Il protocollo descrive un nuovo metodo per valutare la citotossicità integrale dei metaboliti dei pesticidi triazolici nelle piante.
È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Articolo metodologico
Il protocollo descrive un nuovo metodo per valutare la citotossicità integrale dei metaboliti dei pesticidi triazolici nelle piante.
Diversi inquinanti organici sono stati rilasciati nell'ambiente a causa delle attività antropiche. Questi inquinanti possono essere assorbiti dalle piante coltivate, causando potenziali minacce all'ecosistema e alla salute umana lungo tutta la catena alimentare. La biotrasformazione degli inquinanti nelle piante genera una serie di metaboliti che possono essere più tossici dei loro composti originari, il che implica che i metaboliti dovrebbero essere presi in considerazione durante la valutazione della tossicità. Tuttavia, i metaboliti degli inquinanti nelle piante sono estremamente complessi, il che rende difficile ottenere in modo completo le informazioni tossicologiche di tutti i metaboliti. Questo studio ha proposto una strategia per valutare la citotossicità integrale dei metaboliti inquinanti nelle piante trattandoli nel loro insieme durante i test tossicologici. I pesticidi triazolici, una classe di fungicidi ad ampio spettro, sono stati ampiamente applicati nella produzione agricola. L'inquinamento da residui nei terreni agricoli ha attirato sempre più attenzione. Pertanto, quattro pesticidi triazolici, tra cui flusilazolo, diniconazolo, tebuconazolo e propiconazolo, sono stati selezionati come inquinanti testati. I metaboliti sono stati generati dal trattamento del callo di carota con pesticidi triazolici testati. Dopo un trattamento di 72 ore, sono stati estratti i metaboliti dei pesticidi nel callo di carota, seguiti da test tossicologici utilizzando la linea cellulare Caco-2. I risultati hanno mostrato che i metaboliti dei pesticidi testati nel callo di carota non hanno inibito significativamente la vitalità delle cellule Caco-2 (P>0,05), dimostrando l'assenza di citotossicità dei metaboliti dei pesticidi. Questo metodo proposto apre una nuova strada per valutare la citotossicità dei metaboliti inquinanti nelle piante, che dovrebbe fornire dati preziosi per una valutazione precisa della tossicità.
Le piante coltivate che crescono nei terreni agricoli possono essere esposte a vari inquinanti organici provenienti da attività antropiche 1,2. Gli inquinanti possono essere assorbiti dalle piante, causando ulteriori minacce all'ecosistema e alla salute umana attraverso le catene alimentari 3,4. Gli xenobiotici nelle piante probabilmente subiscono una serie di biotrasformazioni, come i metabolismi di fase I e II5, generando una serie di metaboliti. Secondo il concetto di fegato verde nelle piant....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
1. Differenziazione del callo di carota
NOTA: Il protocollo dettagliato per la differenziazione del callo di carota è stato descritto in un precedente studio12. Ecco una breve descrizione.
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
La Figura 1 rappresenta lo schema del metodo proposto per la generazione, l'estrazione e la valutazione della citotossicità dei metaboliti dei pesticidi nel callo di carota. Nella Figura 2, le curve cinetiche di assorbimento e metabolismo dei pesticidi testati, da cui possiamo scoprire che le concentrazioni di pesticidi nei terreni di coltura sono diminuite esponenzialmente, mentre quelle nel callo di carota hanno iniziato ad aumentare, raggiungendo un picco a 4.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Questo protocollo è stato sviluppato per valutare la citotossicità integrale dei metaboliti dei pesticidi triazolici nelle piante combinando modelli di callo vegetale e cellule umane. I passaggi critici per questo protocollo proposto sono la coltura del callo vegetale e della cellula Caco-2. La parte più difficile e i relativi consigli per la coltura del callo delle piante sono stati forniti nel nostro precedente studio12. Qui, va notato che il mantenimento delle .......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Questo studio è stato supportato dalla National Natural Science Foundation of China (21976160) e dal Public Welfare Technology Application Research Project (LGF21B070006) della provincia di Zhejiang.
....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| acido 2,4-diclorofenossiacetico | WAKO | 1 mg/L | |
| 20% H2O2 | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. | 10011218-500ML | |
| 6-benzilamminopurina | WAKO | 0,5 mg/L | |
| 75% etanolo | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. | 1269101-500 mL | |
| Piastra a 96 pozzetti | Thermo Fisher | ||
| Acetonitrile | Sigma-Aldrich | ||
| Incubatore per clima artificiale | Ningbo DongNan Lab Equipment Co., Ltd | RDN-1000A-4 | |
| Autoclavi | STIK | MJ-Series | |
| Caco-2 celle | Nuoyang Biotechnology Co., Ltd. | ||
| Reagenti CCK8 | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Cina | G021-1-3 | |
| Centrifuga | Thermo Fisher | ||
| CO2 incubatore | Labtrip | HWJ-3-160 | |
| Dimetilsolfossido | Solarbio Life Sciences | D8371 | |
| Diniconazolo, 98,7% | J& K Scientific | 83657-24-3 | |
| Mezzo dell'aquila modificato di Dulbecco | Solarbio Life Sciences | 11965-500 mL | |
| bilancia elettronica | Shanghai Precision Instrument Co., Ltd | FA1004B | |
| Spettrofotometro a fluorescenza | |||
| 98,5% | J& K Scientifico | 85509-19-9 | |
| Liofilizzatore | SCIENTZ | ||
| Macinatore di tessuti ad alta produttività | SCIENTZ | ||
| Microscopio invertito | Leica Biosystems | DMi1 | |
| Sistema Milli-Q | Millipore | MS1922801-4L | |
| Murashige & Skoog medium | HOPEBIO | HB8469-7 | |
| Concentratore di soffiaggio di azoto | AOSHENG | MD200-2 | |
| PBS | Solarbio Life Sciences | P1022-500 mL | |
| Penicillina-Streptomicina liquida | Solarbio Life Sciences | P1400-100 mL | |
| Propiconazolo, 100% | J& K Scientifico | 60207-90-1 | |
| Research plus | Eppendorf | 10-1000 μ | |
| Semi di carota mignolo (Daucus carota var. sativus) | Shouguang Seed Industry Co., Ltd | ||
| Incubatrici a scuotimento | Shanghai bluepard instruments Co., Ltd. | THZ-98AB | |
| Tebuconazolo, 100% | J& K Scientific | 107534-96-3 | |
| Soluzione di tripsina-EDTA | Solarbio Life Sciences | T1300-100 mL | |
| Macchina ad ultrasuoni | ZKI | UC-6 | |
| Banco super pulito sterilizzato UV | AIRTECH | ||
| Strumento a vortice | Wuxi Laipu Instrument Equipment Co., Ltd | BV-1010 |
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.