Il modello murino di trapianto tracheale intrapolmonare (IPTT) è utile per lo studio della malattia obliterante delle vie aeree (OAD) dopo il trapianto di polmone. Offre approfondimenti sul comportamento immunologico e angiogenico polmonare specifico nell'obliterazione delle vie aeree dopo allotrapianto con elevata riproducibilità. Qui descriviamo la procedura IPTT e i suoi risultati attesi.
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Articolo metodologico
Trapianto tracheale intrapolmonare murino: un modello per lo studio della malattia obliterante delle vie aeree dopo il trapianto di polmone
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il trapianto tracheale intrapolmonare murino (IPTT) viene utilizzato come modello di malattia obliterante delle vie aeree (OAD) dopo trapianto di polmone. Inizialmente riportato dal nostro team, questo modello è stato utilizzato nello studio dell'OAD grazie alla sua elevata riproducibilità tecnica e all'idoneità per lo studio di comportamenti immunologici e interventi terapeutici.
Nel modello IPTT, un innesto tracheale di roditore viene inserito direttamente nel polmone del ricevente attraverso la pleura. Questo modello è distinto dal modello di trapianto tracheale eterotopico (HTT), in cui gli innesti vengono trapiantati in siti sottocutanei o omentali, e dal modello di trapianto tracheale ortotopico (OTT) in cui la trachea del donatore sostituisce la trachea del ricevente.
L'implementazione di successo del modello IPTT richiede competenze anestesiologiche e chirurgiche avanzate. Le abilità anestetiche includono l'intubazione endotracheale del ricevente, l'impostazione di parametri ventilatori appropriati e l'estubazione opportunamente programmata dopo il recupero dall'anestesia. Le competenze chirurgiche sono essenziali per il posizionamento preciso dell'innesto all'interno del polmone e per garantire un'efficace sigillatura della pleura viscerale per prevenire perdite d'aria e sanguinamento. In generale, il processo di apprendimento dura circa 2 mesi.
A differenza dei modelli HTT e OTT, nel modello IPTT, le vie aeree allotrapianto sviluppano l'obliterazione delle vie aeree nel microambiente polmonare pertinente. Ciò consente ai ricercatori di studiare i processi immunologici e angiogenici specifici del polmone coinvolti nell'obliterazione delle vie aeree dopo il trapianto di polmone. Inoltre, questo modello è anche unico in quanto presenta organi linfoidi terziari (TLO), che si osservano anche negli allotrapianti polmonari umani. I TLO sono costituiti da popolazioni di cellule T e B e caratterizzati dalla presenza di venule endoteliali elevate che dirigono il reclutamento delle cellule immunitarie; pertanto, è probabile che svolgano un ruolo cruciale nell'accettazione e nel rigetto del trapianto. Concludiamo che il modello IPTT è uno strumento utile per studiare le vie immunitarie e profibrotiche intrapolmonari coinvolte nello sviluppo dell'obliterazione delle vie aeree nell'alloinnesto del trapianto di polmone.
Introduzione
Il trapianto di polmone è stato stabilito come trattamento efficace per i pazienti con malattie respiratorie allo stadio terminale. Tuttavia, il tasso mediano di sopravvivenza per i pazienti sottoposti a trapianto di polmone umano è solo di circa 6 anni, con lo sviluppo di bronchiolite obliterante (OB), un tipo di malattia ostruttiva delle vie aeree (OAD), che è una delle principali cause di morte dopo il primo anno dopo il trapianto.
Diversi modelli animali sono stati utilizzati per studiare il meccanismo alla base dell'OAD. Uno di questi modelli è il trapianto tracheale eterotopico (HTT) modello2<....
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Protocollo
Tutti gli animali sono stati trattati in conformità con le linee guida stabilite dal Canadian Council on Animal Care nella Guida alla cura e all'uso degli animali da esperimento. Il protocollo sperimentale è stato approvato dall'Animal Care Committee del Toronto General Hospital Research Institute, University Health Network.
1. Chirurgia del donatore
NOTA: I topi BALB/c sono usati come esempio di donatori per l'esperimento. Tutte le procedure devono essere eseguite utilizzando una tecnica sterile.
- Prima della procedura, registrare il peso di ciascun mouse.
- Sopprimere il topo u....
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Risultati
Sulla base della nostra esperienza, la competenza in questo modello richiede in genere circa 2 mesi di formazione. Una volta raggiunta la competenza, le procedure del donatore richiedono in genere 15 minuti, mentre le procedure del ricevente richiedono circa 30 minuti. Il tasso di mortalità atteso per un operatore addestrato è dello 0%.
Nella Figura 4A, un allotrapianto tracheale mostra un'ostruzione completa con il tessuto fibroblastico e le cellule epiteliali so.......
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Discussione
La procedura IPTT murina include passaggi critici. Per quanto riguarda l'anestesia, il primo passo cruciale è l'intubazione endotracheale. È essenziale tenere il topo ad un'altezza adeguata con le zampe sul tavolo per visualizzare le corde vocali e facilitare l'intubazione immediata. Inoltre, è necessaria un'attenta regolazione del volume respiratorio e della pressione positiva di fine espirazione (PEEP). In genere, un volume respiratorio di 500 μL e una PEEP di 2 cmH2O sono sufficienti per topi di peso 25-30 .......
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Dichiarazioni
Gli autori di questo manoscritto non hanno conflitti di interesse da rivelare.
Ringraziamenti
Gli autori ringraziano Jerome Valero per la cura di questo manoscritto. La Figura 1 e la Figura 3I,J,L sono state create con BioRender.com.
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| BALB/cJ | Il laboratorio Jackson | 8-10 settimane 25-30 g | Maschio, donatore |
| BD 1 mL Siringa | Becton Dickinson | 309659 | |
| BD PrecisionGlide Ago Aiguile BD PrecisionGlide | Becton Dickinson | 305122 | |
| Bovie Change-A-Tip Deluxe ad alta temperatura | Bovie | DEL1 | |
| C57BL/6J | Il laboratorio Jackson | 8-10 settimane 25-30 g | Maschio, Ricevente |
| Dumont #5/45 Forcipe | F· S· T | 11251-35 | |
| Ethicon Ligaclip Applicatori a clip multiple-Ethicon | LX107 | ||
| Forcipe Graefe extra fine | F· S· T | 11150-10 | |
| Glover Bulldog Clamp | Integra | 320-127 | |
| Emostatici Halsted-Mosquito | F· S· T | 13009-12 | |
| Clip di legatura in titanio Horizon Teleflex | 001201 | ||
| Leica M651 Microscopio operatorio manuale per procedure microchirurgiche | |||
| Fissatore Magnetix con blocco a molla | CD+ LABS | ACD-001 | |
| Forbice microchirurgica | Jarit | 277-051 | |
| Ventilatore perinatale per topi e ratti Modello 687 | Harvard | 55-0001 | |
| Perfadex Plus | XVIVO | 19850 | |
| Punta divaricatrice smussata - 2,5 mm | CD+ LABS | ACD-011 | |
| tavolo per piccoli animali | CD+ LABS | ACD-003 | |
| Surgipro Blue 24" CV-1 conico, unguento | Covidien | VP702X | |
| Systane | Alconn | 1444062 | |
| Sistema Elastomero | CD+ LABS | ACD-007 | |
| Terumo Surflo Catetere IV, 20 G x 1 in | Terumo Medical Corporation | SR-OX2025CA | |
| VMT tavolo | Top benson | 91803300 |
Riferimenti
- Chambers, D. C., et al. The International Thoracic Organ Transplant Registry of the International Society for Heart and Lung Transplantation: Thirty-fifth adult lung and heart-lung transplant report-2018; Focus theme: Multiorgan Transplantation. J Heart Lung Transplant. 37 (10), 1169-1183 (2018).<....
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Ristampe e permessi
