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Articolo metodologico

Effetto estrogeno-simile della capsula di Bazi Bushen nei ratti ovariectomizzati

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DOI:

10.3791/64884

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7 aprile 2023

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In questo articolo

Sommario

Qui viene presentato un protocollo per dimostrare che la capsula di Bazi Bushen (BZBS) può regolare la via di segnalazione RANKL/OPG nel modello di roditore ovariectomizzato attraverso il suo effetto estrogeno-simile.

Abstract

Questo studio mira a mostrare l'effetto estrogeno-simile della capsula di Bazi Bushen (BZBS), un composto erboristico cinese, nei topi ovariectomizzati. Le femmine di ratto Sprague-Dawley (SD) sono state divise casualmente in sei gruppi: un gruppo operato da sham, un gruppo modello (OVX), un gruppo progynova e gruppi BZBS (1, 2 e 4 d/kg/d). Un'ovariectomia è stata eseguita su tutti i ratti ad eccezione di quelli del gruppo operato con sham. La tomografia micro-computerizzata (micro-CT), la colorazione con ematossilina ed eosina (H&E), l'immunoistochimica e il test di immunoassorbimento enzimatico (ELISA) sono stati eseguiti dopo 4 mesi di trattamento con BZBS. Di conseguenza, rispetto al gruppo OVX, i ratti trattati con BZBS hanno mostrato un aumento del numero e dell'area delle cellule trabecolari dell'osso e del midollo osseo e una diminuzione del numero di cellule adipose. Il volume osseo, il numero trabecolare e lo spessore trabecolare della tibia destra nei gruppi di farmaci sono aumentati e lo spazio trabecolare è diminuito. I livelli sierici di 17β-estradiolo e calcio nei gruppi farmacologici erano elevati, ma i livelli sierici di fosforo, sclerostina, β-CTX e TRACP-5b erano diminuiti. Nei gruppi farmacologici, i livelli di RANKL e sclerostina sono diminuiti, mentre il livello di osteoprotegerina (OPG) è aumentato. In conclusione, questo protocollo ha valutato sistematicamente gli effetti terapeutici e i potenziali meccanismi molecolari dei composti erboristici cinesi nei ratti ovariectomizzati con una varietà di tecniche.

Introduzione

L'osteoporosi postmenopausale (PMOP) è una malattia del sistema scheletrico causata da una funzione ovarica inadeguata, da una diminuzione degli estrogeni e da una maggiore attività degli osteoclasti1, caratterizzata da bassa massa ossea, degenerazione microarchitettonica del tessuto osseo e danno della trabecola ossea. La PMOP è incline a causare fratture e può avere gravi effetti sulla qualità della vita dei pazienti. L'osteoporosi colpisce circa 200 milioni di persone in tutto il mondo2; circa il 40% delle donne in postmenopausa soffre di osteoporosi3 e le frat....

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Protocollo

Gli esperimenti sugli animali sono stati approvati dal Comitato per la Ricerca e l'Etica Animale dell'Istituto di Ricerca Medica Hebei Yiling (numero di approvazione: N2020150). Le 36 femmine di ratto Sprague-Dawley (SD) (3 mesi, del peso di 180-200 g) (vedi Tabella dei materiali) sono state alimentate con cibo normale e acqua pulita nel nuovo centro di valutazione dei farmaci dell'Hebei Yiling Medical Research Institute e sono state esposte alla luce artificiale per 12 ore al giorno in ambienti con temperature controllate (20-26 °C) e umidità relativa (40%-70%).

1. Esperimento sugli ....

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Risultati

La microstruttura ossea della tibia è stata valutata mediante micro-TC
Il trattamento di ratti ovariectomizzati con BZBS ha ridotto significativamente i cambiamenti strutturali trabecolari indotti da OVX. Come mostrato nelle immagini micro-CT ricostruite della tibia destra (Figura 1A, B), l'osso trabecolare nel gruppo OVX ha mostrato una diminuzione significativa di BMD (Figura 1C), BV/TV (Figura 1D

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Discussione

Dopo l'ovariectomia, i livelli di estrogeni sono diminuiti bruscamente a causa della continua riduzione dell'osso spongioso e dell'aumento del turnover osseo. In sostanza, la diminuzione della secrezione di estrogeni dopo la menopausa potrebbe causare una significativa perdita ossea18, portando a una perdita di Ca2+ nei ratti ovariectomizzati19,20. È stato riportato che l'assunzione di estrogeni.......

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Dichiarazioni

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Ringraziamenti

Questo lavoro è stato sostenuto dal Progetto di Consulenza Strategica dell'Accademia Cinese di Ingegneria: Ricerca strategica sull'effetto anti-invecchiamento della Medicina Tradizionale Cinese (Sovvenzione n.: 2022-XY-45), dalla Fondazione per le scienze naturali della provincia di Hebei in Cina (sovvenzione n.: 2022106065), dal programma S&T di Hebei, Cina (sovvenzione n.: 22372502D) e dal progetto di talento per l'innovazione e l'imprenditorialità S&T di alto livello di Shijiazhuang, Hebei, Cina (Grant No.: 07202203).

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
10% formalina tamponata neutraProteintech Group, Inc.23408-1AP-100
Kit ELISA 17-beta-estradioloProteintech Group, Inc.21933-1-AP
3%H2O2ShanDong LIRCON Medical Technology Incorporated Company20221027
Anticorpo anti-osteoprotegerinaAbcamab203061
Capsule di BazibushenShijiazhuang Yiling Pharmaceutical Co., Ltd.
Biotina capra anti-coniglio IgGAbcamab207995
Kit per il dosaggio del calcioNanjing Jiancheng Bioengineering InstituteC004-2-1
DiaminobenzidinaZSGB-BIOZLI-9018
Compresse di estradiolo valeratoBayer AG156A
Gene 1580R centrifugaGENE Co. Ltd.
Image-Pro PlusMedia CyberneticsIPP 6.0
Leica DM6000B Microscope (sistema di microscopio verticale completamente automatizzato)Leica361715
Normal Goat Serum Blocking SolutionVector LaboratoriesS-1000-20
Kit per il dosaggio del fosfatoNanjing Jiancheng Bioengineering InstituteC006-1-1
Soluzione salina tamponata con fosfatoServicebio, Wuhan, CinaCR10201M
Sistema di imaging microCT Quantum GX2PerkinElmerCLS149276
RANKL Anticorpo policlonale di coniglioElabscience Biotechnology Co. Ltd.E-EL-R3032-96T
Kit ELISA SOST per ratto (sclerostina)Elabscience Biotechnology Co., Ltd.E-EL-R1405c-96T
Rat TRACP-5b (fosfatasi acida resistente al tartrato 5b) kit ELISAAbcamab108667
Rat β-CTx (Beta Crosslaps) kit ELISAElabscience Biotechnology Co., Ltd.E-EL-R0939c-96T
Anticorpo policlonale di coniglio sclerostinaBeijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd.SCXK(JING)2016-0006
Scanner per vetriniHamamatsu Photonics K.K.Nano Zoomer-SQ
Sprague Dawley ratti femminaPechino Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd.ZLI-9381
XB2103001GZ422515090077

Riferimenti

  1. Zhai, X., et al. Muscone ameliorates ovariectomy-induced bone loss and receptor activator of nuclear factor-κb ligand-induced osteoclastogenesis by suppressing TNF receptor-associated factor 6-mediated signaling pathways. Frontiers in Pharmacology. 11, 348(2020).
  2. Wang, S., et al.

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Ristampe e permessi

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