Finestra stabilizzata per l'imaging intravitale del pancreas murino

Jakeb Petersen; Wei Du; Christian Adkisson; Claudia Gravekamp; Maja H. Oktay; John Condeelis; Nicole C. Panarelli; John C. McAuliffe; David Entenberg

doi:10.3791/65498

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Articolo metodologico

Finestra stabilizzata per l'imaging intravitale del pancreas murino

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DOI:

10.3791/65498

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6 ottobre 2023

Jakeb Petersen^*¹^,²^,³ , Wei Du^*⁴^,⁵ , Christian Adkisson¹^,⁴ , Claudia Gravekamp⁶^,⁷ , Maja H. Oktay²^,³^,⁴^,⁷^,⁸^,⁹ , John Condeelis¹^,³^,⁴^,⁷^,⁸^,⁹^,¹⁰ , Nicole C. Panarelli²^,³^,⁷ , John C. McAuliffe¹^,²^,³^,⁷^,⁸ , David Entenberg²^,³^,⁴^,⁷^,⁸^,⁹

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In questo articolo

Sommario

Presentiamo un protocollo per l'impianto chirurgico di una finestra ottica stabilizzata a permanenza per l'imaging a risoluzione subcellulare del pancreas murino, consentendo studi seriali e longitudinali del pancreas sano e malato.

Abstract

La fisiologia e la fisiopatologia del pancreas sono complesse. Le malattie del pancreas, come la pancreatite e l'adenocarcinoma pancreatico (PDAC), hanno un'elevata morbilità e mortalità. L'imaging intravitale (IVI) è una potente tecnica che consente l'imaging ad alta risoluzione di tessuti sia in condizioni sane che malate, consentendo l'osservazione in tempo reale delle dinamiche cellulari. L'IVI del pancreas murino presenta sfide significative a causa della natura viscerale profonda e cedevole dell'organo, che lo rende altamente soggetto a danni e artefatti da movimento.

Di seguito è descritto il processo di impianto del P increasmurino (SWIP). Lo SWIP consente l'IVI del pancreas murino in stati di salute normali, durante la trasformazione dal pancreas sano a pancreatite acuta indotta da ceruleina, e in stati maligni come i tumori pancreatici. In combinazione con cellule geneticamente marcate o con la somministrazione di coloranti fluorescenti, lo SWIP consente la misurazione delle dinamiche a singola cellula e subcellulare (compresa la migrazione a singola cellula e collettiva), nonché l'imaging seriale della stessa regione di interesse per più giorni.

La capacità di catturare la migrazione delle cellule tumorali è di particolare importanza in quanto la causa primaria di mortalità correlata al cancro nel PDAC è il carico metastatico schiacciante. Comprendere le dinamiche fisiologiche delle metastasi nel PDAC è un'esigenza critica insoddisfatta e cruciale per migliorare la prognosi del paziente. Nel complesso, lo SWIP fornisce una migliore stabilità dell'imaging ed espande l'applicazione dell'IVI nelle malattie sane del pancreas e del pancreas maligno.

Introduzione

Le malattie pancreatiche benigne e maligne sono potenzialmente pericolose per la vita, con notevoli lacune nella comprensione della loro fisiopatologia. La pancreatite, l'infiammazione del pancreas, è la terza causa principale di ricoveri ospedalieri e riammissioni correlati a malattie gastrointestinali negli Stati Uniti ed è associata a morbilità, mortalità e onere socioeconomico^sostanziali. Classificato come la terza causa di morte correlata al cancro 2, l'adenocarcinoma duttale pancreatico (PDAC) rappresenta la maggior parte delle neoplasie pancreatiche³ e fa presagire uno scarso tasso di sopravvivenza a 5 anni di sol....