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Articolo metodologico

Un modello di stress sociale integrato multiplo per disturbi psichiatrici in topi femmina C57BL/6J

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⸱

DOI:

10.3791/67117

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15 luglio 2025

 ,  ,  ,  , 
1Jiangsu Province Key Laboratory of Anesthesiology, Xuzhou Medical University, 2Jiangsu Province Key Laboratory of Anesthesia and Analgesia Application Technology, Xuzhou Medical University, 3NMPA Key Laboratory for Research and Evaluation of Narcotic and Psychotropic Drugs, Xuzhou Medical University

In questo articolo

Sommario

Integrando quattro fattori di stress sociale giornaliero, il presente studio descrive un modello di stress sociale integrato multiplo (MISS) per i disturbi psichiatrici nei topi femmina C57BL/6J. Dopo dieci giorni di ripetuta esposizione a MISS, i topi hanno sviluppato fenotipi depressivi e ansiosi, fornendo così un modello animale naturale basato sull'eziologia per lo studio dei disturbi psichiatrici nei soggetti di sesso femminile.

Abstract

Nonostante le donne rappresentino la maggior parte degli individui affetti da disturbi psichiatrici, gli studi preclinici si sono concentrati quasi esclusivamente su soggetti maschili, in parte a causa della mancanza di paradigmi animali femminili ideali. Lo sviluppo di modelli efficaci per lo studio dei disturbi psichiatrici nelle femmine di animale rimane una sfida scientifica di lunga data nelle scienze della vita. Un "modello di stress sociale integrato multiplo (MISS)" in topi femmina C57BL/6J è stato recentemente stabilito simulando e integrando fattori di rischio sociale che contribuiscono allo sviluppo di disturbi psichiatrici. Per stabilire questo paradigma MISS, le femmine di topo C57BL/6J sono state sottoposte casualmente ogni giorno, per dieci giorni consecutivi, a una sequenza di fattori di stress: fallimento della competizione sociale nel test della provetta, stress da sconfitta sociale vicaria modificata, stress da sovraffollamento inevitabile e conseguente isolamento sociale. Rispetto ai topi naïve, i topi esposti a MISS hanno mostrato fenotipi depressivi e ansiosi, misurati dalla preferenza per il saccarosio, dalla sospensione della coda, dal campo aperto e dai test di labirinto più elevati. Questo paradigma offre uno strumento prezioso per indagare i meccanismi neurobiologici alla base della depressione e dell'ansia nelle donne, in particolare quelle con eziologia ambigua e sintomatologia complessa.

Introduzione

Centinaia di milioni di persone vivono con disturbi psichiatrici, con l'ansia e i disturbi depressivi che sono i più comuni. Secondo l'Organizzazione Mondiale della Sanità, nel 2019 più di 280 milioni e 301 milioni di persone in tutto il mondo convivevano rispettivamente con depressione e ansia. A causa della pandemia di COVID-19, il numero di persone affette da disturbi d'ansia e depressivi è aumentato in modo significativo, rispettivamente del 26% e del 28%, in un solo anno. Tra le persone colpite, la prevalenza una tantum di disturbi psichiatrici nelle donne è quasi il doppio rispetto agli uomini2, con le donne che mostrano sintomi più gravi, maggiore compromissione funzionale, fenotipi depressivi atipici, ricadute più frequenti e minore risposta ai farmaci 3,4,5.

Sebbene le differenze di sesso in molti aspetti dei disturbi psichiatrici siano ben documentate 6,7,8, la maggior parte della ricerca preclinica si è concentrata prevalentemente su soggetti maschili, principalmente a causa della mancanza di modelli animali femminili appropriati 9,10. Di conseguenza, la patogenesi di questi disturbi nelle donne rimane poco conosciuta. Ciò sottolinea l'urgente necessità di sviluppare modelli animali che includano soggetti di sesso femminile, che faciliterebbero lo studio dei meccanismi neurobiologici alla base dei disturbi psichiatrici nelle femmine.

Un numero crescente di modelli di stress sociale per topi femmina è stato sviluppato sulla base del paradigma dello stress da sconfitta sociale ripetuta (RSDS) 11,12,13,14. Ad esempio, due modelli di RSDS recentemente stabiliti in topi femmina hanno coinvolto l'aumento artificiale dell'aggressività maschile attraverso l'applicazione di urina maschile a topi femmine e l'attivazione chemiogenetica della suddivisione ventrolaterale dell'ipotalamo ventromediale negli aggressori maschi 11,12,13. Tuttavia, è stato sostenuto che questi comportamenti aggressivi indotti non si verificano naturalmente e potrebbero non rappresentare fattori di stress rilevanti per le femmine di topo10. Inoltre, la gravidanza derivante dal comportamento di montaggio complica i successivi studi meccanicistici.

Un altro modello modificato basato su RSDS è il paradigma dello stress da sconfitta sociale vicaria, in cui le femmine di topo assistono visivamente alla sconfitta sociale inter-maschile12. Protocolli di sconfitta sociale femmina-femmina sono stati sviluppati anche in vari ceppi di roditori 14,15,16. Nonostante alcune preoccupazioni, i fattori di stress sociale utilizzati in questi ultimi due modelli sembrano essere eziologicamente più rilevanti per i disturbi psichiatrici umani14. Un modello di depressione ideale richiede validità costruttiva (eziologica), il che significa che i metodi che inducono lo stress utilizzati nel modello devono riflettere da vicino le cause reali del disturbo.

Si ritiene che l'eziologia dei disturbi psichiatrici sia multifattoriale e coinvolga fattori biologici, genetici, ambientali e psicosociali. La manipolazione di questi fattori di rischio negli animali da laboratorio è essenziale per lo sviluppo di modelli pertinenti per la ricerca meccanicistica e lo screening dei farmaci. Sia i modelli animali sociali che quelli non sociali che simulano uno o più fattori di stress possono replicare i sintomi principali e le alterazioni neurobiologiche associate ai disturbi psichiatrici umani. Ad esempio, il modello di stress cronico lieve (CMS) induce fenotipi comportamentali neuropatologici e depressivi stabili ed efficaci alternando casualmente combinazioni di più fattori di stress fisico (ad esempio, lettiera bagnata, sospensione della coda, bloccaggio della coda, digiuno)17,18,19,20,21,22,23. Questi risultati suggeriscono che la modellazione ripetuta di più fattori di rischio è una strategia praticabile per costruire paradigmi per studiare i disturbi psichiatrici. Il modello di stress cronico da sconfitta sociale (CSDS) è uno dei paradigmi più utilizzati per la depressione che simula i fattori di stress sociale 24,25,26. Sebbene questo modello sia limitato a imitare un singolo tipo di fattore di stress, la sua rilevanza eziologica ha portato a progressi significativi nella ricerca traslazionale. Ad esempio, studi basati su CSDS hanno identificato i canali del potassio (K+) sui neuroni dopaminergici nell'area tegmentale ventrale come bersagli chiave che mediano la resilienza alla depressione e hanno evidenziato gli apritori di canali K+ di tipo KCNQ, come la retigabina (ezogabina), come promettenti candidati antidepressivi sia nei topi depressivi che nei pazienti con depressione 27,28,29,30,31. Di conseguenza, diversi studi seminali hanno tentato di modificare il paradigma CSDS per modellare la depressione femminile inducendo l'aggressività diretta dalle donne11,12. Le prove di cui sopra supportano l'idea che l'integrazione di più fattori di stress sociale con l'esposizione ripetuta rappresenti una direzione importante per lo sviluppo di modelli psichiatrici nelle femmine di animali.

Nelle femmine di topi C57BL/6J, è stato recentemente sviluppato un paradigma di stress sociale integrato multiplo (MISS) di 10 giorni per modellare i disturbi psichiatrici, dimostrando validità eziologiche, facciali, costruttive e predittive affidabili32. Per stabilire il modello MISS, le femmine di topi C57BL/6J sono state sottoposte in modo casuale ogni giorno per 10 giorni consecutivi a quattro fattori di stress sequenziali: fallimento nella competizione sociale (test della provetta), stress da sconfitta sociale vicaria modificato, stress da sovraffollamento inevitabile e successivo isolamento sociale32. Questo studio fornisce un protocollo dettagliato per la modellazione del paradigma MISS.

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Protocollo

Tutte le procedure sperimentali sono state approvate dal Comitato per la cura e l'uso degli animali della Xuzhou Medical University (approvazione n. 202207S127) e sono state condotte in conformità con le linee guida del National Institutes of Health per la cura e l'uso degli animali da laboratorio. I topi femmina C57BL/6J (7-8 settimane di età per i topi soggetto; 10-14 settimane per i candidati vincitori), i topi maschi C57BL/6J (7-8 settimane di età per lo screening aggressivo del CD1) e i topi riproduttori in pensione CD1 utilizzati in questi esperimenti sono stati ottenuti da una fonte commerciale. Tutti i topi sono stati alloggiati in un ciclo luce/buio di 12 ore con cibo e acqua forniti ad libitum33. Sono state effettuate misurazioni comportamentali di base, anche se non necessariamente per ogni coorte, prima dell'inizio del paradigma MISS, per garantire che i successivi esiti comportamentali fossero attribuibili all'esposizione allo stress piuttosto che alla variabilità individuale. Una panoramica del protocollo completo è presentata nella Figura 1 e le configurazioni sperimentali completate sono mostrate nella Figura 2. I dettagli dei reagenti e delle attrezzature utilizzate in questo studio sono forniti nella Tabella dei materiali.

1. Assuefazione

  1. Assuefazione all'ambiente
    1. Designare una stanza separata esclusivamente per il protocollo MISS, mantenendo una temperatura costante (23 °C ± 2 °C), umidità (50%-60%) e intensità della luce (15-20 lux) su un ciclo luce-buio di 12 ore.
      NOTA: Se non diversamente specificato, alloggiare i topi in questa stanza durante l'intero periodo di modellazione.
    2. Preparare gabbie per topi standard (L × P × A: 37 cm × 16 cm × 12 cm) con coperchi in filo d'acciaio e lettiera di pannocchie.
    3. Utilizzare topi femmina C57BL/6J di 7-8 settimane come topi soggetto. Assegna casualmente i topi ai gruppi naïve e MISS e ospitali in cinque topi per gabbia.
      NOTA: Seleziona topi femmina con età e peso corporeo comparabili per l'esperimento.
    4. Utilizzare topi femmina C57BL/6J di età compresa tra 10 e 14 settimane come candidati per lo screening del vincitore30. Ospita questi topi in gruppi di quattro per gabbia per stabilire ranghi sociali stabili.
    5. Utilizzare topi maschi da riproduzione CD1 in pensione come candidati aggressori. Ospita i topi CD1 individualmente per stabilire la territorialità e prevenire i combattimenti. Utilizzare topi maschi C57BL/6J allevati in coorte (5 topi per gabbia, di età compresa tra 7 e 8 settimane) come intrusi per lo screening aggressivo del CD1.
    6. Lasciare che tutti i topi si abituino e si riprendano dallo stress da trasporto per 7 giorni dopo l'acquisto (Figura 1A1).
    7. Ospita tutti i topi con cibo e acqua disponibili ad libitum.
  2. Assuefazione ai tubi e manipolazione
    1. Posizionare un tubo acrilico corto (Figura 2A; 10 cm di lunghezza, 26 mm di diametro interno) in ogni gabbia di topi soggetti femmina e candidati vincitori. Lascia che i topi si acclimatino ai tubi e imparino a passarci attraverso per 3 giorni.
      NOTA: Il diametro del tubo dovrebbe essere appena sufficiente per consentire a un topo adulto di passare senza intoppi senza girarsi.
    2. Maneggiare topi soggetti femminili e candidati vincitori per 1-2 minuti/giorno per 3 giorni per ridurre lo stress correlato a sperimentatori non familiari (Figura 1A2).
    3. Alla fine del periodo di assuefazione, segna la coda di ogni topo con un pennarello a base di olio rosso o nero.
      NOTA: Controllare regolarmente le marcature e riapplicarle se necessario.

2. Formazione per la competizione in tubo, lo screening dei vincitori e lo screening degli aggressori CD1

  1. Allenamento per la competizione con tubo
    NOTA: Per i dettagli su questa procedura, fare riferimento ai precedenti rapporti32,34.
    1. Preparare topi soggetti femminili, candidate vincitrici, tubi acrilici trasparenti (Figura 2B; 30 cm di lunghezza, diametro interno 26 mm), bastoncini di plastica, etanolo al 75% e tovaglioli di carta. Pulisci il tavolo, i tubi e i bastoncini di plastica con etanolo al 75% per eliminare i segnali di odore.
    2. Afferra delicatamente la coda di ogni topo soggetto femminile o candidato vincitore e posiziona il mouse sul tavolo. Lascialo esplorare liberamente per circa 1 minuto per l'acclimatazione ambientale.
    3. Tieni il mouse per la coda e posizionalo a un'estremità del tubo.
      NOTA: Assicurarsi che la testa del mouse sia rivolta verso l'estremità del tubo, con le zampe anteriori che toccano il tavolo, per ridurre al minimo lo stress e facilitare l'ingresso.
    4. Rilascia la coda una volta che il topo entra nel tubo e lascialo passare volontariamente.
      NOTA: Utilizzare un bastoncino di plastica per toccare delicatamente la coda se il mouse si ferma o tenta di invertire la marcia.
    5. Posiziona il mouse all'estremità opposta del tubo e ripeti il passaggio 2.1.4. Contare i passaggi 2.1.3 - 2.1.5 come un ciclo.
    6. Ripetere i passaggi 2.1.3 e 2.1.5 per due cicli (Figura 1B1).
    7. Rimetti il topo nella sua gabbia di casa. Pulisci il tubo con etanolo al 75% per rimuovere odori, urina e feci.
      NOTA: Assicurarsi che il tubo sia pulito, asciutto e privo di odore residuo di alcol prima dell'uso con il mouse successivo.
    8. Ripetere i passaggi 2.1.2-2.1.7 per tutti i topi femmina per 3 giorni consecutivi, assicurandosi che ogni topo si abitui a passare attraverso il tubo.
  2. Screening dei vincitori
    NOTA: Per i dettagli su questa procedura, fare riferimento ai precedenti rapporti32,34.
    1. Prepara le candidate vincitrici, tubi (30 cm di lunghezza, 26 mm di diametro interno), bastoncini di plastica, etanolo al 75%, tovaglioli di carta e un timer. Pulire e asciugare l'attrezzatura per ridurre al minimo i segnali di odore.
    2. Prima dello screening, riaddestrare ogni topo a passare attraverso il tubo per un ciclo. Disegna una linea mediana visibile sul tubo.
    3. Tieni entrambi i topi per la coda e posizionali alle estremità opposte del tubo. Consenti loro di entrare e incontrarsi a metà, quindi rilasciali contemporaneamente e avvia il timer.
      NOTA: Usa i topi della stessa gabbia per ogni competizione.
    4. Identificare il "vincitore" come il topo che spinge l'altro fuori dal tubo; Assegnagli 1 punto. Il "perdente" riceve 0 punti.
      NOTA: Usa un bastoncino di plastica per evitare che il vincitore si ritiri. Se entrambi i topi si bloccano e non si ritirano entro 1 minuto, tocca delicatamente la coda di ciascun topo con bastoncini di plastica per sollecitare l'azione.
    5. Invertire le posizioni iniziali dei topi e ripetere i passaggi 2.2.3-2.2.4, segnando nuovamente il risultato (Figura 1B2).
    6. Rimetti entrambi i topi nella loro gabbia di casa e pulisci accuratamente il tubo con etanolo al 75%.
    7. Usa un formato round-robin per abbinare ogni topo a tutti gli altri compagni di gabbia, ripetendo i passaggi 2.2.3-2.2.5 per ogni coppia.
      NOTA: Questo approccio garantisce una classificazione completa ed equa.
    8. Classifica i topi in base ai punteggi totali. Seleziona il topo con il punteggio più alto in ogni gabbia come "vincitore" per gli esperimenti successivi.
  3. Screening dell'aggressore CD1
    NOTA: Per i dettagli su questa procedura, fare riferimento al precedente rapporto35.
    1. Prepara topi da riproduzione CD1 in pensione, topi maschi C57BL/6J (intrusi) e un timer.
    2. Posizionare un topo maschio C57BL/6J direttamente nella gabbia domestica di un maschio CD1 (aggressore residente) per 3 minuti.
      NOTA: L'intruso non può fuggire durante la sessione.
    3. Registra la latenza al primo attacco, il numero di attacchi e la durata dei comportamenti aggressivi entro il periodo di 3 minuti come indicatori di aggressività.
    4. Ripetere i passaggi 2.3.2-2.3.3 una volta al giorno per 3 giorni consecutivi utilizzando diversi topi intrusi ogni giorno (Figura 1B3).
    5. Seleziona i topi CD1 come aggressori per ulteriori esperimenti in base a due criteri: (1) devono aver attaccato in almeno due delle tre sessioni e (2) la loro latenza di attacco deve essere inferiore a 1 minuto in ogni sessione.

3. Modellazione

NOTA: Questa fase prevede l'esposizione casuale al fallimento della competizione sociale nel test in provetta, allo stress da sconfitta sociale vicaria modificata e allo stress da sovraffollamento inevitabile, seguito da isolamento sociale, per 10 giorni consecutivi.

  1. Fallimento della competizione sociale
    NOTA: Per i dettagli, fare riferimento ai precedenti rapporti32,34.
    1. Prepara topi soggetti femmine, topi "vincitori" schermati, tubi (lunghi 30 cm, diametro interno 26 mm), bastoncini di plastica, etanolo al 75%, tovaglioli di carta e un timer.
    2. Alloggiare i topi soggetti femmina individualmente (1 topo per gabbia) e ospitare i topi naïve in gruppi (5 topi per gabbia).
      NOTA: Sposta i topi ingenui in nuove gabbie di gruppo all'inizio della modellazione. Non è necessario passare a una nuova gabbia durante il periodo di modellazione.
    3. Pulisci il tavolo, i tubi e i bastoncini di plastica con etanolo al 75% per eliminare i segnali di odore.
    4. Rimuovi con cura i topi dalle loro gabbie domestiche. Posiziona un topo MISS e un topo "vincitore" alle estremità opposte del tubo in modo che camminino in avanti e si incontrino nel punto medio. Il topo MISS verrà spinto fuori dal tubo dal "vincitore".
      NOTA: Le dimensioni maggiori, il peso corporeo più elevato e il rango sociale dominante del "vincitore" assicurano che il topo MISS sperimentale perda quasi sempre la gara del tubo. Se i topi rimangono immobili per più di 30 s, tocca delicatamente la coda del vincitore con un bastoncino di plastica per incoraggiare la spinta.
    5. Scambia le posizioni dei due mouse e ripeti il passaggio 3.1.4. Contare i passaggi 3.1.4 e 3.1.5 come un unico ciclo.
    6. Riporta i topi MISS e "vincitori" nelle loro gabbie di casa. Pulisci il tavolo, il tubo e il bastoncino di plastica per rimuovere gli odori.
    7. Introduci un nuovo mouse vincitore e ripeti i passaggi 3.1.4-3.1.5 con lo stesso mouse MISS. Ogni topo MISS viene quindi sottoposto a due cicli consecutivi di competizione fallita del tubo (Figura 1C1, Figura 2E).
    8. Ripetere i passaggi 3.1.4-3.1.7 per tutti i mouse MISS per 10 giorni consecutivi.
  2. Stress da sconfitta sociale vicaria modificata
    1. Preparare topi riproduttori in pensione CD1 aggressivi sottoposti a screening (alloggiati singolarmente), topi maschi C57BL/6J, topi femmina MISS e coperture acriliche perforate (Figura 2C; L × P × A: 8 cm × 8 cm × 5,5 cm) con fori (5 × 5 nel pannello superiore, 3 × 5 nelle pareti laterali; ogni foro ha un diametro di 0,5 cm).
    2. Posizionare una femmina di topo MISS all'interno della gabbia di un aggressore CD1, confinata sotto una copertura acrilica perforata, per consentire l'osservazione vicaria delle interazioni aggressive.
      NOTA: Monitorare la potenziale ribaltamento del coperchio in acrilico da parte del mouse CD1 o MISS. La riduzione della lettiera delle pannocchie di mais nelle gabbie CD1 aiuta a prevenire il ribaltamento.
    3. Introdurre un topo intruso maschio C57BL/6J nella gabbia per essere attaccato fisicamente dal topo CD1 per 10 minuti. La femmina di topo MISS osserva l'interazione attraverso il coperchio perforato (Figura 1C2, Figura 2F).
      NOTA: Se il topo intruso è gravemente ferito, terminare immediatamente la sessione e curare l'animale. L'uso di piccoli pellet di pannocchia di mais migliora l'esperienza coinvolgente per il topo MISS amplificando lo spostamento della lettiera durante i combattimenti.
    4. Dopo 10 minuti, rimuovere l'intruso maschio e consentire alla femmina del topo MISS altri 5 minuti di esposizione sensoriale al topo CD1.
    5. Ripetere i passaggi 3.2.3-3.2.4 altre due volte con diversi intrusi maschi.
    6. Rimetti il topo MISS nella sua gabbia di casa. Monitorare e trattare eventuali lesioni negli intrusi maschi.
    7. Pulisci le coperture in acrilico perforato e spazza via la lettiera versata.
    8. Ripetere i passaggi 3.2.2-3.2.5 utilizzando un nuovo riproduttore CD1 in pensione per 10 giorni consecutivi.
  3. Inevitabile stress da sovraffollamento
    1. Preparare i topi femmina MISS, una guaina bianca opaca (Figura 2D; L × P × A: 14 cm × 10 cm × 20 cm), gabbie per topi standard con lettiera di pannocchie di mais, etanolo al 75%, tovaglioli di carta e timer.
    2. Posiziona la guaina opaca all'interno di una gabbia standard con lettiera.
    3. Introdurre 12-15 topi femmina (tutti topi MISS o mescolati con altre femmine) nella guaina per 30 minuti al giorno (Figura 1C3, Figura 2G).
      NOTA: Regolare il numero di topi in base alle loro dimensioni per garantire l'affollamento senza calpestare. Prevenire la fuoriuscita coprendo la manica con un coperchio perforato trasparente, se necessario.
    4. Rimetti i topi nelle loro gabbie di casa e pulisci la manica con etanolo al 75%.
    5. Ripetere il passaggio 3.3.3 per 10 giorni consecutivi.
  4. Isolamento sociale
    1. Prepara le femmine di topo MISS e le gabbie per topi standard con lettiera di pannocchia di mais.
    2. I topi MISS domestici individualmente quando non sono sottoposti a fallimento della competizione sociale, stress da sconfitta vicaria o stress da sovraffollamento, per il resto del periodo di modellazione di 10 giorni (Figura 1C4, Figura 2H).
      NOTA: I topi ingenui vengono trasferiti delicatamente per la coda in una gabbia temporanea, quindi riportati nella loro gabbia di casa senza alcuna esposizione allo stress. Fornire cibo e acqua ad libitum, come con i topi MISS.

4. Test comportamentali

NOTA: Gli esperimenti comportamentali vengono condotti entro una settimana dalla modellazione per valutare i comportamenti depressivi e ansiosi nei topi. Prima di ogni test, le femmine di topo vengono spostate nella sala dei test comportamentali (illuminazione a 15-20 lux) per 1 ora di assuefazione. Dopo ogni test, i topi vengono riportati nella loro struttura abitativa originale.

  1. Test di preferenza del saccarosio
    NOTA: Per i dettagli, fare riferimento ai precedenti rapporti 36,37,38.
    1. Prepara topi soggetti femminili, beperimetri (50 ml) con tubi a sfera, gabbie per topi standard con tappi in filo d'acciaio, saccarosio, una bilancia elettronica, un cilindro graduato, un'asta per mescolare, carta per pesare, acqua, un quaderno e una penna.
    2. Ospita individualmente tutti i topi soggetti femmine (topi naïve e MISS).
    3. Riempire le bottiglie con acqua potabile (~2/3 del volume).
      NOTA: Assicurarsi che non vi siano perdite dalle bottiglie prima di iniziare l'esperimento.
    4. Fornisci a ciascun topo due bottiglie piene d'acqua poste una accanto all'altra per 2 giorni di assuefazione.
    5. Preparare l'1% di acqua di saccarosio (1 g di saccarosio per 99 ml di acqua).
    6. All'inizio del test, sostituire l'acqua in una bottiglia con una soluzione di saccarosio all'1%. Registrare i pesi iniziali di entrambe le bottiglie.
    7. Dopo 12 ore, registrare nuovamente i pesi delle bottiglie e cambiare le posizioni delle bottiglie per evitare distorsioni di posizione.
    8. Dopo 24 ore, registrare i pesi finali e calcolare la preferenza per il saccarosio come:Preferenza per il saccarosio (%) = (Assunzione di saccarosio / Assunzione totale di liquidi) × 100
    9. Alla fine del test, riporta i topi nelle loro gabbie domestiche con normali bottiglie d'acqua.
    10. Pulire accuratamente tutte le bottiglie e i tubi a sfera con acqua.
  2. Test della sospensione della coda
    NOTA: Questo test32 può essere condotto sulla stessa coorte di topi o su una coorte separata a seconda del disegno sperimentale. In questo studio, è stato eseguito 3 giorni dopo il test di preferenza del saccarosio.
    1. Prepara topi soggetti femmina, una scatola per il test della sospensione della coda (55 cm di altezza × 60 cm di larghezza × 12 cm di profondità), nastro adesivo, cronometro, alcol al 75% e tovaglioli di carta.
    2. Impostazione del sistema di tracciamento video39. Definire una zona attiva e avviare la registrazione.
    3. Pulire la scatola del test con etanolo al 75%.
    4. Fissa delicatamente il mouse a ~2 cm dall'estremità della coda e sospendilo a testa in giù, assicurandoti che la sua testa sia a ~25 cm dal fondo della scatola.
      NOTA: Ridurre al minimo l'oscillazione ed evitare stress inutili.
    5. Registrare il comportamento utilizzando il software di tracciamento35 6 min. Utilizzare il tempo di immobilità degli ultimi 4 minuti per l'analisi.
      NOTA: L'immobilità è definita come l'assenza di movimento con il corpo appeso passivamente. Escludi i dati se il mouse cade o si arrampica.
    6. Staccare con cautela il nastro adesivo e rimettere il mouse nella sua gabbia di casa.
  3. Test in campo aperto
    NOTA: Per i dettagli, fare riferimento ai precedenti rapporti40,41.
    1. Prepara topi femmina, una scatola di test in campo aperto (40 cm × 40 cm × 40 cm), etanolo al 75% e tovaglioli di carta.
    2. Imposta il sistema di tracciamento video. Dividi virtualmente l'arena in 4 × 4 sottoaree; Definisci le 4 unità centrali come la zona centrale e il resto come la zona periferica.
    3. Pulire la scatola del test con etanolo al 75%.
    4. Posiziona delicatamente il mouse in questione al centro della casella, con la testa rivolta nella stessa direzione. Lascialo esplorare per 5 minuti.
      NOTA: Utilizzare un pallet per il trasferimento per ridurre lo stress di movimentazione.
    5. Registra la distanza totale percorsa e il tempo trascorso nella zona centrale utilizzando il sistema di tracciamento video.
    6. Al termine del test, riportare il topo nella gabbia di casa e pulire l'apparato.
  4. Test del labirinto elevato plus
    NOTA: Per i dettagli, fare riferimento al precedente rapporto32.
    1. Prepara topi soggetti femminili, un labirinto più elevato, etanolo al 75% e tovaglioli di carta.
      NOTA: Il labirinto è costituito da due piste perpendicolari (50 cm dal pavimento), ciascuna con due bracci (30 cm di lunghezza × 5 cm di larghezza). Un set ha pareti alte 15 cm (braccia chiuse), mentre l'altro set è aperto. La zona centrale è di 5 cm × 5 cm.
    2. Imposta il sistema di tracciamento video e definisci le braccia aperte, le braccia chiuse e l'area centrale.
    3. Pulisci il labirinto con etanolo al 75%.
    4. Posiziona delicatamente il mouse al centro del labirinto, di fronte a un braccio aperto. Concedi l'esplorazione libera per 5 minuti.
      NOTA: Utilizzare un pallet per ridurre al minimo lo stress durante il posizionamento.
    5. Registra il tempo trascorso in ciascun braccio utilizzando il sistema di tracciamento.
      NOTA: Se un topo cade dal labirinto, escludere i suoi dati.
    6. Rimetti il topo nella sua gabbia di casa e pulisci accuratamente il labirinto.

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Risultati

Per indagare se l'esposizione a MISS induce cambiamenti comportamentali di tipo depressivo, le femmine di topo C57BL/6J (n = 16 per gruppo; dimensione del campione determinata tramite analisi di potenza, vedi File supplementare 1 e File supplementare 2) sottoposti al paradigma MISS sono stati valutati utilizzando i test di preferenza per il saccarosio e la sospensione della coda, che valutano rispettivamente i sintomi principali della depressione-anedonia e della disperazione co...

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Discussione

Un numero crescente di studi si è concentrato sullo sviluppo di modelli specifici per i disturbi psichiatrici utilizzando i paradigmi dello stress cronico da sconfitta sociale (CSDS) 11,13,14. Ad esempio, in due modelli femminili di CSDS recentemente stabiliti, l'aggressività maschile nei confronti delle femmine di topo è stata indotta artificialmente rivestendo le femmine di urina maschile o at...

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Dichiarazioni

Gli autori dichiarano di non avere interessi concorrenti.

Ringraziamenti

Il presente studio è stato sostenuto dalla National Natural Science Foundation of China (31970937 e 82271255), dal programma di team innovativi e imprenditoriali della provincia di Jiangsu, dal progetto di sviluppo sociale (BE2023690) del programma chiave di ricerca e sviluppo della provincia di Jiangsu e dal programma di innovazione post-laurea e pratica della ricerca e della pratica della provincia di Jiangsu (KYCX22_2932, KYCX23_2952).

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
75% di alcolAladinoA171299-500 mlUtilizzato per sterilizzare e pulire le attrezzature e gli strumenti di laboratorio
Bottiglia con beccuccio a sferaBottiglia di acqua potabile su misura (50 ml) con tappo in gomma con beccuccio a sfera per il test di preferenza del saccarosio
C57BL/6J topi femmina  Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd219C57BL / 6J topi femmina di età compresa tra 7 e 8 settimane sono utilizzati come topi soggetti e i topi di età compresa tra 10 e 14 settimane sono utilizzati come candidati vincitori
C57BL / 6J topi maschiI topi femmina C57BL/6J di età compresa tra 7 e 8 settimane sono utilizzati come topi soggetti e i topi di età compresa tra 10 e 14 settimane sono utilizzati come candidati vincitori219topi maschi C57BL/6J di età compresa tra 8 e 16 settimane come intrusi per lo screening aggressivo del CD1.
Illabirinto sopraelevato è costituito da perpendicolari, che si intersecano con piste sopraelevate (50 cm dal pavimento). Ogni pista ha due bracci contrapposti (30 cm di lunghezza e 5 cm di larghezza). Una delle piste ha pareti alte (15 cm di altezza, braccia chiuse) e l'altra non ha pareti alte (braccia aperte). L'area di intersezione è chiamata area centrale (5 cm & volte; 5 cm)
Topi riproduttori maschi CD-1 in pensione  Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd201Topi riproduttori maschi CD-1 in pensione di età compresa tra 4 e 6 mesi come candidati aggressori
Scatola di prova a campo apertoScatolaaperta in acrilico bianco su misura (L & volte; W &volte; H: 40 cm & volte; 40 cm & tempi; 40 cm) per la prova in campo aperto
Copertura forata Copertura foratatrasparentesu misura (L × W &volte; H: 8 cm & volte; 8 cm & volte; 5,5 cm) per la protezione delle femmine dal contatto fisico diretto con i topi CD1 (con 5 &volte; 5 fori nel soffitto superiore e 3 &volte; 5 fori nelle pareti laterali, ogni foro ha un diametro di 0,5 cm)
ManicottoSumisura-Manicottoin plastica non trasparente (L & volte; W &volte; H: 14 cm & volte; 10 cm & tempi; 20 cm) per tenere i topi in esposizione all'affollamento
Gabbia per topi standard con parte superiore in filo d'acciaioSuzhou Fengshi Laboratory Equipment Co., Ltd.FS-SAGIVC-X30Gabbia per mouse standard (L &volte; W &volte; H: 37 cm & volte; 16 cm & tempi; 12 cm) con piano in filo d'acciaio 
SucroseSigmaV900116Utilizzato per preparare una soluzione di saccarosio all'1% nel test di preferenza del saccarosio
Scatola di sospensione della codaScatola acrilica bianca su misura (H × W &volte; D: 55 cm & volte; 60 cm & tempi; 12cm) per il test della sospensione della coda   
Tubi acrilici trasparentiTubi acrilici trasparenti su misura con diametro interno di 26 mm: 30 mm di lunghezza per la competizione di tubi, 10 mm di lunghezza per l'adattamento del tubo.
Sistema di tracciamento video (SMART V3.0)Panlab76-0695Utilizzato per tracciare, registrare e analizzare le traiettorie di attività e la durata dei movimenti dei topi

Riferimenti

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