Qui presentiamo un protocollo per l'estrazione del veleno da Trichogramma dendrolimi utilizzando un ospite artificiale creato con film di polietilene e soluzione di amminoacidi.
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Articolo metodologico
Estrazione del veleno dalla vespa parassitoide Trichogramma dendrolimi utilizzando un ospite artificiale
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
Le vespe parassitoidi sono un gruppo eterogeneo di insetti imenotteri che fungono da risorse inestimabili per il biocontrollo dei parassiti. Per garantire il successo del parassitismo, le vespe parassitoidi iniettano veleno nei loro ospiti per sopprimere l'immunità dei loro ospiti, modulare lo sviluppo, il metabolismo e persino il comportamento degli ospiti. Con oltre 600.000 specie stimate, la diversità delle vespe parassitoidi supera quella di altri animali velenosi, come serpenti, lumache a cono e ragni. Il veleno di vespa parassitoide è una fonte poco esplorata di molecole bioattive con potenziali applicazioni nel controllo dei parassiti e nella medicina. Tuttavia, la raccolta del veleno parassitoide è impegnativa a causa dell'impossibilità di utilizzare la stimolazione diretta o elettrica e della difficoltà di dissezione a causa delle loro piccole dimensioni. Trichogramma è un genere di vespe parassitoidi di minuscole (~0,5 mm) uova ampiamente utilizzate per il controllo biologico dei parassiti lepidotteri sia in agricoltura che nelle foreste. Riportiamo qui un metodo per estrarre il veleno da T. dendrolimi utilizzando ospiti artificiali. Questi ospiti artificiali vengono creati con film di polietilene e soluzioni di amminoacidi e poi inoculati con vespe Trichogramma per il parassitismo. Il veleno è stato successivamente raccolto e concentrato. Questo metodo consente l'estrazione di grandi quantità di veleno di Trichogramma evitando la contaminazione da altri tessuti causata dalla dissezione, un problema comune nei protocolli di dissezione del serbatoio del veleno. Questo approccio innovativo facilita lo studio del veleno di Trichogramma , aprendo la strada a nuove ricerche e potenziali applicazioni.
Introduzione
Le vespe parassitoidi sono insetti imenotteri parassiti che rappresentano importanti risorse per la lotta biologica1. Esiste un'ampia varietà di vespe parassitoidi, con oltre 600.000 specie stimate2. La diversità delle vespe parassitoidi supera di gran lunga quella di altri artropodi velenosi, come serpenti, lumache a cono, ragni, scorpioni e api. Il veleno è un importante fattore parassitario nelle vespe parassitoidi. Per il successo del parassitismo, il veleno viene iniettato nell'ospite, modulando il comportamento, l'immunità, lo sviluppo e il metabolismodell'ospite 3. Inoltre, il veleno delle ....
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Protocollo
1. Allevamento di insetti
- Somministrare Corcyra cephalonica con farina di mais ad una temperatura di 26 ± 1°C e un'umidità relativa del 40% ± 10%.
- Allevare il ceppo di T. dendrolimi dell'insetto Jilin indoor utilizzando le uova di Corcyra cephalonica come ospiti. Nutrire gli adulti di vespe con acqua di saccarosio al 10% in provette di Drosophila a una temperatura di 26 ± 1 °C, umidità relativa del 70% ± 10%, luce (L): buio (D) periodo di 14 h: 10 h.
2. Preparazione delle carte uovo in film plastico di polietilene
- Prendi una pe....
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Risultati
La concentrazione proteica di campioni di veleno rappresentativi è stata misurata utilizzando il kit di analisi delle proteine, con i risultati presentati nella Tabella 1. I risultati hanno mostrato che la concentrazione di proteine del veleno raccolte con questo metodo variava da 0,35 μg/μL a 0,46 μg/μL, mentre il controllo negativo della soluzione di amminoacidi aveva solo una concentrazione proteica compresa tra 0,03 μg/μL e 0,05 μg/μL. La concentrazione di proteine del veleno raccolte con questo meto.......
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Discussione
Qui, presentiamo un metodo per estrarre il veleno da T. dendrolimi utilizzando ospiti artificiali. I punti chiave dell'esperimento di raccolta del veleno sono i seguenti. (1) Durante la preparazione, T. dendrolimi deve essere anestetizzato rapidamente con un'adeguata concentrazione di CO2 . Se la concentrazione di CO2 è troppo bassa, sarà insufficiente per anestetizzare rapidamente il Trichogramma . Al contrario, se la concentrazione è troppo alta, i Trichogramma .......
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Dichiarazioni
L'autore non ha nulla da rivelare e non ha interessi finanziari concorrenti.
Ringraziamenti
Riconosciamo il sostegno finanziario della Fondazione per le Scienze Naturali della Provincia di Hainan (Sovvenzione n. 323QN262), della Fondazione Nazionale per le Scienze Naturali della Cina (Sovvenzione n. 31701843 e 32172483), del Fondo per l'Innovazione Scientifica e Tecnologica dell'Agricoltura del Jiangsu (Sovvenzione n. CX(22)3012 e CX(21)3008), la Fondazione "Shuangchuang Doctor" della provincia di Jiangsu (sovvenzione n. 202030472) e il fondo di avvio dell'Università agraria di Nanchino (sovvenzione n. 804018).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| 10 μ m Rete di nylon | Millipore | NY1002500 | Per filtrare le uova |
| 10% Alcool polivinilico | Aladino | P139533 | Per attirare T. dendrolimi per deporre le uova |
| 10% Acqua di saccarosio | Sinopharm Reagente chimico | 10021463 | Feed Trichogramma dendrolimi |
| 4x LDS buffer di caricamento | Ace Hardware | B23010301 | SDS-PAGE |
| Scatola di raccolta | Deli | 8555 | Contenitore per T. dendrolimi parassitismo |
| Futuro PAGE 4– 12% (12 pozzetti)Ace | Hardware | J70236502X | SDS-PAGE |
| GenScript eStain L1 apparato di colorazione delle proteine | GenScript | L00753 | SDS-PAGE |
| Asta di macinazione in vetro | Applygen | tb6268 | Sporgenze semicircolari |
| L- Leucina | Solarbio | L0011 | Componenti dell'ospite artificiale |
| L-Istidina | Aladino | A2219458 | Componenti dell'ospite artificiale |
| L-Fenilalanina | Solarbio | P0010 | Componenti dell'ospite artificiale |
| Mini-Centrifughe | Scilogex | D1008 | Centrifuga |
| MOPS-SDS buffer di funzionamento | Ace Hardware | B23021 | SDS-PAGE |
| Kit per il dosaggio istantaneo delle proteine BCA Omni-Easy | Shanghai Yamay Biomedical Technology | ZJ102 | Per l'esimazione della concentrazione proteica del veleno |
| Layout della piastra PCR di 96 fori | Thermo Fisher | AB1400L | Protrusioni semicircolari |
| Film plastico in polietilene | Suzhou Aopang Trading | 001c5427 | Carta dell'uovo artificiale |
| Marcatore proteico di colore prestained (10– 180 kDa) | YiFeiXue Biotech | YWB007 | SDS-PAGE |
| Elastico | Guangzhou qianrui biologia scienza e tecnologia | 009 | Stringere il film plastico e la scatola di raccolta |
| Tappetino per setti in gomma siliconica, 96 pozzetti, foro rotondo | Sangon Biotech | F504416-0001 | Sporgenze semicircolari |
Riferimenti
- Pennacchio, F., Strand, M. R. Evolution of developmental strategies in parasitic hymenoptera. Annual Review of Entomology. 51, 233-258 (2006).
- Yan, Z. C., Ye, X. H., Wang, B. B., Fang, Q., Ye, G. Y. Research advances on....
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Ristampe e permessi
