistochimica e il test di immunoassorbimento enzimatico (ELISA) sono stati eseguiti dopo 4 mesi di trattamento con BZBS. Di conseguenza, rispetto al gruppo OVX, i ratti trattati con BZBS hanno mostrato un aumento del numero e dell'area delle cellule trabecolari dell'osso e del midollo osseo e una diminuzione del numero di cellule adipose. Il volume osseo, il numero trabecolare e lo spessore trabecolare della tibia destra nei gruppi di farmaci sono aumentati e lo spazio trabecolare è diminuito. I livelli sierici di 17β-estradiolo e calcio nei gruppi farmacologici erano elevati, ma i livelli sierici di fosforo, sclerostina, β-CTX e TRACP-5b erano diminuiti. Nei gruppi farmacologici, i livelli di RANKL e sclerostina sono diminuiti, mentre il livello di osteoprotegerina (OPG) è aumentato. In conclusione, questo protocollo ha valutato sistematicamente gli effetti terapeutici e i potenziali meccanismi molecolari dei composti erboristici cinesi nei ratti ovariectomizzati con una varietà di tecniche.
L'osteoporosi postmenopausale (PMOP) è una malattia del sistema scheletrico causata da una funzione ovarica inadeguata, da una diminuzione degli estrogeni e da una maggiore attività degli osteoclasti1, caratterizzata da bassa massa ossea, degenerazione microarchitettonica del tessuto osseo e danno della trabecola ossea. La PMOP è incline a causare fratture e può avere gravi effetti sulla qualità della vita dei pazienti. L'osteoporosi colpisce circa 200 milioni di persone in tutto il mondo2; circa il 40% delle donne in postmenopausa soffre di osteoporosi3 e le frat....
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Gli esperimenti sugli animali sono stati approvati dal Comitato per la Ricerca e l'Etica Animale dell'Istituto di Ricerca Medica Hebei Yiling (numero di approvazione: N2020150). Le 36 femmine di ratto Sprague-Dawley (SD) (3 mesi, del peso di 180-200 g) (vedi Tabella dei materiali) sono state alimentate con cibo normale e acqua pulita nel nuovo centro di valutazione dei farmaci dell'Hebei Yiling Medical Research Institute e sono state esposte alla luce artificiale per 12 ore al giorno in ambienti con temperature controllate (20-26 °C) e umidità relativa (40%-70%).
1. Esperimento sugli ....
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La microstruttura ossea della tibia è stata valutata mediante micro-TC
Il trattamento di ratti ovariectomizzati con BZBS ha ridotto significativamente i cambiamenti strutturali trabecolari indotti da OVX. Come mostrato nelle immagini micro-CT ricostruite della tibia destra (Figura 1A, B), l'osso trabecolare nel gruppo OVX ha mostrato una diminuzione significativa di BMD (Figura 1C), BV/TV (Figura 1D
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Dopo l'ovariectomia, i livelli di estrogeni sono diminuiti bruscamente a causa della continua riduzione dell'osso spongioso e dell'aumento del turnover osseo. In sostanza, la diminuzione della secrezione di estrogeni dopo la menopausa potrebbe causare una significativa perdita ossea18, portando a una perdita di Ca2+ nei ratti ovariectomizzati19,20. È stato riportato che l'assunzione di estrogeni.......
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Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Questo lavoro è stato sostenuto dal Progetto di Consulenza Strategica dell'Accademia Cinese di Ingegneria: Ricerca strategica sull'effetto anti-invecchiamento della Medicina Tradizionale Cinese (Sovvenzione n.: 2022-XY-45), dalla Fondazione per le scienze naturali della provincia di Hebei in Cina (sovvenzione n.: 2022106065), dal programma S&T di Hebei, Cina (sovvenzione n.: 22372502D) e dal progetto di talento per l'innovazione e l'imprenditorialità S&T di alto livello di Shijiazhuang, Hebei, Cina (Grant No.: 07202203).
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| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| 10% formalina tamponata neutra | Proteintech Group, Inc. | 23408-1AP-100 | |
| Kit ELISA 17-beta-estradiolo | Proteintech Group, Inc. | 21933-1-AP | |
| 3%H2O2 | ShanDong LIRCON Medical Technology Incorporated Company | 20221027 | |
| Anticorpo anti-osteoprotegerina | Abcam | ab203061 | |
| Capsule di Bazibushen | Shijiazhuang Yiling Pharmaceutical Co., Ltd. | ||
| Biotina capra anti-coniglio IgG | Abcam | ab207995 | |
| Kit per il dosaggio del calcio | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | C004-2-1 | |
| Diaminobenzidina | ZSGB-BIO | ZLI-9018 | |
| Compresse di estradiolo valerato | Bayer AG | 156A | |
| Gene 1580R centrifuga | GENE Co. Ltd. | ||
| Image-Pro Plus | Media Cybernetics | IPP 6.0 | |
| Leica DM6000B Microscope (sistema di microscopio verticale completamente automatizzato) | Leica | 361715 | |
| Normal Goat Serum Blocking Solution | Vector Laboratories | S-1000-20 | |
| Kit per il dosaggio del fosfato | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | C006-1-1 | |
| Soluzione salina tamponata con fosfato | Servicebio, Wuhan, Cina | CR10201M | |
| Sistema di imaging microCT Quantum GX2 | PerkinElmer | CLS149276 | |
| RANKL Anticorpo policlonale di coniglio | Elabscience Biotechnology Co. Ltd. | E-EL-R3032-96T | |
| Kit ELISA SOST per ratto (sclerostina) | Elabscience Biotechnology Co., Ltd. | E-EL-R1405c-96T | |
| Rat TRACP-5b (fosfatasi acida resistente al tartrato 5b) kit ELISA | Abcam | ab108667 | |
| Rat β-CTx (Beta Crosslaps) kit ELISA | Elabscience Biotechnology Co., Ltd. | E-EL-R0939c-96T | |
| Anticorpo policlonale di coniglio sclerostina | Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd. | SCXK(JING)2016-0006 | |
| Scanner per vetrini | Hamamatsu Photonics K.K. | Nano Zoomer-SQ | |
| Sprague Dawley ratti femmina | Pechino Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd. | ZLI-9381 |
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