Estrazione del veleno dalla vespa parassitoide Trichogramma dendrolimi utilizzando un ospite artificiale

Sommario

Qui presentiamo un protocollo per l'estrazione del veleno da Trichogramma dendrolimi utilizzando un ospite artificiale creato con film di polietilene e soluzione di amminoacidi.

Abstract

Le vespe parassitoidi sono un gruppo eterogeneo di insetti imenotteri che fungono da risorse inestimabili per il biocontrollo dei parassiti. Per garantire il successo del parassitismo, le vespe parassitoidi iniettano veleno nei loro ospiti per sopprimere l'immunità dei loro ospiti, modulare lo sviluppo, il metabolismo e persino il comportamento degli ospiti. Con oltre 600.000 specie stimate, la diversità delle vespe parassitoidi supera quella di altri animali velenosi, come serpenti, lumache a cono e ragni. Il veleno di vespa parassitoide è una fonte poco esplorata di molecole bioattive con potenziali applicazioni nel controllo dei parassiti e nella medicina. Tuttavia, la raccolta del veleno parassitoide è impegnativa a causa dell'impossibilità di utilizzare la stimolazione diretta o elettrica e della difficoltà di dissezione a causa delle loro piccole dimensioni. Trichogramma è un genere di vespe parassitoidi di minuscole (~0,5 mm) uova ampiamente utilizzate per il controllo biologico dei parassiti lepidotteri sia in agricoltura che nelle foreste. Riportiamo qui un metodo per estrarre il veleno da T. dendrolimi utilizzando ospiti artificiali. Questi ospiti artificiali vengono creati con film di polietilene e soluzioni di amminoacidi e poi inoculati con vespe Trichogramma per il parassitismo. Il veleno è stato successivamente raccolto e concentrato. Questo metodo consente l'estrazione di grandi quantità di veleno di Trichogramma evitando la contaminazione da altri tessuti causata dalla dissezione, un problema comune nei protocolli di dissezione del serbatoio del veleno. Questo approccio innovativo facilita lo studio del veleno di Trichogramma , aprendo la strada a nuove ricerche e potenziali applicazioni.

Introduzione

Le vespe parassitoidi sono insetti imenotteri parassiti che rappresentano importanti risorse per la lotta biologica¹. Esiste un'ampia varietà di vespe parassitoidi, con oltre 600.000 specie stimate². La diversità delle vespe parassitoidi supera di gran lunga quella di altri artropodi velenosi, come serpenti, lumache a cono, ragni, scorpioni e api. Il veleno è un importante fattore parassitario nelle vespe parassitoidi. Per il successo del parassitismo, il veleno viene iniettato nell'ospite, modulando il comportamento, l'immunità, lo sviluppo e il metabolismo^{dell'ospite 3}. Inoltre, il veleno delle ....

Protocollo

1. Allevamento di insetti

1. Somministrare Corcyra cephalonica con farina di mais ad una temperatura di 26 ± 1°C e un'umidità relativa del 40% ± 10%.
2. Allevare il ceppo di T. dendrolimi dell'insetto Jilin indoor utilizzando le uova di Corcyra cephalonica come ospiti. Nutrire gli adulti di vespe con acqua di saccarosio al 10% in provette di Drosophila a una temperatura di 26 ± 1 °C, umidità relativa del 70% ± 10%, luce (L): buio (D) periodo di 14 h: 10 h.

2. Preparazione delle carte uovo in film plastico di polietilene

1. Prendi una pe....

Risultati

La concentrazione proteica di campioni di veleno rappresentativi è stata misurata utilizzando il kit di analisi delle proteine, con i risultati presentati nella Tabella 1. I risultati hanno mostrato che la concentrazione di proteine del veleno raccolte con questo metodo variava da 0,35 μg/μL a 0,46 μg/μL, mentre il controllo negativo della soluzione di amminoacidi aveva solo una concentrazione proteica compresa tra 0,03 μg/μL e 0,05 μg/μL. La concentrazione di proteine del veleno raccolte con questo meto.......

Discussione

Qui, presentiamo un metodo per estrarre il veleno da T. dendrolimi utilizzando ospiti artificiali. I punti chiave dell'esperimento di raccolta del veleno sono i seguenti. (1) Durante la preparazione, T. dendrolimi deve essere anestetizzato rapidamente con un'adeguata concentrazione di CO₂ . Se la concentrazione di CO₂ è troppo bassa, sarà insufficiente per anestetizzare rapidamente il Trichogramma . Al contrario, se la concentrazione è troppo alta, i Trichogramma .......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
10 μ m Rete di nylon	Millipore	NY1002500	Per filtrare le uova
10% Alcool polivinilico	Aladino	P139533	Per attirare  T. dendrolimi  per deporre le uova
10% Acqua di saccarosio	Sinopharm Reagente chimico	10021463	Feed Trichogramma dendrolimi
4x LDS buffer di caricamento	Ace Hardware	B23010301	SDS-PAGE
Scatola di raccolta	Deli	8555	Contenitore per T. dendrolimi parassitismo
Futuro PAGE  4– 12% (12 pozzetti)Ace	Hardware	J70236502X	SDS-PAGE
GenScript eStain L1 apparato di colorazione delle proteine	GenScript	L00753	SDS-PAGE
Asta di macinazione in vetro	Applygen	tb6268	Sporgenze semicircolari
L- Leucina	Solarbio	L0011	Componenti dell'ospite artificiale
L-Istidina	Aladino	A2219458	Componenti dell'ospite artificiale
L-Fenilalanina	Solarbio	P0010	Componenti dell'ospite artificiale
Mini-Centrifughe	Scilogex	D1008	Centrifuga
MOPS-SDS buffer di funzionamento	Ace Hardware	B23021	SDS-PAGE
Kit per il dosaggio istantaneo delle proteine BCA Omni-Easy	Shanghai Yamay Biomedical Technology	ZJ102	Per l'esimazione della concentrazione proteica del veleno
Layout della piastra PCR di 96 fori	Thermo Fisher	AB1400L	Protrusioni semicircolari
Film plastico in polietilene	Suzhou Aopang Trading	001c5427	Carta dell'uovo artificiale
Marcatore proteico di colore prestained (10– 180 kDa)	YiFeiXue Biotech	YWB007	SDS-PAGE
Elastico	Guangzhou qianrui biologia scienza e tecnologia	009	Stringere il film plastico e la scatola di raccolta
Tappetino per setti in gomma siliconica, 96 pozzetti, foro rotondo	Sangon Biotech	F504416-0001	Sporgenze semicircolari