Qui, presentiamo un protocollo basato su un sistema di visione artificiale (CVS) per determinare il comportamento di fusione dei sistemi alimentari multifase.
Articolo metodologico
Qui, presentiamo un protocollo basato su un sistema di visione artificiale (CVS) per determinare il comportamento di fusione dei sistemi alimentari multifase.
Il comportamento di fusione è uno degli indici di qualità più importanti del gelato. Di solito viene valutato con metodi gravimetrici ed espresso in termini di tempo di inizio e velocità di fusione. Tuttavia, anche l'aspetto del gelato durante la fusione è importante perché il mantenimento della forma è legato a una buona struttura del prodotto. Il protocollo qui proposto illustra un sistema di visione artificiale (CVS) che può essere utilizzato a supporto della metodologia gravitazionale già esistente per calcolare due nuovi indici di fusione relativi alla ritenzione di forma e alla velocità di fusione. Le foto del gelato durante lo scioglimento vengono scattate ogni 15 minuti per un totale di 90 minuti. Successivamente, le immagini digitali vengono elaborate utilizzando un metodo di elaborazione delle immagini appositamente sviluppato per calcolare l'area, l'altezza e la larghezza del gelato. Il rapporto tra altezza e larghezza ad ogni tempo di fusione, riferito al rapporto al tempo 0 (Rt/R0), è un indice del mantenimento della forma del gelato, mentre l'area ai diversi tempi di fusione riferita all'area al tempo 0 (At/A0) è correlata alla velocità di fusione. Questo sistema di visione artificiale consente di ottenere risultati altamente sensibili e affidabili, e può essere applicato non solo al gelato ma anche a diverse matrici alimentari, come la panna di latte montato o l'albume d'uovo.
Il gelato è un sistema multifase in cui le fasi liquida, solida e gassosa sono strettamente collegate. La fase liquida continua avvolge bolle d'aria e cristalli di ghiaccio e contiene grassi parzialmente cristallizzati, proteine colloidali, sali, zuccheri (eventualmente cristallizzati) e stabilizzanti. La composizione del gelato varia a seconda delle richieste del mercato locale e delle eventuali normative. Sebbene la tecnologia di lavorazione influisca sulle caratteristiche del gelato finale, ogni componente svolge un ruolo importante nella definizione della qualità del prodotto1. Il comportamento di fusione è uno degli indici di qualità più importanti del gelato, considerando i fenomeni che si verificano sia durante il consumo che in bocca. Con la penetrazione del calore nel gelato, i cristalli di ghiaccio si sciolgono e l'acqua si diffonde e si mescola con la fase di siero, che può defluire attraverso la struttura rimanente2. Un prodotto a fusione rapida è indesiderabile per un'alimentazione confortevole, ma anche per garantire una maggiore resistenza agli shock termici. Tuttavia, i prodotti a fusione lenta indicano anche alcuni difetti nella formulazione1. È noto che la microstruttura del gelato è responsabile delle proprietà di fusione3, ma finora sono stati pubblicati risultati contrastanti, che dimostrano che la conoscenza dell'influenza dei fattori microstrutturali sulla fusione è ancora limitata4. Pertanto, sono necessari ulteriori studi per chiarire il meccanismo di fusione, che è cruciale anche nella progettazione di nuove formulazioni3.
Il comportamento di fusione è solitamente valutato con metodi gravimetrici ed espresso in termini di tempo di inizio e velocità di fusione5. Una determinata porzione di gelato viene posta su una rete metallica in una cella a temperatura controllata e viene registrato il peso del prodotto fuso. Dalla curva peso-tempo si possono evidenziare tre fasi: la fase di ritardo durante la quale avviene la penetrazione del calore, la fase di fusione rapida con la fase di siero diluito che scorre attraverso la struttura del gelato alla massima velocità e la fase stazionaria, in cui la maggior parte del prodotto è gocciolata2.
Con il metodo gravimetrico è possibile riconoscere i prodotti a fusione lenta e veloce; Tuttavia, anche l'aspetto del gelato durante la fusione è importante, perché il mantenimento della forma è legato a una buona composizione e struttura del prodotto6. Pertanto, una procedura basata su un sistema di visione artificiale (CVS) può supportare la metodologia gravitazionale già esistente consentendo lo studio dell'aspetto del prodotto durante la fusione. I CVS possono acquisire numerosi attributi alimentari3 (ad esempio, dimensioni, peso, forma, consistenza e colore) con dettagli accurati che non possono essere osservati dall'occhio umano. Tali sistemi sono solitamente costituiti da fotocamere digitali e software di elaborazione delle immagini7. Infatti, un protocollo basato su CVS include due passaggi principali: 1) acquisizione delle immagini e 2) elaborazione delle immagini. Possono essere applicati vari livelli di elaborazione delle immagini7, dai più semplici ai più complessi, come i metodi di deep learning per lo sviluppo dell'Intelligenza Artificiale 8,9. Grande attenzione è stata recentemente dedicata ai CVS nel settore alimentare e un elevato numero di applicazioni è stato sviluppato per l'ispezione della sicurezza alimentare, il monitoraggio della lavorazione degli alimenti, il rilevamento di corpi estranei e altri campi. Sono veloci, efficienti e non distruttivi, rappresentando quindi validi strumenti per fornire ai consumatori alimenti sicuri e di alta qualità10.
Nel campo del gelato, è stato suggerito un metodo di analisi delle immagini per studiare la ricristallizzazione del ghiaccio mediante microscopia ottica11. Più recentemente, le immagini di tomografia computerizzata a raggi X sono state elaborate per analizzare la microstruttura 3D di sostanze a porosità molle, incluso il gelato3. Tuttavia, l'elaborazione di semplici immagini digitali di dispositivi ad accoppiamento di carica (CCD) può presentare diversi vantaggi in termini di facilità di acquisizione e resa dell'aspetto del gelato così come percepito dai consumatori. Alcuni Autori mostrano immagini di gelato durante la fusione12, ma, per quanto ne sappiamo, l'estrazione di indici numerici dalle immagini è stata riportata per la prima volta da Moriano e Alamprese13.
Pertanto, il protocollo qui proposto, basato sul lavoro di Moriano e Alamprese13, illustra un semplice CVS che può essere applicato a supporto della metodologia gravitazionale già esistente per lo studio del comportamento di fusione del gelato. Un diagramma a blocchi del metodo proposto è illustrato nella Figura 1. L'uso di un tale sistema consente il calcolo di due indici di fusione relativi al mantenimento della forma e alla velocità di fusione. In particolare, l'articolo descrive per la prima volta la configurazione sperimentale dettagliata e la procedura per l'acquisizione di immagini digitali durante la fusione del gelato e le fasi di elaborazione delle immagini. Inoltre, i risultati ottenuti dai gelati prodotti con diversi dolcificanti (ad esempio, saccarosio, sucromalt ed eritritolo) mostrano il potenziale del metodo.

Figura 1: Schema a blocchi delle metodologie proposte. Riassunto delle tappe generali per il sistema di visione artificiale proposto e del metodo gravimetrico per lo studio del comportamento di fusione del gelato. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
1. Impostazione sperimentale e procedure per le prove di fusione

Figura 2: Configurazione del test di fusione. La figura mostra come impostare la prova di fusione nell'armadio termostatico: Mettere un cilindro di vetro graduato su una bilancia digitale per raccogliere e pesare il gelato fuso. Il campione di gelato viene adagiato su una rete metallica su un imbuto sospeso sopra il cilindro. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
2. Elaborazione delle immagini per il calcolo degli indici di fusione
(1)
(2)
(3)Figura 1 supplementare: Calibrazione spaziale dell'immagine. (A) Andare alla finestra Misura > Calibrazione > Spaziale del software di analisi delle immagini. Seleziona Nuovo, quindi seleziona Immagine per aprire la finestra Ridimensionamento . Viene indicata la lunghezza di riferimento nell'unità di misura per convertire i pixel (ad esempio, millimetri). (B) Sovrapporre con cautela la barra verde con la parte di riferimento corrispondente alla lunghezza indicata e fare clic su OK. Clicca qui per scaricare questo file.
Figura 2 supplementare: Ritaglio dell'AOI e conversione in scala di grigi. (A) Conversione dell'Area di Interesse (AOI) in scala di grigi e (B) l'immagine risultante. Clicca qui per scaricare questo file.
Figura supplementare 3: Selezione dei parametri da misurare. Nella finestra Seleziona misura è possibile selezionare i parametri da misurare; Per la valutazione della fusione del gelato, è necessario selezionare l'area, la larghezza e l'altezza della scatola. Clicca qui per scaricare questo file.
Figura supplementare 4: Segmentazione del campione di gelato. Nella finestra "Segmentazione" è possibile selezionare gli intervalli di istogramma da considerare per coprire esattamente l'area della forma del gelato. Clicca qui per scaricare questo file.
Figura supplementare 5: Filtraggio degli oggetti e funzione Count. Le linee rosse evidenziano gli oggetti luminosi riconosciuti. Applicando la funzione di conteggio e aprendo la finestra "Visualizza, Dati di misurazione", verranno visualizzati i risultati dei parametri selezionati (A). Per filtrare solo la forma del gelato, è possibile selezionare un intervallo di area minimo e massimo nella finestra "Seleziona misura", contando così solo i parametri di un oggetto (B). Clicca qui per scaricare questo file.
Figura 6 supplementare: Indice di ritenzione della forma (R). Vengono visualizzate l'altezza della casella (Ht, linea tratteggiata rossa) e la larghezza della casella (Wt, linea continua nera) utilizzate per il calcolo dell'indice di ritenzione della forma (R). Clicca qui per scaricare questo file.

Figura 3: Curve di forma e di ritenzione dell'area. Esempio di una forma di gelato (A) e di curve di ritenzione dell'area (B), in cui i valori medi di Rt/R0 e At/A0 sono tracciati nel tempo; Le barre di errore corrispondono ai valori di deviazione standard ottenuti dalle repliche di analisi. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
3. Elaborazione di dati gravimetrici
(4)
(5)
Figura 4: Curva gravimetrica. Esempio di curva di fusione del gelato ottenuta con il metodo gravimetrico. La curva originale è mostrata in rosso; le serie di dati selezionate nella porzione lineare sono mostrate in verde; La linea di regressione calcolata viene visualizzata in punti neri. Vengono mostrati anche l'equazione e il coefficiente di determinazione (R2) della retta di regressione. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
NOTA: Per avere risultati affidabili da analizzare statisticamente, replicare l'intera procedura di prova di fusione e l'elaborazione delle immagini almeno tre volte per ogni campione.
Come esempio dei risultati CVS proposti, vengono mostrati i risultati delle analisi di fusione per tre diverse formulazioni di gelato, confrontati con i dati ottenuti dal metodo gravimetrico. In particolare, è stato studiato il comportamento di fusione dei gelati realizzati con diversi dolcificanti (ad esempio, saccarosio, sucromalt ed eritritolo).
La Tabella 1 e la Figura 5A mostrano i risultati dell'indice di ritenzione della forma (Rt/R0) per i tre campioni di gelato durante lo scioglimento. Una ritenzione di forma simile è stata osservata per tutti i campioni fino a 45 minuti; quindi, il campione realizzato con saccarosio ha perso la sua forma più velocemente rispetto agli altri prodotti, risultando in un Rt/R0 significativamente più basso secondo l'analisi della varianza a una via (ANOVA), seguita dal test della differenza meno significativa (LSD) (p < 0,05). Solo il campione contenente eritritolo ha mantenuto la sua forma fino alla fine della prova, fornendo valori misurabili di Rt/R0.
| SACCAROSIO | SUCROMALTO | ERITRITOLO | ||||
| Tempo (min) | At/A0 | S.D. | At/A0 | S.D. | At/A0 | S.D. |
| 0 | 1.00 | - | 1.00 | - | 1.00 | - |
| 15 | Il 0,91 | 0.01 | Il 0,93 | 0.02 | Il 0,92 | 0.04 |
| 30 | Il 0,76 | 0.04 | Il 0,82 | 0.02 | Il 0,84 | 0.04 |
| 45 | Il 0,56 | 0.04 | 0,66ab | 0.02 | 0,74miliardi | 0.03 |
| 60 | Il 0,32 | 0.01 | 0,46miliardi | 0.02 | 0,62c | 0.01 |
| 75 | Il 0,13 | 0.01 | 0,24miliardi | 0.02 | 0,52c | 0.02 |
| 90 | n.d. | - | n.d. | - | 0.40 | 0.01 |
| n.d., non rilevabile | ||||||
Tabella 1: Valori medi e di deviazione standard degli indici di mantenimento della forma per i tre campioni di gelato prodotti con diversi edulcoranti. Lettere minuscole diverse nella stessa riga indicano valori medi significativamente diversi (p < 0,05).

Figura 5: Curve di forma e di ritenzione dell'area per i tre campioni di gelato prodotti con diversi edulcoranti. (A) Curve di forma e (B) di ritenzione dell'area. La linea rosa rappresenta il campione di saccarosio, considerato come riferimento; La linea gialla rappresenta il campione di sucromalto e la linea blu rappresenta il campione di eritritolo. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Il campione con eritritolo ha anche mostrato un tasso di fusione inferiore, come evidenziato dagli indici di fusione At/A0 (Tabella 2 e Figura 5B). A partire da 45 minuti, il campione di eritritolo ha mostrato la ritenzione di area significativamente più alta (p < 0,05), seguito dai gelati contenenti sucromalto e saccarosio, rispettivamente.
| SACCAROSIO | SUCROMALTO | ERITRITOLO | ||||
| Tempo (min) | Rt/R0 | S.D. | Rt/R0 | S.D. | Rt/R0 | S.D. |
| 0 | 1.00 | - | 1.00 | - | 1.00 | - |
| 15 | Il 0,98 | 0.04 | Il 0,97 | 0.01 | Il 0,93 | 0.02 |
| 30 | Il 0,94 | 0.05 | Il 0,94 | 0.02 | Il 0,89 | 0.02 |
| 45 | Il 0,80 | 0.03 | Il 0,89 | 0.02 | Il 0,84 | 0.02 |
| 60 | Il 0,64 | 0.04 | 0,78miliardi | 0.01 | 0,76miliardi | 0.03 |
| 75 | Il 0,54 | 0.03 | Il 0,65 | 0.01 | Il 0,60 | 0.07 |
| 90 | n.d. | - | n.d. | - | 0.45 | 0.06 |
| n.d., non rilevabile | ||||||
Tabella 2: Valori medi e di deviazione standard degli indici di ritenzione della superficie per i tre campioni di gelato prodotti con diversi edulcoranti. Lettere minuscole diverse nella stessa riga indicano valori medi significativamente diversi (p < 0,05).
I risultati sono stati confermati anche dall'analisi gravimetrica, i cui dati sono riportati in Tabella 3 in termini di tempo di inizio della fusione (tS) e velocità di fusione (grammi/minuto). Tuttavia, in questo caso, non sono state riscontrate differenze significative applicando l'ANOVA (p > 0,05).
| SACCAROSIO | SUCROMALTO | ERITRITOLO | ||||
| Significare | S.D. | Significare | S.D. | Significare | S.D. | |
| ts (min) | Il 15.3 | 1.4 | Il 16,4 | 1.4 | Il 17.2 | 2.6 |
| Velocità di fusione (g/min) | Il 2.67 | 0.26 | Il 2.29 | 0.09 | Il 1.96 | 0.41 |
Tabella 3: Valori medi e di deviazione standard degli indici di fusione calcolati con i metodi gravimetrici per i tre campioni di gelato prodotti con edulcoranti diversi. ts, tempo di inizio fusione. Lettere minuscole diverse nella stessa riga indicano valori medi significativamente diversi (p < 0,05).
La Figura 6 mostra alcune immagini elaborate (fase 2.1) acquisite durante le prove di fusione (fase 1.3) dei tre campioni di gelato; È possibile notare il buon mantenimento della forma di tutti i campioni e la più bassa velocità di fusione del gelato a base di eritritolo, che non si è completamente sciolto dopo 90 minuti.

Figura 6: Fusione dei tre campioni di gelato. Immagini acquisite ogni 15 minuti durante la fusione dei tre campioni di gelato prodotti con diversi dolcificanti. Immagini elaborate dei tre campioni di gelato durante lo scioglimento. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Il CVS proposto consente il calcolo della forma e degli indici di ritenzione dell'area dei campioni di gelato durante la fusione, oltre a visualizzare il processo di fusione. Può essere accoppiato al metodo gravimetrico tradizionale applicato per valutare il comportamento di fusione del gelato5, per ottenere risultati legati all'aspetto del gelato. Questo è molto importante perché i consumatori ne valutano la qualità anche in base all'aspetto visivo del prodotto, e la capacità di mantenere la forma durante la fusione è legata alla composizione e alla struttura del gelato 1,3. L'applicazione di questo sistema nelle industrie alimentari può migliorare il controllo della qualità e la ricerca e lo sviluppo di nuove formulazioni.
L'esempio dei risultati ottenuti per la fusione di tre campioni di gelato diversi per i dolcificanti utilizzati ha dimostrato che il CVS proposto è sensibile alle diverse composizioni (Tabella 1 e Tabella 2), anche più del metodo gravimetrico, che non è stato in grado di evidenziare differenze significative tra i campioni (Tabella 3). La sensibilità dell'indice di mantenimento della forma alla formulazione del gelato è stata dimostrata anche nei nostri precedenti lavori 13,14,15,16. A causa dell'elevata sensibilità del metodo proposto, può persino sostituire la procedura gravimetrica.
Oltre alla preparazione del campione di gelato, le fasi più critiche del CVS sviluppato sono legate a una buona acquisizione e segmentazione delle immagini7. Riferire i dati Rt e At ai valori iniziali calcolati al tempo 0 previene possibili risultati fuorvianti dovuti a diversi esperimenti impostati tra le repliche. Tuttavia, gli errori di parallasse durante l'acquisizione delle immagini potrebbero comportare una sovrastima dell'area del campione durante la fusione, soprattutto se le immagini raccolte in una singola prova non sono coerenti a causa di un cambiamento di posizione della fotocamera da un'acquisizione all'altra. Pertanto, è necessario prestare grande attenzione all'impostazione della procedura di acquisizione dell'immagine, assicurandosi che lo schermo in rete metallica con il campione sulla parte superiore sia perfettamente allineato con l'obiettivo della telecamera e definendo e fissando attentamente la posizione della telecamera davanti all'armadio termostatico. Allo stesso modo, una cattiva segmentazione dell'immagine può portare a sovra o sottostimare l'area del gelato, ma anche H e W, con conseguenti indici di ritenzione della forma privi di significato. In questo caso, la maggiore fonte di errore è rappresentata da eventuali punte sul bordo della porzione di gelato posta sulla rete metallica, o da bolle che compaiono sulla superficie del gelato durante la fusione (Figura 7), che devono essere rimosse dalla forma brillante prima di misurare l'area della scatola e la scatola L e A. Questo problema può essere risolto utilizzando la funzione Dividi oggetto del software di analisi delle immagini. Uno sfondo ad alto contrasto è utile anche per una migliore segmentazione dell'immagine7. Il colore di sfondo deve essere scelto in base al colore del campione di gelato e un'elevata saturazione del colore è desiderabile per un migliore contrasto.

Figura 7: Possibili fonti di errore nella segmentazione della forma del gelato. Le frecce rosse indicano possibili punte e bolle sulla forma del gelato che possono portare a un calcolo errato di area, altezza e larghezza. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Se le immagini sono ben raccolte ed elaborate, il CVS è ancora più sensibile e preciso della metodologia gravimetrica. Infatti, negli esempi mostrati, i coefficienti di variazione per le analisi gravimetriche variavano tra il 4% e il 20%, rendendo tutti i dati medi non significativamente diversi (ANOVA, p > 0,05). Al contrario, per gli indici CVS, i valori del coefficiente di variazione variavano dallo 0,1% al 13%, evidenziando differenze significative tra i tre campioni di gelato durante la fusione (Tabella 1 e Tabella 2). La riduzione della velocità di fusione causata dall'eritritolo è probabilmente correlata alla formazione di cristalli di zucchero amorfi durante il congelamento del gelato e alla minore solubilità di questo dolcificante rispetto al saccarosio e al sucromalto, che rappresenta una maggiore quantità di acqua congelata nel prodotto finale13. Altre applicazioni di successo del CVS qui proposte possono essere trovate nei nostri studi precedenti 13,14,15,16.
Quando si ottiene una buona standardizzazione della procedura di elaborazione delle immagini, l'elaborazione automatica delle immagini può essere impostata utilizzando la funzione Macro-Recording del software di analisi delle immagini, rendendo così il processo di elaborazione molto più veloce. Naturalmente, è sempre necessaria un'accurata revisione dei dati da parte dell'operatore per evitare artefatti e dati errati. Inoltre, l'elaborazione delle curve di forma e di ritenzione dell'area può essere eseguita per calcolare i parametri cinetici e sostituire il metodo gravimetrico.
Il protocollo può essere applicato anche ad altri prodotti alimentari per i quali la velocità di fusione e l'indice di mantenimento della forma sono importanti, come mousse e schiume (ad esempio, panna di latte montato e albume d'uovo). Il punto più importante è l'auto-portanza dei prodotti, mentre la temperatura durante le prove di fusione può essere adattata al prodotto specifico.
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Armadio | Cavallo s.r.l. | FTX700 | Ubicazione per la prova di fusione |
| Fotocamera digitale | Sony Group Corp | DSC-S650 | |
| Bilancia digitale | Gibertini Elettronica | EU-C 4002 LCD | |
| ImagePro Plus 7.0 | Media Cybernetics, Inc | N/A Software | di elaborazione analisi delle immagini |
| Microsoft Excel | Microsoft | N/A | Elaborazione dati e grafica |
| Scalecom | Gibertini Elettronica | N/A Bilancia | digitale acquisizione |
| software Treppiede | Manfratto | #055 |
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