Method Article

Procedura operativa e precauzioni della terapia di agopuntura con inserimento di fili nell'Alzheimer

DOI:

10.3791/65895

⸱

May 10th, 2024

 ,  ,  ,  ,  , 
1College of Acupuncture and Orthopedics, Hubei University of Chinese Medicine, 2Hubei Shizhen Laboratory, 3Hubei International Science and Technology Cooperation Base of Preventive Treatment by Acupuncture and Moxibustion, 4Hubei Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Questo studio presenta un protocollo per la terapia di agopuntura con inserimento di fili nei ratti simili al morbo di Alzheimer.

Abstract

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La terapia di inclusione del filo (TEAT) è un trattamento che previene e gestisce le malattie inserendo una sutura biodegradabile in un punto di agopuntura, fornendo una stimolazione di lunga durata. TEAT è un approccio semplice che evita il disagio dell'agopuntura regolare e fornisce effetti terapeutici duraturi. Questo articolo discute il potenziale impatto di TEAT sulle capacità di apprendimento e memoria dei ratti con sintomi simili al morbo di Alzheimer. Poiché la degenerazione neuronale indotta chimicamente e i disturbi cognitivi nei ratti non riflettono interamente i veri cambiamenti patologici osservati nella malattia di Alzheimer. Di conseguenza, il nostro gruppo di ricerca ha designato queste manifestazioni come sintomi simili al morbo di Alzheimer. È stato stabilito un protocollo per delineare la selezione dei punti di agopuntura, il processo operativo e le precauzioni necessarie per la testa e la parte bassa della schiena. L'esperimento è stato condotto su tre gruppi: un gruppo di controllo, un gruppo modello e un gruppo TEAT, ciascuno contenente 6 ratti. Per indurre sintomi simili all'Alzheimer, ai ratti è stato iniettato intraperitonealmente D-galattosio per 7 settimane (49 giorni). I ratti del gruppo TEAT hanno ricevuto un trattamento di inclusione del catgut con agopuntura. Dopo il periodo di intervento, è stato condotto un labirinto d'acqua Morris (MWM) per valutare l'apprendimento e la memoria dei ratti. Successivamente, i ratti sono stati sacrificati e il loro tessuto cerebrale è stato esaminato. È stato eseguito un esame istologico per comprendere gli effetti del TEAT sulla patologia dei ratti che presentano sintomi di malattia di Alzheimer. Questo studio suggerisce che TEAT può migliorare l'apprendimento e la memoria nei ratti con sintomi simili al morbo di Alzheimer, indicando un nuovo approccio terapeutico potenzialmente promettente per questa condizione neurodegenerativa.

Introduction

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L'agopuntura con innesco di filo (TEA) prevede l'inserimento di catgut o suture riassorbibili nei punti di agopuntura utilizzando un ago speciale. Questa tecnica ha un effetto prolungato fino a quando le suture non vengono assorbite e degradate. Fornisce una stimolazione continua e prolungata ai punti di agopuntura per una settimana o più1, ottenendo un risultato comparabile senza la necessità di procedure ripetitive quotidiane2. In questo modo si riduce il numero di pazienti che si rivolgono alle cure mediche, risparmiando così in una certa misura le risorse mediche. Negli ultimi anni, TEAT è stato sempre più utilizzato in vari campi medici in Cina, tra cui medicina interna, medicina esterna, dermatologia, tratti del viso, ginecologia e pediatria3. Gli studi hanno dimostrato che è efficace nel produrre effetti affidabili e a lungo termine per alcune malattie croniche e complesse, come l'epilessia4 e la paralisi del nervo facciale5. Presenta i vantaggi di un trauma minimo e di un funzionamento semplice6. Inoltre, è stato riportato che i costi del trattamento di TEAT sono inferiori a quelli dell'elettroagopuntura (EA)7. Pertanto, TEAT è sempre più apprezzato nella ricerca clinica e scientifica.

La malattia di Alzheimer (AD) è una condizione neurodegenerativa che progredisce nel tempo. Il suo processo fisiopatologico inizia ad accumularsi circa 20 anni prima della comparsa dei sintomi clinici, ma il suo meccanismo non è ancora completamente compreso8. Data la limitata disponibilità di farmaci efficaci per l'AD, la ricerca si sta concentrando sempre più sugli stadi prodromici e preclinici della malattia9. La prevenzione è una strategia cruciale per affrontare lo sviluppo e la progressione di AD 9,10. Negli ultimi anni, la medicina tradizionale cinese (MTC) ha fatto progressi significativi e si prevede che offrirà nuove possibilità per la prevenzione e il trattamento dell'AD11,12. Come sottotipo di agopuntura, la TEAT è preferita ad altre terapie grazie alla sua ampia gamma di trattamenti, al trauma minimo, al funzionamento semplice, alla bassa frequenza di trattamento e all'efficacia di lunga durata6. La letteratura emergente suggerisce che la TEAT può giovare alle persone con obesità13,14, diabete15, insonnia16, osteoporosi postmenopausale17 e depressione18, tutti fattori di rischio per l'AD. Migliora anche la senescenza nei ratti anziani regolando la mitofagia2, migliora l'apprendimento spaziale e la compromissione della memoria, allevia il danno patologico dell'ippocampo e inibisce la risposta infiammatoria nei ratti con demenza vascolare (VD)19. Sembrava interessante capire se TEAT potesse agire anche sui processi patologici durante l'AD.

La ricerca attuale manca di uniformità e standardizzazione in diversi elementi critici del funzionamento TEAT, tra cui il metodo di incorporamento, lo strumento di incorporamento, la filettatura e il periodo di intervallo di incorporamento. Questa mancanza di standardizzazione influisce sulla valutazione dell'effetto della terapia e sull'esplorazione dei meccanismi correlati e limita la promozione e la comunicazione esterna. Ricerche precedentihanno dimostrato che la somministrazione intraperitoneale di D-galattosio (D-gal) può indurre cambiamenti patologici simili alla malattia di Alzheimer nei ratti, tra cui la degenerazione neuronale e i disturbi cognitivi. Inoltre, è stato dimostrato che l'elettroagopuntura a Baihui (GV20) e Shenshu (BL23) migliora efficacemente il declino cognitivo, mitiga la neuroinfiammazione e riduce il danno neuronale. Questo studio prende come esempio i ratti modello simili alla malattia di Alzheimer per introdurre la selezione dei punti di agopuntura e il processo operativo e le precauzioni del TEAT in questo modello. Discute gli elementi operativi critici di TEAT nella ricerca sperimentale per fornire un riferimento per studi futuri.

Protocol

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Tutti gli esperimenti sono stati condotti seguendo la Guida del National Institutes of Health per la cura e l'uso degli animali da laboratorio e sono stati approvati dal Comitato per la gestione e l'uso degli animali da laboratorio del Centro provinciale per il controllo e la prevenzione delle malattie di Hubei. Per il test sono stati utilizzati un totale di 18 ratti femmina di Sprague-Dawley (SD) di 3 mesi del peso di 220-250 g. Tutti i ratti sono stati mantenuti con un ciclo luce/buio di 12 ore a 23 ± 1 °C e 40%-50% di umidità, con libero accesso a cibo e acqua. Dopo un periodo di acclimatazione di una settimana, durante il quale i ratti sono stati autorizzati ad abituarsi alle condizioni di laboratorio, gli esperimenti sono stati avviati.

1. Sviluppo del modello

  1. Il disegno sperimentale è mostrato nella Figura 1. Dividi casualmente 18 ratti femmina di Sprague-Dawley di 3 mesi del peso di 220-250 g nei gruppi di controllo, modello e TEAT. Ogni gruppo è composto da 6 ratti.
  2. Iniettare quotidianamente il gruppo modello e il gruppo TEAT con D-galattosio (D-gal; 120 mg/kg/die), mentre il gruppo di controllo riceve iniezioni di soluzione salina (120 mg/kg/die), per 7 settimane (49 giorni) nell'area ventrale inferiore22. L'iniezione deve essere somministrata quotidianamente tra le 8:00 e le 9:00.
  3. Pesare i ratti il 7° giorno di ogni settimana tra le 9:00 e le 10:00. L'esperimento è durato 49 giorni. Seppellisci i fili ogni 14 giorni il 14°, 28° e 42° giorno. Fissa l'ora per l'incorporamento di ogni thread tra le 9:00 e le 12:00.
  4. Continuare la somministrazione intraperitoneale di D-galattosio per 7 settimane per indurre manifestazioni patologiche correlate alla malattia di Alzheimer nei ratti22.

2. Preparazione per la tettarella

  1. Sterilizzare gli strumenti chirurgici come forbici oftalmiche, vassoi e pinzette e disinfettare. Pulire accuratamente le superfici dell'ambiente della sala operatoria e disinfettarle.
  2. Preparare la piattaforma chirurgica appoggiando un termoforo per piccoli animali sulla superficie, quindi drappeggiandolo con un asciugamano sterile. Successivamente, posizionare la scheda operatoria pulita e disinfettata in modo uniforme sulla parte superiore, con il lato ruvido rivolto verso l'alto. Quindi, accendere il termoforo e impostare la temperatura a 32 °C.
  3. Per la procedura, selezionare un ago monouso n. 6 per incorporare il filo con un diametro di 0,6 mm e una sutura chirurgica assorbibile 5-0 (sutura al collagene) con una lunghezza di 2 cm. Tagliare la sutura chirurgica assorbibile 5-0 da 2 cm in pezzi da 0,5 cm e 0,2 cm utilizzando le forbici oftalmiche. Immergere il filo tagliato in soluzione salina allo 0,9% e mettere da parte.
  4. Lavarsi le mani con acqua e sapone per 20 s, quindi asciugarle. Successivamente, indossare guanti sterili.
  5. Anestetizzare i ratti con un'iniezione IP di idrato di cloralio (300 mg/kg) nell'area ventrale inferiore, assicurandosi che l'anestesia sia confermata quando gli animali non rispondono su un piano chirurgico, in base alla mancanza di risposta da un test di pizzicamento delle dita dei piedi e mantenendo uno stato fisiologico stabile. Inoltre, per prevenire la secchezza corneale e potenziali danni mentre i ratti sono sotto anestesia, applicare una generosa quantità di unguento veterinario sugli occhi, assicurandosi che rimangano lubrificati durante la procedura.
    NOTA: Si consiglia di anestetizzare il ratto, poiché è doloroso per loro sperimentare il piercing.

3. Operazione di inglobamento del filo per Baihui (GV 20)

  1. Localizzare il punto di agopuntura Baihui (GV 20) nei ratti nel punto medio destro dell'osso parietale (Figura 2A). Posizionare i ratti in modo da esporre completamente la testa, con le orecchie tirate in avanti per approssimare il metodo utilizzato negli esseri umani per collegare le linee apicali dell'orecchio. Identificare il punto di Baihui (GV 20) palpando la cresta longitudinale centrale del cranio e individuando la posizione approssimativamente nel suo punto medio. Confermare ulteriormente questo agopunto al livello in cui le orecchie entrerebbero in contatto con la testa se stese piatte, allineandosi con l'intersezione della sutura sagittale e dell'osso parietale. Usa un pennarello per segnare Baihui (GV 20).
  2. Radere l'area della testa intorno al punto di agopuntura del ratto usando un rifinitore (di solito un regolabarba elettrico da uomo).
  3. Prima dell'intervento chirurgico, disinfettare i punti di agopuntura e la pelle circostante applicando una soluzione di iodio allo 0,5% con movimenti circolari, partendo dal centro e spostandosi verso l'esterno. Successivamente, eseguire un triplo processo di disinfezione: utilizzare lo iodoforo 3x, ciascuno seguito da un'applicazione di alcol per garantire una corretta decontaminazione e preparare il sito per la tecnica asettica.
  4. Utilizzare una pinza per bloccare la sutura chirurgica riassorbibile da 0,2 cm imbevuta di soluzione fisiologica e posizionarla nell'estremità anteriore del tubo dell'ago. Quindi, collegalo al nucleo dell'ago.
  5. Pizzica l'area intorno a Baihui (GV 20) con il pollice e l'indice di una mano, tenendo l'ago con l'altra.
  6. Inserire l'ago orizzontalmente e rapidamente con un angolo di 15° rispetto alla superficie della pelle, 0,1 cm sotto la punta di Baihui (GV 20), pizzicando la pelle (Figura 3A).
  7. Dopo che la punta dell'ago ha raggiunto 0,1 cm sopra il punto di Baihui (GV 20), spingere il nucleo dell'ago mentre si ritrae il tubo dell'ago per impiantare completamente la sutura chirurgica assorbibile da 0,2 cm nel tessuto sottocutaneo del punto di agopuntura (Figura 3B).
  8. Rimuovere lentamente l'ago, assicurandosi che nessuna sutura sia esposta. Premere il foro dell'ago con cotone sterile asciutto per 10 s per evitare sanguinamenti. Se il filo si trova all'esterno del corpo dopo aver incorporato la linea nei punti di agopuntura, estrarlo e riutilizzarlo.

4. Operazione di inglobamento del filo per Shenshu (BL 23)

  1. Il punto di agopuntura Shenshu (BL 23) nei ratti si trova a 5 mm lateralmente alla 2avertebra lombare (Figura 2B). Innanzitutto, individua la 6avertebra lombare in base al tubercolo dell'anca del ratto. Quindi localizzare la 2avertebra lombare contando verso l'alto quattro corpi vertebrali. Shenshu (BL 23) sarà 5 mm lateralmente ad esso23.
    NOTA: La combinazione dei punti di agopuntura Baihui (GV 20) e Shenshu (BL 23) è un insieme frequentemente utilizzato nella teoria della Medicina Tradizionale Cinese (MTC) per la prevenzione e il trattamento dei disturbi cerebrali. Come confermato da precedenti ricerche 20,21, questa coppia di agopunti è stata stabilita per la sua efficacia.
  2. Usa un pennarello per contrassegnare Shenshu (BL 23). Radere la parte posteriore e la zona della vita attorno al punto di agopuntura del ratto usando un rifinitore (di solito un regolabarba elettrico).
  3. Prima dell'intervento chirurgico, disinfettare i punti di agopuntura e la pelle circostante applicando una soluzione di iodio allo 0,5% con un movimento circolare, partendo dal centro e spostandosi verso l'esterno. Successivamente, eseguire un triplo processo di disinfezione: utilizzare lo iodoforo tre volte, ciascuna seguita da un'applicazione di alcol per garantire una corretta decontaminazione e preparazione del sito per la tecnica asettica.
  4. Utilizzare una pinza per bloccare la sutura chirurgica riassorbibile da 0,5 cm imbevuta di soluzione fisiologica e posizionarla nell'estremità anteriore del tubo dell'ago. Quindi, collegalo al nucleo dell'ago.
  5. Tendere la pelle con l'indice e il medio della mano che preme o il pollice e l'indice. Tenere l'ago con la mano che perfora.
  6. Inserire rapidamente l'ago perpendicolarmente nel punto 0,25 cm sotto lo Shenshu (BL 23). Vedere la Figura 4A.
  7. Dopo che la punta dell'ago ha raggiunto 0,5 cm sotto la pelle, regolare la punta dell'ago, rendendo centripeta la direzione di inserimento, formando un angolo di 45° con la superficie della pelle e inserire obliquamente 0,5 cm (Figura 4B).
    NOTA: È importante prestare attenzione quando si punge lo Shenshu (BL 23), che si trova vicino al rene. L'inserimento profondo o il sollevamento e la spinta ripetuti dell'ago possono causare danni. Pertanto, si consiglia una profondità di inserimento di circa 0,3-0,6 cm.
  8. Spingere il nucleo dell'ago mentre si retrae il tubo e impiantare completamente la sutura chirurgica assorbibile da 0,5 cm nel tessuto muscolare del punto di agopunto (Figura 4C).
  9. Estrarre lentamente l'ago, assicurandosi che nessuna sutura sia esposta. Quindi, premere il foro dell'ago con cotone sterile asciutto per 10 s per evitare sanguinamenti. Se il filo si trova all'esterno del corpo dopo aver incorporato la linea nei punti di agopuntura, estrarlo e riutilizzarlo.

5. Assistenza post-operatoria

  1. Dopo l'intervento, posizionare il ratto su un termoforo per piccoli animali impostato a una temperatura di 32°C per facilitare il recupero dall'anestesia. Assicurarsi che l'animale sia completamente cosciente e che le sue condizioni siano soddisfacenti prima di rimetterlo nel suo recinto.
  2. Dopo l'intervento chirurgico, osservare segni di risposte infiammatorie sterili nell'area interessata entro una settimana. Questi segni possono includere arrossamento, gonfiore o secrezione simile al pus. In genere, questi sintomi non richiedono alcun trattamento. Tuttavia, se c'è una quantità eccessiva di essudato, drenare e disinfettare l'area interessata. In questi casi, applicare l'unguento all'eritromicina fino a quando la ferita non si riprende completamente.

6. Test comportamentali ed esame istologico

  1. Dopo l'intervento, alla settimana 8, eseguire l'esperimento Morris Water Maze (MWM) 2,24 per valutare le loro capacità di apprendimento e memoria. Esegui le prove di apprendimento nell'arco di 5 giorni, con quattro prove al giorno. Quindi somministrare una prova della sonda dopo 24 ore dall'ultimo giorno di acquisizione.
  2. Esegui confronti statistici utilizzando un software di analisi statistica. Analizzare i dati comportamentali della capacità di apprendimento mediante l'analisi della varianza a una via (ANOVA) e il test di Tukey post-hoc. Valutare la significatività dei dati sulla latenza di fuga mediante l'analisi della varianza a misure ripetute a due vie (ANOVA) seguita dal test di Bonferroni post-hoc. Un valore di p <0,05 è considerato significativo in tutti i test.
  3. Dopo la valutazione comportamentale, anestetizzare i ratti come sopra e sopprimere con iniezioni intraperitoneali di 150 mg/kg di peso corporeo di pentobarbital sodico.
  4. Fissare il cervello del ratto attraverso la perfusione utilizzando il 4% di paraformaldeide perfusa attraverso il sistema vascolare25.
    1. Inserimento e fissazione dell'ago della sonda
      1. Prepara un ago da 12G e assicurati che sia dritto e adatto a passare attraverso il ventricolo del ratto. Individua il ventricolo del ratto, che in genere è il ventricolo sinistro, e inserisci l'ago attraverso di esso nell'aorta ascendente. Questo passaggio richiede precisione e una buona comprensione dell'anatomia del ratto.
      2. Una volta che l'ago è in posizione, utilizzare un emostatico per bloccare l'ago del gavage vicino al punto in cui entra nell'aorta. Questo aiuterà a fissare l'ago e ad evitare che si muova.
      3. Assicurarsi che il morsetto sia sufficientemente stretto da tenere saldamente l'ago, ma non così stretto da danneggiare l'aorta o ostacolare il flusso sanguigno. L'ago della sonda gastrica deve rimanere nell'aorta ascendente durante tutta la procedura per mantenere una corretta perfusione.
    2. Perfusione con soluzione fisiologica normale
      1. Preparare una siringa da 50cc senza ago per la perfusione. Collegare l'altra estremità dell'ago della navetta, che si trova all'esterno del corpo del ratto, alla siringa riempita con soluzione fisiologica.
      2. Fai una piccola incisione per tagliare l'appendice atriale destra per consentire al sangue di defluire dal cuore. Questo passaggio assicura che il sangue venga spostato dalla soluzione salina durante la perfusione.
      3. Iniziare a iniettare la soluzione fisiologica normale nell'aorta ascendente a una velocità costante e costante. Questo eliminerà il sangue e preparerà i tessuti per la fissazione.
      4. Monitorare il liquido che fuoriesce dall'appendice atriale destra e prepararsi a cambiare la siringa secondo necessità per mantenere una perfusione continua con soluzione fisiologica fresca.
        Posizionato, preparare a perfondere con il fissativo.
      5. Sostituire la siringa contenente soluzione fisiologica con una contenente il 4% di paraformaldeide, un fissativo comunemente usato in istologia. Procedere con la perfusione utilizzando la paraformaldeide per fissare i tessuti in posizione per il successivo trattamento e analisi.
        NOTA: Durante questa procedura, è fondamentale mantenere tecniche asettiche per prevenire l'infezione e maneggiare delicatamente il ratto per ridurre al minimo le lesioni. Inoltre, tutto il personale coinvolto deve essere formato sulla tecnica per garantire coerenza ed efficacia.
  5. Rimuovere il cervello di ratto e metterlo in un flacone contenente il 4% di paraformaldeide per 24-48 ore a 4 °C25,26. Eseguire la disidratazione con etanolo e il trattamento con xilene passo dopo passo, seguiti da sezioni coronali continue convenzionali (4-5 μm) per la misurazione. Valutare la morfologia e la perdita di neuroni ippocampali in ciascun gruppo utilizzando la colorazione con ematossilina ed eosina (H&E) (200x).
    NOTA: Un esame necroscopico per valutare la presenza di lesioni gastrointestinali (GI) non è stato condotto sui roditori sulla base dell'assenza di segni clinici indicativi di disturbi gastrointestinali durante il periodo sperimentale. Gli animali non hanno mostrato reazioni avverse evidenti che suggeriscano la presenza di tali patologie.

Results

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Questo articolo introduce il metodo operativo specifico del TEAT nei ratti simili al morbo di Alzheimer. Discute gli elementi operativi critici di TEAT nella ricerca sperimentale per fornire un riferimento per studi futuri.

TEAT migliora l'apprendimento nei ratti simili al morbo di Alzheimer
Come illustrato nel diagramma di flusso (Figura 5), durante il periodo di allenamento adattivo, è stato osservato che i ratti di ciascun gruppo osservavano l'ambiente circostante mentre nuotavano. L'analisi della velocità di nuoto (Figura 6) non ha mostrato differenze significative tra i gruppi, indicando livelli basali coerenti di velocità di movimento e percezione visiva. Eventuali differenze osservate nei risultati sperimentali non erano dovute a variazioni nella capacità di movimento o nella percezione visiva.

I ratti sono stati sottoposti a 5 giorni di addestramento alla ricerca su piattaforma. Nella Figura 7A, si può osservare che le traiettorie di movimento di ciascun gruppo di ratti differivano nelle fasi iniziali e finali dell'addestramento. Il giorno 2, la maggior parte dei gruppi di ratti in fuga ha nuotato in modo casuale. Tuttavia, il giorno 5, i ratti del gruppo di controllo hanno nuotato con la direzione, mentre i ratti del gruppo modello hanno nuotato in modo casuale lungo la parete della piscina. Il movimento dei ratti del gruppo TEAT è diventato più denso nel quadrante bersaglio. L'esperimento ha misurato la latenza di fuga, con una latenza più breve che indica abilità più forti. La Figura 7B mostra che il gruppo modello ha mostrato capacità di apprendimento e memoria ridotte rispetto al gruppo di controllo. Tuttavia, il gruppo TEAT ha mostrato un miglioramento significativo della compromissione della memoria di riferimento spaziale nei ratti con patologia simile all'AD.

TEAT migliora la memoria spaziale nei ratti simili al morbo di Alzheimer
Nella prova della sonda, la posizione in cui l'animale trascorre il tempo indica una distorsione spaziale27. I ratti utilizzano quattro metodi principali per cercare le piattaforme: basato sui bordi, basato su casuale, basato sulle tendenze e basato su base lineare28. I risultati indicano che ogni gruppo di ratti ha impiegato diverse strategie di ricerca (Figura 8A). Il gruppo di controllo ha utilizzato principalmente strategie di ricerca lineari e direzionali, suggerendo una forte memoria e capacità di ricordare la posizione della piattaforma. Al contrario, i ratti del gruppo modello hanno mostrato una strategia di ricerca principale simile a quella del bordo, indicando un declino significativo della loro capacità di memoria. Non hanno imparato a trovare la piattaforma o a ricordare la sua posizione. I ratti del gruppo TEAT hanno mostrato una strategia di ricerca basata sulle tendenze. La densità di traiettoria era più alta nel quadrante in cui si trovava la piattaforma originale, così come nei quadranti adiacenti. Ciò indica un miglioramento della memoria rispetto al gruppo di modelli.

La Figura 8B e la Figura 8C mostrano i risultati della durata della permanenza nel quadrante della piattaforma originale e il numero di volte in cui i ratti hanno attraversato la piattaforma. I ratti del gruppo modello hanno mostrato una riduzione significativa del loro tempo di permanenza nel quadrante originale della piattaforma e del numero di volte in cui hanno attraversato la piattaforma rispetto al gruppo di controllo (p <0,01). Rispetto al gruppo modello, i ratti del gruppo TEAT hanno mostrato un aumento significativo del loro tempo di permanenza nel quadrante della piattaforma originale e del numero di volte in cui hanno attraversato la piattaforma (p <0,01). Questi risultati suggeriscono che TEAT può migliorare l'apprendimento spaziale e la compromissione della memoria nei ratti con patologia simile all'AD.

TEAT migliora l'invecchiamento dell'ippocampo nei ratti (Figura 9). Rispetto al gruppo di controllo, i ratti del gruppo modello hanno mostrato gravi cambiamenti patologici, tra cui una significativa riduzione del numero di cellule piramidali e la loro disposizione irregolare. Inoltre, sono state osservate condensazione nucleare, degenerazione neuronale e altre anomalie. Tuttavia, dopo il trattamento con TEAT, il numero di cellule piramidali dell'ippocampo nei ratti è aumentato ed era più organizzato. Sebbene alcuni nuclei mostrassero condensazione, la morfologia cellulare complessiva appariva più normale. Le cellule erano distribuite e ordinate in modo più denso, la colorazione citoplasmatica era più coerente e l'edema che circondava le cellule era significativamente ridotto. In particolare, sono state osservate cellule piramidali normali.

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Figura 1: Diagramma di flusso dell'esperimento. Dopo 1 settimana di adattamento (settimana 0), lo studio ha assegnato 18 ratti in tre gruppi: Controllo, Modello e TEAT. Durante le settimane da 1 a 7, il gruppo di controllo ha ricevuto iniezioni di soluzione salina, mentre ai gruppi modello e TEAT è stato somministrato D-galattosio. Il gruppo TEAT è stato inoltre sottoposto a terapia di agopuntura con inserimento di fili nelle settimane 2, 4 e 6. Tutti i ratti sono stati sottoposti al test del labirinto d'acqua di Morris nella settimana 8, seguito dall'eutanasia. Abbreviazioni: Adapt = adattamento, Con = gruppo di controllo, Mod = gruppo modello, TEAT = gruppo di terapia di agopuntura con inserimento di fili, D-gal = D-galattosio, MWM = il test del labirinto d'acqua di Morris. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

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Figura 2: La posizione del punto di agopuntura. (A) Il punto di agopuntura Baihui (GV 20) nei ratti. Si trova nel punto medio destro dell'osso parietale. (B) Il punto di agopuntura Shenshu (BL 23) nei ratti. Si trova a 5 mm lateralmente alla seconda vertebra lombare. Abbreviazioni: GV = Vaso Governatore, un concetto della Medicina Tradizionale Cinese (MTC) che si riferisce al meridiano principale che corre lungo la linea mediana dell'aspetto posteriore del corpo, BL = Vescica, sta per il Meridiano della Vescica, che nella MTC corrisponde al meridiano del Piede-Taiyang, uno dei sei meridiani yang, che corre lungo la parte posteriore del corpo e le gambe. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

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Figura 3: Operazione dettagliata di incanalamento della filettatura di Baihui (GV 20). (A) L'ago viene inserito orizzontalmente con un angolo di 15° rispetto alla superficie della pelle, 0,1 cm sotto il punto di agopuntura Baihui (GV 20), con la pelle pizzicata per facilitare la procedura. (B) Una volta che la punta dell'ago raggiunge una posizione di 0,1 cm sopra l'agopunto di Baihui (GV 20), il nucleo dell'ago viene spinto mentre si retrae il tubo dell'ago per impiantare completamente la sutura chirurgica assorbibile di 0,2 cm nel tessuto sottocutaneo in corrispondenza dell'agopunto. Abbreviazioni: GV = Vaso Governatore, un concetto della Medicina Tradizionale Cinese (MTC) che si riferisce al meridiano principale che corre lungo la linea mediana dell'aspetto posteriore del corpo. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

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Figura 4: Operazione dettagliata di inserimento dei fili di Shenshu (BL 23). (A) L'ago viene inserito rapidamente perpendicolarmente nel punto di agopuntura fino a una profondità di 0,25 cm sotto lo Shenshu (BL 23). (B) Una volta che la punta dell'ago ha raggiunto una profondità di 0,5 cm sotto la superficie della pelle, l'ago viene reindirizzato verso il centro del punto di agopuntura, creando un angolo di 45° con la pelle, e quindi inserito obliquamente a una profondità di 0,5 cm. (C) Mentre l'asta dell'ago viene avanzata, il tubo viene retratto, garantendo il completo impianto di un segmento di 0,5 cm di sutura chirurgica riassorbibile nel tessuto muscolare allo Shenshu (BL 23) agopunto. Abbreviazioni: BL = Vescica, sta per il Meridiano della Vescica, che in MTC corrisponde al meridiano del Piede-Taiyang, uno dei sei meridiani yang, che corre lungo la parte posteriore del corpo e delle gambe. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

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Figura 5: Il diagramma di flusso del test WMW. L'allenamento di adattamento prima dell'esperimento è indicato come Giorno 0, durante il quale vengono osservate le capacità motorie dei ratti e viene analizzata statisticamente la velocità di nuoto. Segue una fase di navigazione del luogo della durata di cinque giorni (giorni da 1 a 5), in cui la latenza di fuga (latenza di fuga) viene confrontata e analizzata tra i diversi gruppi. Il giorno 6, viene condotta una prova con sonda spaziale per valutare il tempo trascorso nel quadrante target (tempo di permanenza del quadrante target) e il numero di attraversamenti della piattaforma. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

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Figura 6: Confronto della velocità di nuoto (m/s) tra i gruppi. Questa cifra delinea le velocità medie di nuoto (in metri al secondo) dei ratti in vari gruppi sperimentali, ciascuno comprendente sei animali (n = 6). Le barre di errore mostrano la deviazione standard. Non sono state ottenute differenze tra i gruppi, come indicato da ns (p > 0,05). L'analisi statistica è stata eseguita utilizzando il software SPSS, con tutti i dati che aderiscono a una distribuzione normale. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

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Figura 7: I risultati della navigazione dei luoghi di WMW. (A) Questo pannello presenta i diagrammi rappresentativi della traiettoria del movimento, che illustrano i percorsi di navigazione dei ratti all'interno di ciascun gruppo sperimentale durante le prove di navigazione sul posto. (B) La latenza di fuga, misurata in secondi (s), viene confrontata tra i gruppi, con ciascun gruppo composto da sei ratti (n = 6). L'analisi statistica è stata eseguita utilizzando l'ANOVA a misure ripetute a due vie per valutare gli effetti all'interno dei soggetti nel corso delle prove di navigazione e le differenze tra i soggetti tra i gruppi. I dati sono conformi alle normali ipotesi di distribuzione e sono rappresentati come la media del gruppo ± la deviazione standard. Differenze significative sono indicate da asterischi (*p < 0,05, **p < 0,01) rispetto al gruppo di controllo e da hashtag (#p < 0,05, ##p < 0,01) rispetto al gruppo modello. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

figure-results-8
Figura 8: I risultati del percorso della sonda WMW. (A) Il pannello mostra diagrammi rappresentativi della traiettoria del movimento che catturano i comportamenti di esplorazione spaziale dei ratti nella prova della sonda all'interno di ciascun gruppo sperimentale. (B) Questo grafico confronta il tempo di permanenza (in secondi, s) all'interno del quadrante target tra i gruppi, riflettendo la conservazione della memoria dei ratti della posizione della piattaforma. (C) Il grafico illustra la frequenza (frequenza) con cui i ratti hanno attraversato l'area della piattaforma, indicando le loro prestazioni di memoria spaziale. Ogni gruppo comprendeva sei ratti (n = 6) e i dati sono stati analizzati statisticamente utilizzando l'ANOVA unidirezionale per valutare le differenze tra i gruppi. I dati aderiscono a una distribuzione normale e sono presentati come media ± deviazione standard. Le differenze significative sono indicate da asterischi (**p < 0,01) rispetto al gruppo di controllo e da hashtag (#p < 0,05, ##p < 0,01) rispetto al gruppo modello. **P < 0,01 rispetto al gruppo di controllo, #P < 0,05 rispetto al gruppo di modelli, ##P < 0,01 rispetto al gruppo di modelli. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

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Figura 9: Valutazione della colorazione con ematossilina ed eosina della regione CA1 dell'ippocampo in gruppi di ratti con ingrandimento di 200x. (A) Il gruppo di controllo presenta una tipica struttura neuronale con cellule piramidali ben conservate. (B) Il gruppo modello mostra alterazioni patologiche pronunciate, caratterizzate da una marcata diminuzione della densità delle cellule piramidali, neuroni degenerati colorati di scuro e disposizione disordinata. (C) Il gruppo TEAT dimostra una migliore architettura ippocampale, con un numero maggiore di cellule piramidali che sono più ordinate e possiedono una morfologia più normativa. Nonostante l'occasionale condensazione nucleare, le cellule sono più densamente impacchettate, mostrano una colorazione citoplasmatica uniforme e mostrano una significativa riduzione dell'edema pericellulare. Si osserva in particolare la presenza di cellule piramidali normative. Barra di scala = 50 μm. Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

Discussion

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Tempo di intervento
L'eziologia dell'AD è complessa e la sua patogenesi rimane incerta. Attualmente, non esiste un trattamento efficace per la malattia e il suo decorso è irreversibile. Pertanto, la comunità accademica ha raggiunto un consenso sull'importanza di concentrarsi sulla prevenzione e il trattamento dell'AD. Le strategie di prevenzione e trattamento per l'AD enfatizzano l'intervento precoce, seguendo il concetto di MTC di trattare le condizioni prima che si verifichino, enfatizzando il trattamento prima della sua insorgenza, trasmissione e recidiva. La ricerca accumulata nell'uomo29,30 e nei roditori31,32 ha dimostrato che l'agopuntura precoce e l'intervento di moxibustione possono ottenere risultati significativi senza effetti collaterali apparenti, rendendolo un metodo potenziale promettente per la prevenzione e il trattamento dell'AD. Pertanto, questo studio ha somministrato il trattamento durante il processo di modellazione. TEAT è stato implementato all'inizio dell'iniezione intraperitoneale di D-gal.

Selezione dei punti di agopuntura
L'AD è una grave malattia neurodegenerativa che colpisce principalmente le regioni del cervello responsabili della memoria, del linguaggio, del ragionamento e del comportamento sociale. Il cervello (Nao) è considerato il mare del midollo (Sui) nella MTC. Il midollo (Sui) è costituito da essenza (Jing), una sostanza unica nella MTC che si ritiene sia la forza, la vitalità e la resistenza costituzionali essenziali del corpo. L'essenza (Jing) è immagazzinata principalmente nei reni (Shen). Se l'essenza dei reni (Shen Jing) è debole, il cervello (Nao) può mancare di nutrimento e può verificarsi un deterioramento cognitivo. Pertanto, la MTC suggerisce che tonificare i reni e beneficiare l'essenza (Jing) può aiutare a migliorare la funzione cerebrale. Il cervello può essere direttamente influenzato da alcuni meridiani, come il vaso regolatore (GV) e il meridiano della vescica del piede Taiyang (BL), quando entrano nel cervello. La combinazione del vaso Governatore (GV) e del meridiano vescicale del piede Taiyang (BL) utilizzato per la prevenzione e il trattamento dell'AD è molto utilizzata33,34. Baihui (GV 20) è un punto di agopuntura situato al vertice della testa e fa parte del vaso Governatore. Secondo la letteratura, negli studi che utilizzano l'agopuntura e la moxibustione per la prevenzione e il trattamento dell'AD, il Baihui (GV 20) ha la più alta frequenza di occorrenza ed è considerato un punto critico nella formula35. Lo Shenshu (BL 23) è un punto di agopuntura sul meridiano vescicale del piede Taiyang. Si trova a 1,5 cun lateralmente al bordo inferiore del processo spinoso della seconda vertebra lombare. Come punto Shu di trasporto della schiena del rene, può rafforzare tutti gli aspetti dei reni, tra cui lo yin dei reni, lo yang, l'essenza (Jing) e il qi. L'agopuntura e la moxibustione a Baihui (GV 20) e Shenshu (BL 23) possono migliorare la funzione cognitiva e alleviare i sintomi dell'AD in vari modi36,37.

Intervallo di tempo
Gli standard operativi di TEAT38 impongono che l'intervallo di trattamento e il corso del trattamento debbano essere determinati in base alle condizioni della malattia e al sito operatorio selezionato, con un intervallo da 1 settimana a 1 mese. Il corso del trattamento può variare da 1 a 5 volte. Questo suggerimento può essere seguito anche nella ricerca sperimentale sugli animali. Sulla base della letteratura esaminata39, il trattamento viene generalmente somministrato una volta alla settimana o ogni 2 settimane, con la maggior parte dei casi che coinvolgono 4-8 trattamenti consecutivi. L'esperimento è durato 49 giorni, durante i quali i fili sono stati sepolti il 14°, 28° e 42° giorno.

Strumento e metodi
Vari strumenti per l'inclusione del filo vengono utilizzati nell'attuale ricerca sperimentale sugli animali. Questi includono gli aghi monouso n. 740 o n. 941, gli aghi auto-reinventati e l'ago per puntura lombare n. 1242. Gli aghi auto-reinventati utilizzano n. 5-7 siringhe come tubo e un ago filiforme appropriato per il nucleo dell'ago. La punta dell'ago è stata pre-levigata in anticipo. Ad esempio, in uno studio su ratti SD del peso di 250 ± 20 g (età del mese non specificata nel testo), scegliere la siringa n. 7 e l'ago filiforme da 0,30 x 0,40 mm43,44. Tuttavia, gli aghi auto-reinventati devono essere rigorosamente disinfettati, il che li rende inutilizzabili su larga scala. Se la punta dell'ago è troppo grande o affilata, può danneggiare i vasi sanguigni e i nervi, aumentando la probabilità di lividi45. Gli aghi per puntura lombare, che hanno un grande diametro e punte affilate, hanno maggiori probabilità di danneggiare i vasi sanguigni e i nervi. L'ago da inclusione monouso è il più utilizzato nella pratica clinica39. È più comodo da usare e più sicuro da usare rispetto agli aghi auto-reinventati e agli aghi per puntura lombare, il che lo rende ideale per TEAT. Inoltre, l'obiettivo dell'esperimento è migliorare la salute umana. Pertanto, gli studi sugli animali dovrebbero riflettere la situazione clinica. Pertanto, si consiglia di utilizzare aghi per incorporare il filo usa e getta come strumenti per l'inclusione del filo.

Il catgut era il materiale principale utilizzato nella TEAT, ma a causa del rigetto dei tessuti e degli ingredienti di origine animale, è stato sostituito da suture chirurgiche biosintetiche riassorbibili. Le suture sono disponibili in varie dimensioni e devono essere abbinate all'ago, come il n. 7 per suture 4-0 o 3-0. Nella ricerca sugli animali, vengono utilizzati principalmente 3-041, 4-046 e 5-047 . La maggior parte delle suture sono lunghe 1-2 cm. Tuttavia, i roditori hanno corpi molto più piccoli degli esseri umani, quindi mancano dimensioni adeguate per le loro dimensioni corporee. Pertanto, i ricercatori devono tagliare le suture in segmenti di 0,2-0,5 cm per renderle adatte ai roditori. Pertanto, si raccomanda di sciacquare le suture con acqua distillata pulita e sterile o soluzione salina dopo il taglio e prima dell'ammollo per un uso successivo o un'applicazione immediata per ridurre il rischio di infezione46.

Alcuni studi hanno proposto requisiti dettagliati per il metodo di inclusione, come l'inserimento rapido di aghi nel punto di agopuntura da circa 0,5 cm sotto il punto di agopunto verso ilpunto di agopunto 48. Questo è importante perché i roditori sono piccoli. Oltre ad avere abbondante tessuto muscolare negli arti inferiori, il tessuto sottocutaneo e gli strati muscolari nella testa, nella schiena e nell'addome sono relativamente deboli. Pertanto, la questione dei punti di inserzione e dell'angolo di inserzione di TEAT nella ricerca sugli animali deve essere enfatizzata qui. Quando si esegue la tettarella sugli arti inferiori dei roditori, è possibile l'agugliatura diretta nei punti di agopuntura. Per quanto riguarda il corpo, si consiglia di inserire l'ago sotto i punti di agopuntura (la distanza può essere regolata in modo flessibile in base alla lunghezza del corpo del filo) utilizzando l'agugliatura obliqua (<45°) o l'agugliatura piatta (<15°) per evitare danni agli organi interni.

Potenziale del TEAT per la prevenzione e il trattamento della malattia di Alzheimer
Recentemente, la ricerca sui TEAT sta emergendo, anche se i suoi effetti e meccanismi rimangono sfuggenti. Come accennato in precedenza, TEAT può migliorare i fattori di rischio correlati all'AD come l'obesità13,14, il diabete15, l'insonnia16, l'osteoporosi postmenopausale17 e la depressione18. Ha un effetto benefico sull'apprendimento e sulla compromissione della memoria nei ratti VD19. TEAT regola il metabolismo dei lipidi attraverso la via PPAR per migliorare il danno tissutale nei ratti affaticati indotti dall'eserciziofisico 49 ed esercita effetti antinfiammatori e analgesici nei topi indotti da freddo intermittente e stress attraverso la via TRPV150. Nel presente studio, abbiamo dimostrato che il trattamento con thread-embedding su ratti AD-like potrebbe alleviare i disturbi dell'apprendimento e della memoria migliorando la perdita di memoria spaziale e riducendo le cellule degenerate nelle regioni CA1 dell'ippocampo. Tuttavia, a causa della mancanza di uniformità e standardizzazione della ricerca attuale in diversi elementi critici del funzionamento del TEAT, tra cui il metodo di incorporamento, lo strumento di incorporamento, la filettatura e il periodo di intervallo di incorporamento, questo articolo discute principalmente gli elementi operativi critici del TEAT nella ricerca sperimentale. Questa ricerca è stata solo un'esplorazione preliminare dell'effetto di TEAT sull'AD, che ha richiesto molto più complemento e miglioramento nel chiarire l'esatta interazione molecolare tra di loro. Ciononostante, ha offerto un nuovo studio per l'inevitabile processo di AD, che potrebbe in qualche modo alleviare il pesante onere sul sistema sanitario pubblico.

Disclosures

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Gli autori dichiarano di non avere nulla da rivelare.

Acknowledgements

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Questo lavoro è stato sostenuto con fondi dalla National Natural Science Foundation of China (NSFC) n. 82374564 (a YJD) e n. 82074566 (a YJD) e dalla Sun Guojie Inheritance Base for MTC Agopuntura-Moxibustione della Federazione Mondiale delle Società di Agopuntura-Moxibustione a Wuhan, Cina (World Federation of Acupuncture-Moxibustion Societies [2019] No. 26) (a YJD) e dal progetto di costruzione del National Famous TCM Inheritance Studio dell'Amministrazione Nazionale della Medicina Tradizionale Cinese, Cina (Amministrazione nazionale della medicina tradizionale cinese [2022] n. 5) (a YJD).

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
0,9% soluzione fisiologica, 4% paraformaldeide, ematossilina, eosina Y (solubile in acqua), etanolo assoluto, 0,01M PBS in polvere, xilene, acido cloridrico, paraffina incorporata, gomma neutrasinopharm (www.sinopharm.com)
Sutura chirurgica assorbibile 5-0bodamedical (www.bodamedical.com)
70% alcol, iodoforo, batuffoloUtilizzato per la disinfezione.
cloralio idratosigmaC8383
vetrini coprioggetti, vetriniGuangzhou Wuqiang Experimental Equipment Co., Ltd
DisidratatoreWuhan Junjie JT-12J Disidratatore
DELUXE TERMOSTATO TAPPETINO TERMICOZhenhua Strumentiper il mantenimento della temperatura corporea dei ratti.
D-galattosiosigmaG0750
regolabarbaUtilizzato per la rasatura dei topi.
Bilancia elettronica per piccoli animali (ZK-DST)Henan Zhike Information Technology Co., Ltd
unguento all'eritromicinapiatto di
Utilizzato per posizionare suture riassorbibili tagliate.
Pentola di sterilizzazione a vapore ad alta pressione (YM100Z)apparecchiature mediche Shanghai SanshenPer la sterilizzazione di strumenti chirurgici.
Fabbricatore di ghiaccio (CMB40)Shanghai Sheyan Instrument Co., Ltd.
Microscopio (BX-53)Latte
Utilizzato per il test MWM.
Sistema di tracciamento video Morris Water Maze & Software di analisi dei dati (Versione: Watermaze 2.0)Chengdu Taimeng Technology Co., Ltd
No.6 ago per incorporare il filobodamedical (www.bodamedical.com)
forbici oftalmiche, vassoi, pinzette
Patologia Microtomo  (RM 2016)LEICA, Germania
pentobarbitalGermaniaP11011
pennarelloUtilizzato per segnare il punto di agopuntura.
Coltelli per affettare (R35)Piume,
Usato per lavarsi le mani.
guanti
di cotone computerizzato per tessuti biologici elettrico da uomo vetro per il farmaco Fabbrica di in polvere OLYMPUS indelebile sapone giapponese sterili

References

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  38. study on standardization of thread-embedding technique: Elucidation on the establishment of the national standard standardized manipulation of acupuncture and moxibustion, part x, thread-embedding. Zhongguo Zhen Jiu. 29 (5), 401-405 (2009).">Guan, L., Zuo, F., Song, Q., Shi, X. study on standardization of thread-embedding technique: Elucidation on the establishment of the national standard standardized manipulation of acupuncture and moxibustion, part x, thread-embedding. Zhongguo Zhen Jiu. 29 (5), 401-405 (2009).
  39. bibliometric analysis on key elements of clinical application of acupoint catgut embedding therapy in recent ten years. Zhen Ci Yan Jiu. 47 (9), 830-836 (2022).">Cheng, L., et al. bibliometric analysis on key elements of clinical application of acupoint catgut embedding therapy in recent ten years. Zhen Ci Yan Jiu. 47 (9), 830-836 (2022).
  40. Experimental study on the effects of acupoint thread burial and acupoint injection on insulin resistance and islet morphology in diabetic rats. Hubei University of Traditional Chinese Medicine. , (2015).">Dan, Y. Experimental study on the effects of acupoint thread burial and acupoint injection on insulin resistance and islet morphology in diabetic rats. Hubei University of Traditional Chinese Medicine. , (2015).
  41. To investigate the regulation of th1/th2 balance in rats with allergic rhinitis by acting on dc at yingxiang acupoint thread burial. Chengdu University of Traditional Chinese Medicine. , (2020).">Huang, Y. To investigate the regulation of th1/th2 balance in rats with allergic rhinitis by acting on dc at yingxiang acupoint thread burial. Chengdu University of Traditional Chinese Medicine. , (2020).
  42. Influence of catgut implantation at acupoints on splenic lymphocyte nuclear factor (nf-κb p65) and correlated signaling molecules (β2ar) in rats with experimental colitis. World J Acupuncture-Moxibustion. 20 (4), 48-53 (2010).">Zhang, X. Y., Shen, L., Fan, H., Liao, Y., Liang, L. Influence of catgut implantation at acupoints on splenic lymphocyte nuclear factor (nf-κb p65) and correlated signaling molecules (β2ar) in rats with experimental colitis. World J Acupuncture-Moxibustion. 20 (4), 48-53 (2010).
  43. Experimental study on the effect of acupoint thread insertion combined with moxibustion on il-6/jak/stat3 signaling pathway in rats with ulcerative colitis. Guizhou Medical University. , (2020).">Yu, Q. H. Experimental study on the effect of acupoint thread insertion combined with moxibustion on il-6/jak/stat3 signaling pathway in rats with ulcerative colitis. Guizhou Medical University. , (2020).
  44. Effect of moxibustion combined with acupoint catgut embedding on il-6/jak/stat3 signaling pathway in colonic mucosa of ulcerative colitis rats. Zhen Ci Yan Jiu. 47 (6), 525-530 (2022).">Wang, Y. J., et al. Effect of moxibustion combined with acupoint catgut embedding on il-6/jak/stat3 signaling pathway in colonic mucosa of ulcerative colitis rats. Zhen Ci Yan Jiu. 47 (6), 525-530 (2022).
  45. Application development of acupoint embedding line body and needle. China J Tradl Chinese Med Pharm. 35 (11), 5644-5647 (2020).">Ke, C., et al. Application development of acupoint embedding line body and needle. China J Tradl Chinese Med Pharm. 35 (11), 5644-5647 (2020).
  46. Regulatory effect of acupoint thread-embedding therapy at the shu points of the five organs on the hypothalamic-pituitary-adrenocortical axis in senescent rats under stress. Hunan J Tradl Chinese Med. 34 (05), 180-182 (2018).">Yue, Y. R., et al. Regulatory effect of acupoint thread-embedding therapy at the shu points of the five organs on the hypothalamic-pituitary-adrenocortical axis in senescent rats under stress. Hunan J Tradl Chinese Med. 34 (05), 180-182 (2018).
  47. Experimental study on the intervention of acupoint thread insertion in the expression of bcl-2 and bax in cochlear spiral ganglion cells in presbycus mice. Liaoning University of Traditional Chinese Medicine. , (2019).">Bao, J. Experimental study on the intervention of acupoint thread insertion in the expression of bcl-2 and bax in cochlear spiral ganglion cells in presbycus mice. Liaoning University of Traditional Chinese Medicine. , (2019).
  48. Effect of acupoint thread insertion on nasal mucosa th1/th2, treg/th17 in rats with allergic rhinitis. Chengdu University of Traditional Chinese Medicine. , (2013).">Liu, M. Effect of acupoint thread insertion on nasal mucosa th1/th2, treg/th17 in rats with allergic rhinitis. Chengdu University of Traditional Chinese Medicine. , (2013).
  49. Acupoint catgut embedding improves lipid metabolism in exercise-induced fatigue rats via the ppar signaling pathway. Animals (Basel). 13 (4), 558(2023).">Song, Y., et al. Acupoint catgut embedding improves lipid metabolism in exercise-induced fatigue rats via the ppar signaling pathway. Animals (Basel). 13 (4), 558(2023).
  50. Acupoint catgut embedding diminishes fibromyalgia pain through trpv1 in the mouse brain. J Integr Neurosci. 22 (4), 97(2023).">Lai, P. C., Yen, C. M., Hsiao, I. H., Chen, Y. H., Lin, Y. W. Acupoint catgut embedding diminishes fibromyalgia pain through trpv1 in the mouse brain. J Integr Neurosci. 22 (4), 97(2023).

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