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Articolo metodologico

Utilizzo della nicotina in un modello murino esposto alla silice per promuovere la transizione epitelio-mesenchimale polmonare

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DOI:

10.3791/65127

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3 marzo 2023

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* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

Questo studio descrive un modello murino per studiare l'effetto sinergico della nicotina sulla progressione della fibrosi polmonare nei topi sperimentali affetti da silicosi. Il modello murino a doppia esposizione simula la progressione patologica nel polmone dopo l'esposizione simultanea a nicotina e silice. I metodi descritti sono semplici e altamente riproducibili.

Abstract

Il fumo e l'esposizione alla silice sono comuni tra i lavoratori e la silice ha maggiori probabilità di danneggiare i polmoni dei fumatori rispetto ai non fumatori. Il ruolo della nicotina, il principale ingrediente che crea dipendenza nelle sigarette, nello sviluppo della silicosi non è chiaro. Il modello murino impiegato in questo studio era semplice e facilmente controllabile, e simulava efficacemente gli effetti dell'ingestione cronica di nicotina e dell'esposizione ripetuta alla silice sulla fibrosi polmonare attraverso la transizione epiteliale-mesenchimale negli esseri umani. Inoltre, questo modello può aiutare nello studio diretto degli effetti della nicotina sulla silicosi, evitando gli effetti di altri componenti nel fumo di sigaretta.

Dopo l'adattamento ambientale, i topi sono stati iniettati per via sottocutanea con 0,25 mg/kg di soluzione di nicotina nella pelle flaccida sopra il collo ogni mattina e sera a intervalli di 12 ore per 40 giorni. Inoltre, la polvere di silice cristallina (1-5 μm) è stata sospesa in soluzione fisiologica normale, diluita in una sospensione di 20 mg/mL e dispersa uniformemente utilizzando un bagno d'acqua ad ultrasuoni. I topi anestetizzati con isoflurano hanno inalato 50 μL di questa sospensione di polvere di silice attraverso il naso e sono stati svegliati tramite massaggio toracico. L'esposizione alla silice è stata somministrata quotidianamente nei giorni 5-19.

Il modello murino a doppia esposizione è stato esposto alla nicotina e poi alla silice, che corrisponde alla storia di esposizione dei lavoratori esposti a entrambi i fattori nocivi. Inoltre, la nicotina ha promosso la fibrosi polmonare attraverso la trasformazione epiteliale-mesenchimale (EMT) nei topi. Questo modello animale può essere utilizzato per studiare gli effetti di molteplici fattori sullo sviluppo della silicosi.

Introduzione

L'esposizione alla silice nei lavoratori è inevitabile in alcuni ambienti di lavoro e, una volta esposti alla silice, il deterioramento progredisce anche dopo la rimozione dall'ambiente. Inoltre, la maggior parte di questi lavoratori fuma e le sigarette tradizionali contengono migliaia di sostanze chimiche, con il componente chiave che crea dipendenza essendo la nicotina1. Le sigarette elettroniche stanno diventando sempre più popolari nelle fasce di età più giovani2; Queste sigarette elettroniche agiscono come un sistema di somministrazione di nicotina e aumentano l'accesso alla nicotina, aumentando così la suscettibili....

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Protocollo

Tutte le procedure sono state condotte secondo le linee guida emesse dalla Guida per la cura e l'uso degli animali da laboratorio del National Institutes of Health (l'ottava edizione dell'NRC) e sono state approvate dal Comitato etico per gli animali dell'Università di Scienza e Tecnologia di Anhui.

1. Preparazione dell'animale

  1. Ospita 32 topi maschi C57/BL6 di 8 settimane in laboratorio con un ciclo luce/buio di 12 ore. Assicurati che i topi abbiano libero accesso a cibo e acqua.
  2. Dopo 2 settimane di acclimatazione all'ambiente, quando i topi di 10 settimane pesano 23-26 g, utilizzare numeri casuali gener....

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Risultati

È stato stabilito un modello murino per studiare la nicotina combinata con l'esposizione alla silice per studiare il potenziale ruolo della nicotina nella progressione della silicosi nei topi. La Figura 1 illustra la procedura sperimentale per l'utilizzo di un modello murino a doppia esposizione, che ha abbinato un'iniezione di nicotina con l'instillazione nasale di una sospensione di silice. I cambiamenti patologici dei topi in ciascun gruppo sono stati osservati utilizzando la colorazione .......

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Discussione

Un modello animale a doppia esposizione è necessario per studiare il ruolo e i potenziali meccanismi dell'esposizione concomitante alla nicotina e al biossido di silicio cristallino. Questo modello è stato realizzato in questo lavoro attraverso l'iniezione sottocutanea di nicotina e il gocciolamento nasale di silice. Per garantire il successo dell'iniezione di nicotina, l'operatore deve acquisire familiarità con la presa dei topi, poiché afferrare la pelle nella parte posteriore del collo potrebbe essere doloroso per lor.......

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Dichiarazioni

Tutti gli autori dichiarano di non avere conflitti di interesse.

Ringraziamenti

Questo studio è stato sostenuto dal programma di innovazione della sinergia universitaria della provincia di Anhui (GXXT-2021-077) e dal Fondo per l'innovazione dei laureati dell'Università di scienza e tecnologia dell'Anhui (2021CX2120).

....

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
10% fissativo neutro in formalinaNanchang Yulu Experimental Equipment Co.
disinfettante a base di alcolXintai Kanyuan Disinfection Products Co.
BSA, frazione VBeyotime BiotechnologyST023-200g
CD206 anticorpo monoclonaleProteintech60143-1-IG
citrato soluzione di recupero dell'antigenebiosharp life scienceBL619A
dimetil benzeneAsia Chemical Technology (Shandong) Co
Enhanced BCA Protein Assay KitBeyotime BiotechnologyP0009
GAPDH Anticorpo policlonaleProteintech10494-1-AP
Ematossilina ed eosina (H& E)Beyotime BiotechnologyC0105S
Substrato HRPMillipore CorporationP90720
HRP-coniugato Capra Affinipure Anti-Topo IgG(H+L)ProteintechSA00001-1
HRP-coniugato Capra Anti-coniglio IgG(H+L)ProteintechSA00001-2
ImmPACT[R] DAB EqV Perossidasi (HRP)Substrato VettoriSK-4103-100
Kit per macchie tricromatiche di MassonSolarbioG1340
MetanoloMacklin
NicotinaSigmaN-3876
soluzione salina tamponata con fosfato (PBS) BiosharpBL601A
Soluzione fisiologica Il primo ospedale del popolo della città
PMSFBeyotime BiotechnologicalST505
Microscopio a fluorescenza positivoOlympusCorporationBX53 + DP74
Peso molecolare della proteina del colore prestato  Marker, o scala delle proteine del colore prestainedBeyotime BiotechnologyP0071
Membrane PVDFMillipore3010040001
tampone di lisi RIPABeyotime BiotechnologyP0013B
Kit di preparazione del gel SDS-PAGEBeyotime BiotechnologyP0012A
Biossido di silicioSigma#BCBV6865
TGF- βBiossbs-0086R
Vimentin Anticorpo policlonaleProteintech10366-1-AP
strong>Nome del materialeAziendaNumero
Tubo da 0,5 mLBiosharpBS-05-M
Bagno termostatico oscillatorio in metalloAbson
Macchinaper l'inclusione di paraffinaPrecisione (Changzhou) Medical Equipment Co.PBM-A
Affettatrice a paraffinaJinhua Kratai Instruments Co.
PipetteEppendorf
Microscopio a luce polarizzataOlympusBX51
Bilancia di precisioneAcculabALC-110.4
RODI IOT sistema di purificazione dell'acqua multifunzionale intelligenteRSJRODI-220BN
Scilogex SK-D1807-E Agitatore 3DScilogex
Small macchina per anestesia animaleAnhui Yaokun Biotech Co., Ltd.ZL-04A
Puntali per pipette universaliKIRGENKG1011
Puntali per pipette universaliKIRGENKG1212
Puntali per pipette universaliKIRGENKG1313
Vortex  Miscelatori VWR
Nome del materiale/ Attrezzatura
Adobe Illustrator
ImageJ
Photoshop
Prism7.0
West di Huainan<di catalogo

Riferimenti

  1. Wonnacott, S. Presynaptic nicotinic ACh receptors. Trends in Neurosciences. 20 (2), 92-98 (1997).
  2. Berry, K., et al. Association of electronic cigarette use with subsequent initiation of tobacco cigarettes in US youths. JAMA Network Open.

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Ristampe e permessi

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