Articolo metodologico

Una tecnica modificata per indurre la sindrome dell'ovaio policistico nei topi

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DOI:

10.3791/66637

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5 luglio 2024

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1Obstetrics and Gynecology Hospital, Institute of Reproduction and Development, Fudan University, 2Women's Hospital, Key Laboratory of Reproductive Genetics (Ministry of Education), Zhejiang University School of Medicine, 3International Institutes of Medicine, the Fourth Affiliated Hospital, Zhejiang University School of Medicine, 4Research Units of Embryo Original Diseases, Chinese Academy of Medical Sciences (No. 2019RU056), 5State Key Laboratory of Cardiology

* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

Questo protocollo introduce una tecnica per indurre modelli di sindrome dell'ovaio policistico (PCOS) nei topi attraverso il rilascio controllato di letrozolo utilizzando mini-pompe. In anestesia adeguata, la mini-pompa è stata impiantata per via sottocutanea e la PCOS è stata indotta con successo nei topi dopo un certo periodo di rilascio della mini-pompa.

Abstract

La sindrome dell'ovaio policistico (PCOS) è una delle principali cause di infertilità nelle donne. I modelli animali sono ampiamente utilizzati per studiare i meccanismi eziologici della PCOS e per lo sviluppo di farmaci correlati. I modelli murini indotti dal letrozolo replicano i fenotipi metabolici e riproduttivi dei pazienti con PCOS. Il metodo tradizionale di trattamento con letrozolo nei topi PCOS richiede un dosaggio giornaliero per un certo periodo, che può essere laborioso e causare uno stress significativo ai topi. Questo studio descrive un metodo semplice ed efficace per indurre la PCOS nei topi impiantando una mini-pompa controllata a rilascio di letrozolo. Una mini-pompa in grado di rilasciare in modo stabile e continuo una quantità quantitativa di letrozolo è stata fabbricata e impiantata per via sottocutanea in topi sotto anestesia. Questo studio ha dimostrato che il modello murino ha imitato con successo le caratteristiche della PCOS dopo l'impianto della mini-pompa di letrozolo. I materiali e le attrezzature utilizzate in questo studio sono prontamente disponibili per la maggior parte dei laboratori e non richiedono particolari personalizzazioni. Nel complesso, questo articolo fornisce un metodo unico e facile da eseguire per indurre la PCOS nei topi.

Introduzione

La sindrome dell'ovaio policistico (PCOS) è una delle condizioni più comuni tra le donne in età riproduttiva1. Colpisce fino al 18% delle donne a livello globale ed è la principale causa di infertilità femminile in tutto il mondo 2,3. La PCOS è caratterizzata da una serie di anomalie riproduttive correlate, tra cui la secrezione disturbata di gonadotropine, l'anovulazione cronica, l'aumento della produzione di androgeni e la morfologia dell'ovaio policistico4. Oltre ai disturbi ginecologici, la PCOS aumenta anche il rischio di malattie cardiovascolari 5,6. Nonostante decenni di ricerca, l'eziologia della PCOS rimane poco chiara 7,8.

Per ottenere una migliore comprensione della patogenesi della PCOS e sviluppare nuove terapie, la creazione di modelli animali che imitino da vicino la fisiologia umana è di enorme importanza9. I modelli di roditori attualmente riportati di PCOS includono quelli indotti da trattamenti con testosterone, letrozolo ed estradiolo valerato, tra gli altri. Il testosterone induce iperandrogenemia ed è più comunemente usato come induttore della PCOS nei ratti10. Il DHEA è stato utilizzato per indurre la PCOS nei roditori, aumentando i livelli di testosterone, i rapporti LH/FSH (ormone luteinizzante/ormone follicolo-stimolante) e causando cicli estrali irregolari11. L'estradiolo valerato (EV) è un estrogeno a lunga durata d'azione e gli studi che utilizzano questo metodo mostrano che i livelli di ormoni steroidei sessuali e gonadotropine variano a seconda della dose di EV somministrata 12,13,14. Il letrozolo è un inibitore non steroideo dell'aromatasi15. Il trattamento con letrozolo induce l'estro non ciclico, aumenta il peso ovarico, il peso corporeo, ingrandisce gli adipociti, massimizza lo sviluppo dei follicoli ed eleva i livelli di testosterone nei ratti16,17. I topi trattati con letrozolo mostrano un aumento del numero di follicoli sinusali e cisti emorragiche, nonché elevate concentrazioni di LH, FSH, estradiolo e progesterone18,19.

Attualmente, i principali metodi per la modellazione della PCOS indotta da letrozolo prevedono la somministrazione orale e l'iniezione sottocutanea, entrambe le quali richiedono dosi giornaliere ripetute 20,21,22. Questi metodi richiedono molto tempo e lavoro e la somministrazione ripetitiva probabilmente causa uno stress significativo agli animali23. Sebbene alcuni studi utilizzino pellet di letrozolo24,25, questi prodotti devono essere personalizzati e sono costosi. Questo rapporto descrive una tecnica per indurre la PCOS nei topi utilizzando mini-pompe. Questo metodo è semplice, fa risparmiare tempo e utilizza strumenti e attrezzature chirurgiche prontamente disponibili nella maggior parte dei laboratori.

Protocollo

Tutti i protocolli sperimentali sugli animali in questo studio sono stati approvati dal Comitato Etico Animale dell'Università di Fudan. Qui sono stati utilizzati topi femmina C57BL/6J, di 4 settimane. I dettagli degli animali, dei reagenti e delle attrezzature utilizzate in questo studio sono elencati nella Tabella dei materiali.

1. Preparazione della mini-pompa

  1. Prendere la polvere di letrozolo (50 mg) conservata nel flacone originale, centrifugare la polvere di letrozolo nel flacone a 300 x g per 5 s (a temperatura ambiente), quindi aprire il tappo.
  2. Aggiungere lentamente 625 μl di DMSO alla polvere di letrozolo con una pipetta e mescolare bene per ottenere una soluzione madre a una concentrazione di 8 mg/100 μl, per un totale di 625 μl.
    NOTA: Se si utilizza una confezione diversa di polvere di letrozolo, calcolare in anticipo il volume richiesto di DMSO per configurare la soluzione madre. La polvere di letrozolo, il DMSO e altri composti correlati devono essere di grado sterile. I puntali delle pipette, le provette e altri articoli correlati devono essere sterili o sterilizzati prima dell'uso.
  3. Contare il numero di topi richiesti in base al disegno sperimentale.
  4. Prelevare la quantità totale di soluzione madre di letrozolo necessaria con una pipetta, a seconda del numero di topi richiesti, e iniettarla lentamente nella provetta da centrifuga.
    NOTA: I topi di 4 settimane per un'esposizione di 8 settimane sono stati selezionati per indurre il modello di topi PCOS. La dose totale di letrozolo è di 8 mg per ogni topo, che richiede l'impianto di due pompe consecutive (una pompa viene rilasciata per 4 settimane), cioè 4 mg/4 settimane per pompa. Come accennato nella fase 1.2, la concentrazione della soluzione madre di letrozolo è di 8 mg/100 μL. Per preparare le pompe, sono necessari 50 μL di soluzione madre per ciascuna pompa, come calcolato di seguito: un totale di 4 mg di letrozolo diviso per 8 mg/100 μL.
  5. Aspirare una quantità uguale di PEG300, aggiungerla alla soluzione di letrozolo e mescolare bene (può essere agitata in modo appropriato).
  6. Preparare la soluzione del veicolo di controllo per il gruppo di controllo (50 μl di DMSO + 50 μl di PEG300 per ogni pompa senza letrozolo).
  7. Preparare un numero adeguato di provette da centrifuga sterili in base al numero di pompe richieste; è necessario preparare una provetta da centrifuga da 15 mL per ogni pompa.
  8. Aspirare la soluzione fisiologica con una siringa e aggiungere 5 mL di soluzione fisiologica a ciascuna provetta da centrifuga. Quindi, tappare le provette da centrifuga e posizionarle su una griglia per provette per un ulteriore utilizzo.
  9. Indossa un nuovo paio di guanti sterili, estrai le mini-pompe nella quantità desiderata e posizionale su un piano di lavoro o un contenitore pulito e sterile.
  10. Pizzicare delicatamente il tappo che corrisponde al corpo della pompa con il pollice e l'indice e tenere il corpo della pompa con l'altra mano.
  11. Colpire lentamente più volte la porta di riempimento della pompa con il tubo sottile attaccato al tappo (Figura 1B).
    NOTA: Se non è ostruito, il fluido potrebbe non fluire liberamente nel tubo dopo il riempimento.
  12. Prendi l'ago che corrisponde alla pompa e una siringa sterile da 1 ml. Collegare l'ago alla siringa e stringerlo (Figura 1C).
  13. Aspirare con cautela e lentamente la soluzione finale di letrozolo configurata sopra con la siringa appena assemblata (Figura 1D).
    NOTA: L'aspirazione della soluzione di letrozolo deve essere eseguita lentamente e in modo uniforme. L'aspirazione rapida può generare bolle d'aria, che possono influenzare la successiva iniezione della soluzione farmacologica.
  14. Iniettare la soluzione di letrozolo nella minipompa.
    1. Pizzicare con cautela una mini-pompa con una mano in modo che sia in posizione verticale e, con l'altra mano, tenere la suddetta siringa da 1 ml e inserirla lentamente nella parte inferiore della pompa (Figura 1E).
      NOTA: Se l'ago non è inserito nella parte inferiore della pompa, il liquido nella pompa può facilmente gorgogliare durante l'iniezione, il che influenzerà il successivo rilascio del farmaco da parte della pompa.
    2. Quindi iniettare lentamente la soluzione configurata; L'iniezione può essere notata quando l'apertura della pompa bolle leggermente.
    3. Iniettare più lentamente quando il volume di iniezione si avvicina a 90 μL. Una volta che la pompa è completamente piena (circa 100 μL), prelevare la siringa.
    4. Inserire con cautela il tappo nel corpo della pompa e farlo serrare; A questo punto, una piccola quantità di soluzione fuoriuscirà. Asciugalo accuratamente.
  15. Prendere la pompa caricata con il farmaco, con l'uscita rivolta verso l'alto (l'estremità con il tappo), prendere la provetta da centrifuga precedentemente preparata e immergere completamente la pompa in soluzione fisiologica sterile (Figura 1F). Quindi, tappare la provetta da centrifuga e posizionarla sulla griglia per provette.
    NOTA: Fare attenzione a non contaminare la pompa durante tutto il processo.
  16. Dopo aver realizzato tutte le minipompe, posizionare tutte le provette da centrifuga in un termostato a 37 °C per 48 ore.

2. Preparazione per l'operazione e anestesia

  1. Prepara e sterilizza tutti gli strumenti necessari il giorno dell'intervento, tra cui pinze, emostatici, forbici chirurgiche, portaaghi e suture chirurgiche riassorbibili 4-0.
  2. Prima di utilizzare la macchina per anestesia isoflurano (Figura 2B), controllare attentamente se il collegamento della tubazione è corretto e assicurarsi che la tubazione sia intatta e non perda.
  3. Svitare il tappo di chiusura dell'otturazione sull'evaporatore dell'anestesia, quindi aggiungere lentamente l'anestetico.
  4. Mantenere il livello di anestetico tra i limiti superiore e inferiore indicati sulla macchina per anestesia.
  5. Convertire l'interruttore della valvola a tre vie per garantire che il flusso d'aria dall'evaporatore della macchina per anestesia sia collegato alla scatola di induzione dell'anestesia.
  6. Aprire la pompa dell'aria e l'evaporatore, quindi regolare la concentrazione di isoflurano per l'induzione dell'anestesia (generalmente 3%-4%).
  7. Attendere circa 1 minuto fino a quando l'anestetico riempie la scatola di induzione, quindi inserire il mouse nella scatola di induzione e attendere fino alla completa anestesia (questo processo richiede circa 2-3 minuti).
  8. Verificare che i topi siano adeguatamente anestetizzati inclinando delicatamente la scatola. Se i topi sono girati e non mostrano segni di ritorno alla posizione sdraiata, viene indotta l'anestesia.

3. Impianto della minipompa per letrozolo

  1. Indossare una maschera chirurgica e guanti sterili.
  2. Rimuovere i topi pre-anestetizzati dalla scatola di induzione e applicare la crema depilatoria sul retro dei topi, quindi attendere 1 minuto. Pulire delicatamente la crema depilatoria e i peli con una garza bagnata.
  3. Allo stesso tempo, modificare l'interruttore della valvola a tre vie per assicurarsi che il flusso d'aria dall'evaporatore della macchina per anestesia sia collegato alla maschera per anestesia e regolare la concentrazione di mantenimento (generalmente 2%).
  4. Dopo la depilazione, tenere il topo con la mano dominante e posizionare la testa/naso nella maschera per anestesia.
  5. Controllare la profondità dell'anestesia testando il riflesso di ritiro del pedale.
    NOTA: Tutte le procedure che prevedono l'anestesia devono essere eseguite utilizzando filtri antigas dotati di pastiglie di carbone attivo e la procedura deve essere eseguita in una cappa aspirante.
  6. Fissare il mouse in posizione prona sulla piastra operatoria e applicare il lubrificante per gli occhi su entrambi gli occhi.
  7. Applicare tamponi di iodio povidone tre volte sulla pelle esposta (Figura 2C). Quindi, iniettare meloxicam per via sottocutanea alla dose di 2 mg/kg.
  8. Confermare nuovamente la profondità dell'anestesia con un pizzico di punta. Quindi, sulla linea mediana della parte posteriore del collo, privilegiando la pelle sul lato glabro, prelevare la pelle con una pinza e praticare un'incisione di circa 0,5 cm lateralmente con un bisturi o forbici chirurgiche (Figura 2D).
  9. Quindi aprire l'epidermide sotto l'incisione e accedervi con un emostatico o un portaaghi per liberare la pelle, facendo spazio a una mini-pompa (a circa 2 cm di distanza dall'incisione) (Figura 2E).
  10. Estrarre la pompa dalla soluzione fisiologica nella provetta da centrifuga con una pinza sterile, con l'estremità aperta della pompa rivolta verso il basso, e prepararsi a inserire la pompa per via sottocutanea nei topi (Figura 2F).
  11. Bloccare un lato dell'incisione cutanea con una pinza e spingere la pompa nello spazio sottocutaneo. Non ci deve essere resistenza quando si entra nella pompa. Una volta all'interno, utilizzare le dita per premere leggermente e delicatamente la pompa verso l'interno il più possibile (Figura 1G).
  12. Suturare accuratamente il sito di incisione utilizzando suture chirurgiche 4-0 (Figura 2H).
    NOTA: Fare attenzione a non danneggiare il corpo della pompa sottocutanea durante la sutura.
  13. Dopo la sutura, disinfettare due volte la pelle nel sito chirurgico con tamponi iodophor.

4. Recupero degli animali

  1. Dopo l'intervento chirurgico, trasferire delicatamente i topi dal materasso utilizzato durante l'anestesia a un materasso asciutto e pulito. Assicurati che i topi si trovino in un ambiente caldo e silenzioso.
  2. Monitora attentamente le condizioni dei topi, come la profondità e la frequenza dei loro respiri.
  3. Osserva il comportamento dei topi mentre la loro mobilità inizia a tornare. Infine, assicurati che possano stare in piedi e camminare senza comportamenti anomali evidenti come vertigini o movimenti scoordinati.
  4. Dopo che i topi si sono ripresi, trasferiscili delicatamente in gabbie pre-preparate. Metti la gelatina sterile e il cibo sul fondo della gabbia per far mangiare i topi.
    NOTA: L'allungamento del sito chirurgico può impedire ai topi di bere e mangiare facilmente durante il primo periodo postoperatorio, quindi posiziona gelatina e cibo sul fondo della gabbia.
  5. Iniettare meloxicam per via sottocutanea alla dose di 2 mg/kg (ogni 24 ore per i primi 3 giorni dopo l'intervento chirurgico). Dopo 8 settimane di trattamento con letrozolo (cioè due impianti consecutivi di mini-pompa), testare i modelli di topi.

Risultati

Il protocollo sperimentale e alcuni passaggi critici sono mostrati in Figura 1 e Figura 2. I livelli sierici di testosterone sono mostrati nella Figura 3A. I topi trattati con mini-pompa di letrozolo (di seguito denominati topi LTZ) hanno mostrato livelli sierici di testosterone significativamente elevati rispetto ai topi di controllo femmine. Nel frattempo, l'analisi istologica delle ovaie ha mostrato che i topi LTZ mostravano ovaie policistiche con una significativa riduzione del numero di corpi lutei (Figura 3B, C), indicando l'anovulazione. Inoltre, i topi LTZ hanno mostrato una significativa aciclicità estrale rispetto alle femmine di topo di controllo (Figura 3D). La valutazione del peso corporeo ha rivelato che i topi LTZ erano più pesanti dei topi di controllo (Figura 3E). I risultati dei test di tolleranza al glucosio e i calcoli dell'AUC hanno dimostrato che i topi LTZ hanno sviluppato intolleranza al glucosio rispetto ai topi di controllo (Figura 3F, G). Il test dei lipidi sierici ha indicato che i topi LTZ hanno mostrato un cambiamento nel profilo lipidico sierico rispetto ai topi di controllo (Figura 3H).

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Figura 1: Materiali e passaggi critici per la preparazione della minipompa. (A) Illustrazione schematica che mostra la preparazione delle mini-pompe per letrozolo. (B) La mini-pompa è stata sbloccata da un tubo sottile attaccato al tappo. (C) Un ago corrispondente alla pompa è stato collegato all'estremità dell'ago di una siringa da 1 ml. (D) La soluzione di letrozolo è stata aspirata lentamente senza gorgogliare. (E) La soluzione di letrozolo è stata iniettata lentamente dal fondo della pompa. (F) Le pompe piene sono state tappate e conservate in soluzione salina con l'estremità del tappo rivolta verso l'alto. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

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Figura 2: Materiali e passaggi critici dell'impianto delle pompe nei topi per l'induzione della PCOS. (A) Illustrazione schematica che mostra l'impianto di mini-pompe per letrozolo. (B) Apparecchiature per anestesia: pompa dell'aria, macchina per anestesia, scatola di induzione e filtri per gas. (C) I topi anestetizzati sono stati riparati e sterilizzati. (D) Un taglio di 0,5 cm vicino alla linea mediana dorsale. (E) La pelle è stata liberata per fare spazio all'inserimento della mini-pompa. (F) Una mini-pompa è stata estratta dalla soluzione salina con una pinza pulita e sterile. (G) La mini-pompa è stata impiantata sotto la pelle precedentemente liberata. (H) La pelle è stata chiusa con suture 4-0. (I) Il topo impiantato è stato lasciato guarire. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

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Figura 3: Caratterizzazione dei fenotipi riproduttivi e metabolici nei modelli murini impiantati con mini-pompa di letrozolo. (A) I livelli plasmatici di testosterone nei topi trattati con LTZ erano significativamente più alti di quelli nei topi di controllo (n = 9 animali per gruppo). (B) Analisi istologica delle ovaie. La freccia indica i corpi lutei. Barra della scala: 1 mm. (C) Numero di corpi lutei nei gruppi indicati (n = 9 animali per gruppo). (D) I topi LTZ hanno mostrato aciclicità rispetto ai topi femmina di controllo. (E) Il peso corporeo nei gruppi indicati (n = 10 animali per gruppo). (F,G) Risultati del test di tolleranza al glucosio nei gruppi indicati (n = 8 animali per gruppo). (H) Livelli sierici di lipidi nei gruppi indicati (n = 8 animali per gruppo). I dati sono espressi come media ± SEM. AUC indica l'area sotto la curva; E, stadio di estro; LDL-C, colesterolo lipoproteico a bassa densità; HDL-C, colesterolo lipoproteico ad alta densità; P, stadio di proestro; M/D, stadio di metestro/diestro; TC, colesterolo totale; e TG, trigliceridi. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

Discussione

Questo rapporto dimostra un semplice protocollo per indurre la PCOS nei topi utilizzando materiali facilmente accessibili. Il modello di PCOS murino è essenziale per esplorare i meccanismi della PCOS e lo screening dei farmaci26. Tra i metodi disponibili per indurre i modelli di PCOS nei topi, l'induzione del letrozolo è uno dei più comunemente usati. L'uso del letrozolo può sviluppare e mantenere una condizione iperandrogena inibendo la conversione del testosterone in estradiolo o aumentando la sintesi del testosterone27. Il modello murino indotto da letrozolo mostra somiglianze metaboliche e riproduttive con i pazienti con PCOS28. Tuttavia, le tecniche convenzionali di trattamento con letrozolo nel modello murino di PCOS richiedono l'alimentazione orale giornaliera o l'iniezione di letrozolo nei topi per 21 giorni o più29,30. L'allocazione continua a lungo termine dei farmaci con dosaggio temporizzato di alimentazione o iniezione richiede tempo e laboriosità e la somministrazione ripetuta di farmaci può essere notoriamente stressante per i topi, introducendo fattori non sperimentali che influenzano i risultati del modello23,31. Sebbene alcuni studi sulla PCOS di ratto e topo utilizzino pellet di letrozolo impiantabili28,32, i prodotti utilizzati devono essere personalizzati e potrebbero non essere disponibili in modo tempestivo. L'attuale studio propone una tecnica di impianto di mini-pompe di letrozolo per indurre la PCOS nei topi. Il metodo è semplice, fa risparmiare tempo e utilizza strumenti e attrezzature chirurgiche prontamente disponibili nella maggior parte dei laboratori.

Passaggi critici e risoluzione dei problemi
È essenziale notare alcuni passaggi chiave per ottenere risultati ottimali quando si pratica questo metodo. Innanzitutto, sbloccare la pompa utilizzando il tubo sottile attaccato al tappo corrispondente prima dell'uso. L'esperienza precedente indica che una pompa intasata può interrompere il carico e il rilascio del farmaco. Inoltre, ogni fase della configurazione della soluzione di letrozolo deve essere eseguita con cura per garantire che la soluzione finale sia esattamente alla concentrazione desiderata. Durante tutto il processo di assemblaggio della pompa, è necessario prestare attenzione per prevenire la contaminazione. Inoltre, sono necessari attenti aggiustamenti prima e durante l'anestesia per garantire un'anestesia adeguata per i topi sperimentali e per ridurre al minimo gli effetti avversi dell'anestesia sui topi operati.

Vantaggi e limiti
Il metodo descritto in questo studio offre diversi vantaggi: (1) consente di risparmiare tempo e consente il rilascio continuo di letrozolo dopo l'impianto della pompa; (2) evita lo stress della somministrazione ripetuta di farmaci su animali da esperimento e minimizza l'influenza di fattori non sperimentali sui risultati della modellazione; (3) i materiali, gli strumenti chirurgici e le attrezzature necessari sono comunemente disponibili nella maggior parte dei laboratori; (4) il metodo induce efficacemente fenotipi di PCOS nei topi. Tuttavia, questo metodo ha anche dei limiti: (1) l'anestesia e la procedura chirurgica necessarie per l'impianto della mini-pompa possono causare irritazione ai topi e la presenza della mini-pompa sotto la pelle potrebbe disturbare la loro attività; (2) L'efficacia di questo metodo di modellazione può essere influenzata dalla contaminazione o dal danneggiamento del corpo pompa durante il processo. Sulla base dell'esperienza degli autori, l'esecuzione meticolosa dei passaggi del protocollo può portare a un alto tasso di successo nell'induzione del modello murino PCOS.

Dichiarazioni

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Ringraziamenti

Lo studio è stato sostenuto dal National Key Research and Development Program of China (sovvenzioni 2021YFC2700701), dalla National Natural Science Foundation of China (sovvenzioni 82088102, 82071731, 82171613, 8227034, 81601238), dal Fondo per l'innovazione dell'Accademia cinese delle scienze mediche per le scienze mediche (sovvenzione 2019-I2M-5-064), dalla Commissione per la scienza e la tecnologia della municipalità di Shanghai (sovvenzioni 21Y11907600), dalla Commissione municipale di Shanghai per la salute e la pianificazione familiare (sovvenzione 20215Y0216), Programma di innovazione collaborativa della Commissione sanitaria municipale di Shanghai (sovvenzione 2020CXJQ01), Piano di ricerca clinica del Centro di sviluppo ospedaliero di Shanghai (sovvenzione SHDC2020CR1008A), Centro di ricerca clinica di Shanghai per le malattie ginecologiche (sovvenzione 22MC1940200), Centro di ricerca sulle malattie del sistema urogenitale di Shanghai (sovvenzione 2022ZZ01012), Base di ricerca scientifica delle frontiere di Shanghai per la riproduzione e lo sviluppo, Commissione per la scienza e la tecnologia del comune di Quzhou (sovvenzione 2022K54), Progetto Open Fund del Key Laboratory of Reproductive Genetics, Ministero dell'Istruzione, Università di Zhejiang (sovvenzione KY2022035) e Open Fund Project dell'Accademia delle Scienze Mediche del Guangdong (sovvenzione YKY-KF202202).

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
SiringaBofeng BiotechBD3008411ML (sterile)
Provetta per centrifugazioneBiological Hope1850-K15ML (sterile)
PipettaEppendorf3123000268-A100μ L-1000μ L (sterile)
PipettaTopPette701010100810μ L-100μ L (sterile)
Letrozolo in polvereSigmaL6545-50MGFarmaci ad azione primaria (sterile)
PEG(Poli(glicole etilenico))SolarbioP8250Utilizzato per la dissoluzione (sterile)
Soluzione fisiologica salina sterileBiosharpBL158A
Pompe osmotiche Pompe osmoticheALZET1004Stoccaggio e rilascio prolungato del letrozolo (sterile)
Dimetil solfossidoBiosharpBS087utilizzato per la dissoluzione (sterile)
macchina per anestesia per piccoli animaliRWD R500IPUtilizzato per l'anestesia
Isoflurano RWD20071302Utilizzato per anestesia
EmostaticiBiosharpBS-HF-S-125Forbici per strumenti chirurgici
BiosharpBS-SOR-S-100PStrumento chirurgico
Porta agoShangHaiJZJ32010Pinza per strumenti chirurgici
RWD F12028Strumento chirurgico
Ago e sutura assorbibile 4-0JINGHUANCR413Strumento chirurgico
Povidone-iodiotamponi SingleLadyGB26368-2010Disinfezione della pelle
Crema depilatoriaZIKER BIOTECHNOLOGYZK-L2701 Depilante per animali da laboratorio
Guanti in nitrileBiosharpBC040-LUtilizzato per operazioni asettiche
Garza sterileZHENDEBA69087Utilizzato per la pulizia di liquidi
C57BL / 6J TopiShanghai Model Organisms CenterN / AEtà: 4 settimane
Lubrificante per occhi di animali domesticiBAITESHF021153Utilizzato per il lubrificante per gli occhi del topo
Iniezione di meloxicamMEIDAJIAR21064-21Utilizzato per l'analgesia del topo (sterile)

Riferimenti

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