Questo articolo presenta un protocollo dettagliato per la raccolta di campioni di cancro al seno, progettato per ottimizzare la loro utilità per il biobanking, la medicina personalizzata e altre applicazioni di ricerca. Il flusso di lavoro per la raccolta dei campioni, comprese le procedure di biopsia mammaria e mastectomia, è descritto in dettaglio, concentrandosi sulla riduzione al minimo dei danni ai tessuti e sulla massimizzazione della qualità del campione.
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Articolo metodologico
Ottimizzazione delle procedure di raccolta dei campioni di biopsia mammaria e mastectomia per applicazioni di biobanche, medicina personalizzata e ricerca
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In questo articolo
Sommario
Abstract
Il cancro al seno è il tumore più diffuso che colpisce le donne, in particolare in Asia, con la più alta incidenza nelle Filippine. Nonostante gli sforzi in corso, la comprensione della biologia del cancro al seno rimane inadeguata, aggravata dalla mancanza di programmi di screening efficaci e trattamenti tempestivi. Per affrontare questi problemi, le biobanche e altri archivi di campioni biologici hanno acquisito uno slancio globale. L'Università delle Filippine-Philippine General Hospital (UP-PGH) ha istituito una biobanca del cancro, dimostrando la fattibilità di un'iniziativa sostenuta dal governo per la ricerca sul cancro nelle Filippine. Lo studio prevede un'osservazione prospettica di 100 pazienti filippini con carcinoma mammario in vari stadi della malattia, sfruttando l'esperienza di UP-PGH, Philippine Genome Center (PGC) e University of the Philippines Diliman - Institute of Biology (UPD-IB). Integra la raccolta, l'elaborazione e l'archiviazione di campioni biologici insieme ai dati completi dei pazienti. Le procedure includono l'estrazione dell'RNA, la preparazione della libreria e il sequenziamento. Inoltre, un sottogruppo di pazienti partecipa a un esperimento di coltura cellulare tridimensionale (3D) in vitro per il pre-screening della chemioterapia. I dati aggregati mirano a scoprire strategie terapeutiche che possono portare a trattamenti personalizzati laddove gli approcci clinici standard sono inadeguati. Le tecniche chiave includono la biopsia con ago centrale ecoguidata, la meticolosa raccolta del tessuto mammario normale e la determinazione precisa della percentuale di tumore per garantire l'estrazione dell'RNA, il sequenziamento e la coltura cellulare 3D di alta qualità. Lo studio affronta anche le sfide incontrate nelle precedenti attività di biobanking. In definitiva, questa ricerca mira a contribuire in modo significativo alla ricerca sul cancro al seno, posizionandosi come modello per la ricerca collaborativa, la creazione di biobanche e il progresso della medicina di precisione nei paesi in via di sviluppo, come le Filippine.
Introduzione
Il cancro al seno è la forma più diffusa di cancro tra le donne filippine. In Asia, le Filippine mostrano uno dei più alti tassi di mortalità per cancro al seno e il più basso rapporto mortalità/incidenza1. I tassi potrebbero essere stati fortemente influenzati dall'assenza di programmi di screening e di un trattamento tempestivo ed efficace per il cancro al seno. Nel paese, il cancro al seno viene in genere diagnosticato in fasi successive poiché la maggior parte dei pazienti oncologici cerca un consulto solo in fasi avanzate del cancro. Nelle Filippine, dove si osserva un alto tasso di incidenza di cancro al seno, il 53% dei casi di cancro al seno è stato diagnosticato negli stadi III e IV e solo il 2-3% è stato diagnosticato nello stadio I 1,2,3. Oltre a promuovere l'adozione dello screening e l'educazione dei pazienti sul cancro al seno, la ricerca e lo sviluppo relativi al cancro al seno dovrebbero essere ulteriormente esplorati per ridurre l'incidenza del cancro al seno nel paese.
La creazione di biobanche in tutto il mondo ha permesso l'accelerazione dei progressi della medicina. Le biobanche sono utilizzate per lo stoccaggio e la conservazione di campioni biologici scientificamente validi per future attività di ricerca e sviluppo4. Da allora, le biobanche sono state utilizzate per la ricerca traslazionale5 e per il miglioramento degli approcci medici personalizzati6. In Asia, le biobanche sono concentrate principalmente nell'Asia orientale, in particolare in Cina, Giappone e Corea4. Nei paesi asiatici a basso e medio reddito, come le Filippine, il concetto di biobanca sta ancora emergendo. Le biobanche nelle Filippine sono per lo più di proprietà di istituzioni sanitarie private, dove lo stato di salute e di esposizione della più ampia demografia filippina potrebbe non essere ben rappresentato.
L'istituzione della biobanca del cancro presso l'Università delle Filippine di Manila (UPM) Philippine General Hospital (PGH) ha dimostrato la fattibilità della creazione di una biobanca del cancro sostenuta dal governo in grado di far progredire gli studi sul cancro nelle Filippine7. Basandoci su queste fondamenta attraverso uno sforzo collaborativo che collega le competenze mediche, l'innovazione della ricerca e la politica sanitaria, ci sforziamo di creare un cambiamento positivo nel panorama della cura e della ricerca sul cancro al seno nelle Filippine. Con ciò, c'è l'imperativa necessità di disporre di un flusso di lavoro di biobanca del fenoma del cancro e di un approccio ampliato che semplifichi la raccolta di dati estesi e stratificati specifici del paziente su scala nazionale. Questo studio descrive il protocollo per le procedure di raccolta dei campioni di biopsia mammaria e mastectomia, concentrandosi sulla loro integrazione nel quadro delle biobanche. Anticipando non solo l'avanzamento della nostra comprensione della patogenesi del cancro al seno nel contesto della popolazione filippina, ma anche facilitando lo sviluppo di trattamenti di precisione che si allineano con le caratteristiche genetiche, ambientali e cliniche uniche degli individui colpiti.
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Protocollo
Si tratta di uno studio prospettico e osservazionale con una raccolta di campioni biologici anonimizzati (tumore e tessuto mammario normale) e dati clinicopatologici, di trattamento e di esito di 100 pazienti filippini con carcinoma mammario di vari stadi. Si tratta di un lavoro di collaborazione tra il Philippine General Hospital (PGH), il Philippine Genome Center (PGC) e l'Institute of Biology (IB) dell'Università delle Filippine Diliman, ciascuno con compiti designati. Il protocollo è stato registrato presso l'Ufficio per l'amministrazione delle sovvenzioni per la ricerca (RGAO-2020-0933) e rivisto e approvato dal Consiglio etico per la ricerca di Manila (UPMREB) dell'Università delle Filippine per l'attuazione con il numero di autorizzazione etica UPMREB 2020-822-01. Tutti i laboratori utilizzati aderiscono alle linee guida sulla biosicurezza di ogni istituto. Il reclutamento di pazienti da PGH ha garantito la varianza e la rappresentazione in termini di fattori clinicopatologici, etnia ed esposizioni ambientali. Una procedura operativa standard (SOP) sviluppata e convalidata in progetti precedenti è stata utilizzata come quadro di riferimento per l'acquisizione, la raccolta, il trasporto e altre disposizioni logistiche relative ai campioni.
NOTA: Vedere la Figura 1 - Flusso di lavoro diagrammatico del protocollo per il riepilogo del flusso di lavoro del protocollo e i ruoli di ciascuna istituzione coinvolta nello studio.
1. Procedura di raccolta del campione pre-seno
- Identificare e selezionare i pazienti idonei per l'inclusione nello studio durante un consulto clinico o una conferenza preoperatoria.
- Criteri di inclusione per i pazienti oncologici
- Includi filippine, donne, di età compresa tra 19 e 75 anni con diagnosi di carcinoma mammario in stadio 1, 2 e 3 e donne filippine di età compresa tra 19 e 70 anni con diagnosi di carcinoma mammario in stadio 3B e 4.
- Includere casi clinicamente sospetti o patologicamente diagnosticati di carcinoma mammario invasivo di qualsiasi stadio.
- Includi i pazienti che saranno sottoposti a trattamento chirurgico (mastectomia radicale modificata o mastectomia radicale) sia in anticipo (Stadio clinico I o II) che post-chemioterapia neoadiuvante (Stadio IIIB, IIIC). I pazienti in stadio IIIA possono essere sottoposti a chirurgia iniziale o terapia neoadiuvante secondo le raccomandazioni del medico. Per i pazienti in stadio IV, coloro che desiderano sottoporsi a biopsia con ago centrale del tumore al seno e del tessuto normale adiacente. I pazienti con carcinoma mammario in stadio IV non saranno sottoposti a trattamento chirurgico.
- Includi pazienti con carcinoma mammario in stadio III che sono stati sottoposti a terapia neoadiuvante prima del reclutamento e c'è un registro completo delle risposte al trattamento medico e clinico.
- Includi i pazienti che possono comprendere e firmare il consenso informato.
- Criteri di esclusione per i pazienti oncologici
- Escludere i pazienti che hanno un tumore maligno precedente o concomitante, inclusa una precedente diagnosi di cancro al seno.
- Escludere i pazienti con carcinoma mammario bilaterale.
- Escludere i pazienti che sono stati sottoposti a precedente radioterapia neoadiuvante o terapia ormonale.
- Escludere i pazienti che sono stati sottoposti a precedente biopsia del nucleo o dell'incisione in cui non vi è il consenso a ripetere la procedura di biopsia per quei pazienti che saranno sottoposti a chemioterapia neoadiuvante (poiché non è possibile ottenere un campione di tumore fresco pre-chemioterapia)
- Escludere i pazienti che sono stati sottoposti a precedente biopsia escissionale senza tumore residuo.
- Escludere i pazienti con comorbidità che precludono la gestione chirurgica o la chemioterapia neoadiuvante.
- Criteri di prelievo
- Informare i partecipanti che possono ritirarsi in qualsiasi momento per motivi di sicurezza o di altro tipo senza compromettere le loro cure mediche. Questo studio non interventistico non influirà sulla scelta del trattamento per i partecipanti.
- Criteri di inclusione per i pazienti oncologici
- Assicurati il consenso del paziente e compila il modulo di raccolta dati.
NOTA: Il titolare assegnato (FIC) o il consulente, insieme al ricercatore associato di ateneo (URA), ottiene il consenso. - Ottenere e verificare il programma del paziente per la procedura di agobiopsia centrale dopo aver confermato la sua partecipazione allo studio.
- Condurre le procedure nel rispetto delle linee guida stabilite e approvate dal Comitato Etico e dal Comitato per la Biosicurezza dell'istituto.
2. Procedura di raccolta del campione per biopsia mammaria
NOTA: Vedere la Figura 2 per il flusso di lavoro dettagliato della procedura di biopsia mammaria con ago centrale per pazienti in stadio III e IV, che mostra la distribuzione dei campioni per ciascuna procedura.
- Pre-etichettare le provette prima della raccolta del campione come GB, che significa Genomica - Seno (lo studio a cui si trova il campione), xxx che è il numero del partecipante e può variare da 001 a 100, o più, e le lettere A, C e D. Di seguito sono riportati i codici delle lettere da utilizzare per l'etichettatura dei tubi:
A - significa biopsia con ago centrale, tessuto tumorale, per l'invio a PGC
C - significa biopsia con ago centrale, tessuto tumorale, per biobanche
D - significa biopsia con ago centrale, tessuto normale- Assegnare ai campioni inviati per il sequenziamento l'etichetta del laboratorio: "BC" e due numeri di campione a due cifre (ad esempio, BC01, BC21). Ogni campione ha un codice "GB" corrispondente che è correlato al codice assegnato durante la raccolta del campione.
- È possibile ottenere fino a nove nuclei di tessuto utilizzando una pistola per biopsia con ago da 14 G sotto guida ecografica, in una clinica ambulatoriale, in sala operatoria o in un altro ambiente asettico.
- Per ogni nucleo, ottenere un campione di mammella di circa 2 cm di lunghezza al centro del tumore e di 1 cm di distanza dal tumore per il tessuto normale adiacente. Raccogli due tipi di campioni da ciascun partecipante: tessuto tumorale e tessuto normale.
- Consegnare ogni campione all'URA per il posizionamento in una piastra di Petri contenente soluzione salina tamponata con fosfato (PBS).
NOTA: In questo studio, le biopsie con ago centrale sono state eseguite solo su pazienti con carcinoma mammario in stadio III e IV. Per i pazienti in stadio III, le biopsie con ago centrale hanno fornito campioni tumorali naïve alla chemioterapia. Per i pazienti in stadio IV, le biopsie con ago centrale sono servite come campione tumorale primario, poiché la mastectomia non è stata eseguita. Per le pazienti con carcinoma mammario in stadio I e II, non sono state eseguite biopsie con ago centrale. Invece, il tumore e i tessuti normali adiacenti sono stati ottenuti da campioni di mastectomia.
- Tagliare i campioni bioptici a metà per distribuirli uniformemente tra lo studio e l'analisi istopatologica.
- Per il tessuto tumorale, ottenere fino a 9 nuclei per paziente dello studio utilizzando un ago da 14 G.
- Separare i nuclei tumorali ottenuti in 2 gruppi nella capsula di Petri: campioni per l'analisi dell'RNA (6 nuclei) e campioni per biobanche (3 nuclei).
- Tagliare ogni torsolo in 2 nel senso della lunghezza, ma nei casi in cui è difficile farlo, tagliare i nuclei in 2 trasversalmente. Utilizzare una lama sterile per tagliare i nuclei. Inviare metà del nucleo di tessuto per l'analisi dell'RNA o conservarlo per la biobanca. Inviare l'altra metà del nucleo di tessuto a Pathology per l'analisi istopatologica di routine.
- Per il tessuto normale, ottenere fino a 3 nuclei per paziente dello studio utilizzando un ago da 14 G. Utilizzare un ago diverso da quello utilizzato per ottenere i tessuti tumorali per evitare contaminazioni. Nei casi in cui ciò non è possibile, ottenere tessuti mammari normali prima di ottenere tessuti tumorali.
- Mettere ogni tessuto normale ottenuto in una capsula di Petri simile a quanto fatto con i tessuti tumorali, e tagliare i nuclei a metà. Distribuire i campioni per lo studio e al Dipartimento di Patologia per l'analisi istopatologica.
- Dopo la raccolta del campione, distribuire i campioni tra le provette, seguendo un modo e un ordine di priorità.
- Posizionare metà dei nuclei nell'apposito crioviale da 2 mL pre-riempito con 1,25 mL di soluzione di stabilizzazione dell'RNA (tutti i nuclei per l'analisi dell'RNA messi insieme in 1 fiala e tutti i nuclei per il biobanking in una fiala separata, mantenere i campioni a temperatura fredda in ogni momento) e posizionare le metà corrispondenti di questi nuclei in una normale fiala/provetta per campioni e fissate con formalina tamponata neutra al 10% (10% NBF), per analisi istopatologiche. Assicurarsi che i due semigruppi corrispondenti, quello che va al centro designato (ad esempio, i campioni inviati per l'analisi dell'RNA) e il corrispondente campione di patologia abbiano lo stesso codice del campione.
- Compila le schede di patologia chirurgica. Insieme ai moduli, inviare i campioni di patologia fissati con formalina a Pathology per l'istopatologia di routine.
- Sigillare con parafilm i campioni di agobiopsia centrale imbevuti di provette contenenti soluzione di stabilizzazione dell'RNA (idealmente rapporto 5:1 tra soluzione e tessuto, quindi se 0,25 cm di tessuto, 1,25 mL di soluzione di stabilizzazione dell'RNA).
- Conservare i campioni a 4 °C per 24 ore, quindi trasferirli nel congelatore ultrabasso, con una temperatura di -80 °C.
NOTA: Una guida sullo stoccaggio sarà discussa nella Sezione 4 (Stoccaggio, imballaggio e trasporto dei campioni).
3. Procedura di raccolta del campione di mastectomia mammaria
- Seguire la procedura di raccolta del campione pre-seno nella Sezione 1.
NOTA: I pazienti in stadio I, II e III arruolati nello studio saranno sottoposti a mastectomia in sala operatoria (OR). Per i pazienti in stadio I e II, la mastectomia verrà eseguita in anticipo, mentre per i pazienti in stadio III, la mastectomia verrà eseguita solo al completamento di 8 cicli di terapia neoadiuvante. Per la fase 4, non vengono raccolti campioni di mastectomia. Vedere la Figura 3 per il protocollo dettagliato di raccolta dei campioni di mastectomia mammaria che mostra la distribuzione dei campioni per procedura. - Coordinare il programma con i collaboratori e il reparto di Patologia. Fallo almeno 2 giorni prima della data prevista per la procedura. In caso di modifiche all'orario stabilito, informare immediatamente il personale interessato per evitare conflitti nell'orario.
- Pre-etichettare le provette prima della raccolta del campione come GB, che significa Genomica del seno (lo studio a cui si trova il campione), xxx che è il numero del partecipante e può variare da 001 a 100, o più, e le lettere E e F. Di seguito sono riportati i codici delle lettere da utilizzare per l'etichettatura dei tubi:
E - significa mastectomia, tessuto tumorale, per l'invio a PGC, IB e per biobanche
F - significa mastectomia, tessuto normale- Assegnare ai campioni inviati per il sequenziamento l'etichetta del laboratorio: "BC" e il numero di campione a due cifre (ad esempio, BC01, BC21). Ogni campione ha un codice "GB" corrispondente che è correlato al codice assegnato durante la raccolta del campione.
- Compilare i moduli di patologia chirurgica durante l'intervento, in attesa del campione. Invia aggiornamenti al patologo responsabile affinché effettui i preparativi necessari per la raccolta dei campioni.
- Posizionare il campione in un sacchetto di plastica/campione pulito subito dopo la rimozione e la documentazione del campione di seno. Assicurarsi che il campione di mastectomia venga immediatamente portato al reparto di patologia per l'uso grossolano per ridurre al minimo il tempo ischemico a freddo. Non immergere il campione in formalina al momento della presentazione.
NOTA: Le foto dell'azione di esempio durante la mastectomia sono mostrate nella Figura 4 (Immagini rappresentative della raccolta del campione durante la procedura di mastectomia). - Ottenere due tipi di campioni da ciascun campione al momento dell'ingrossamento: tessuto tumorale e tessuto normale.
- Tessuto tumorale
- Procurarsi un minimo di un blocco (preferibilmente di più) di 1 cm × 1 cm × 1 cm di tessuto tumorale per campione.
- Tagliare ulteriormente il blocco di tessuto ottenuto in due parti, con ogni mezzo blocco che misura 1 cm × 0,5 cm × 0,5 cm. Consegnare metà del blocco di tessuto all'URA per la biobanca e l'analisi, quindi fissare l'altra metà in formalina per l'istopatologia di routine.
- Trisecare uniformemente il mezzo blocco di tessuto fresco. Questo sarà destinato al sequenziamento dell'RNA, alle biobanche e alla coltura di organoidi.
- Per il sequenziamento dell'RNA: Collocare immediatamente in crioviali da 5 mL pre-refrigerati e pre-marcati, pre-riempiti con 2,5 mL di soluzione di stabilizzazione dell'RNA (non superiore a 30 minuti, deve essere mantenuto sempre freddo).
- Per le biobanche: Immergere immediatamente in crioviali da 5 mL pre-raffreddati, pre-marcati e pre-riempiti con 2,5 mL di soluzione di stabilizzazione dell'RNA (non superiore a 30 minuti, deve essere mantenuto sempre freddo).
- Per la coltura di organoidi: Mettere immediatamente in fiale coniche da 15 mL pre-refrigerate, pre-marcate e pre-riempite con 5 mL di soluzione per la conservazione dei tessuti e 0,01 mL di Primocin (non superiore a 30 minuti, deve essere mantenuto sempre freddo). Raggruppare in un unico tubo conico un terzo di tutti i blocchi tumorali ottenuti da diverse sezioni del campione.
- Tessuto normale
- Procurarsi un minimo di un blocco (preferibilmente di più) che misuri 1 cm × 1 cm × 1 cm di tessuto mammario normale per campione.
- Tagliare ulteriormente il blocco di tessuto ottenuto in due parti, con ogni mezzo blocco che misura 1 cm × 1 cm × 0,5 cm. Consegnare metà del blocco di tessuto all'URA per la biobanca e l'analisi, quindi fissare l'altra metà in formalina per l'istopatologia di routine.
- Tagliare il blocco di tessuto in parti uguali in due per lo studio. Questi saranno destinati al sequenziamento dell'RNA e alla biobanca.
- Per il sequenziamento dell'RNA: Collocare immediatamente in crioviali da 5 mL pre-refrigerati e pre-marcati, pre-riempiti con crioviali da 2,5 mL con soluzione di stabilizzazione dell'RNA (non superiore a 30 minuti, mantenere sempre a temperatura fredda).
- Per il biobanking, immergere immediatamente in crioviali da 2,5 mL pre-raffreddati, pre-marcati e pre-riempiti con soluzione di stabilizzazione dell'RNA (non superiore a 30 minuti, mantenere sempre a temperatura fredda).
NOTA: I campioni tumorali etichettati "E" sono tipicamente ottenuti da tre o più sezioni diverse del campione. Per evitare confusione, i campioni tumorali destinati all'analisi dell'RNA e alla biobanca devono essere collocati in provette separate etichettate come E1, E2, E3, ecc., mentre i campioni tumorali aggregati destinati alla coltura cellulare devono essere collocati in provette etichettate semplicemente come E. Per i campioni etichettati E1, E2 ed E3, deve essere registrata la posizione/posizione relativa di ciascun campione di tessuto rispetto al tumore (ad esempio, centro, posizione a ore 10).
- Tessuto tumorale
- Sigillare con parafilm i crioviali contenenti i campioni ottenuti dalla mastectomia.
- Conservare i crioviali a 4 °C per 24 ore, quindi trasferirli nel congelatore ultra-basso, con una temperatura di -80 °C per una conservazione a lungo termine.
- Imballare il tubo conico contenente i blocchi tumorali raggruppati e prepararlo per il trasporto. Questi blocchi tumorali saranno utilizzati per la coltura cellulare in organoidi.
4. Stoccaggio, imballaggio e trasporto di campioni
- Sigillare immediatamente con parafilm tutti i crioviali contenenti il tumore e i tessuti normali e conservarli a 4 °C per 24 ore. Dopo 24 ore, trasferire le provette a -20 °C per circa 2-4 ore e poi trasferirle a -80 °C a tempo indeterminato, per la conservazione a lungo termine fino al trasporto.
- Aggiornare il tracker dei campioni e il database prima del trasporto dei campioni per l'analisi dell'RNA, inclusi i risultati dell'istopatologia di routine e le percentuali di tumore, per garantire l'identità del campione.
- Compila un manifesto di trasporto per ogni campione, prima del trasporto. Assicurarsi che il processo di confezionamento sia rapido e che le provette contenenti i campioni non vengano lasciate a temperatura ambiente (RT) per un periodo prolungato.
- Sigillare tutti i cappucci crioviali con parafilm per evitare perdite.
- Posizionare tutte le provette in un rack per provette.
- Impostare il registratore di temperatura e posizionarlo sopra il rack accanto alle provette per il trasporto.
- Avvolgere i tubi con materiale assorbente, quindi con pluriball e posizionare gli articoli all'interno del sacchetto richiudibile. Assicurarsi che il registratore di temperatura stia registrando la temperatura e che i tubi siano intatti e posizionati in posizione verticale prima di sigillare gli articoli all'interno del sacchetto.
- Posiziona le confezioni di gel sul fondo della scatola di spedizione in polistirolo, quindi posiziona la busta richiudibile contenente i tubi sopra le confezioni di gel. Metti un altro strato di impacchi di gel sopra la borsa. Assicurati che i tubi siano inseriti tra le confezioni di gel per garantire che i campioni vengano mantenuti freddi durante il trasporto.
- Chiudi la scatola di polistirolo e mettila all'interno di una scatola di cartone per spedizioni. Se non è disponibile una scatola di cartone grande, utilizzare una scatola di polistirolo più grande. Metti il manifesto di trasporto compilato all'interno di un sacchetto a chiusura lampo e mettilo all'interno della scatola. Il posizionamento degli articoli all'interno della scatola è mostrato nella Figura 5.
- Sigilla la scatola di cartone e posiziona l'apposita etichetta di spedizione all'esterno della scatola.
- Informare il destinatario del programma di raccolta dei campioni e quando sarà l'obiettivo di invio dei campioni.
- Per la coltura di organoidi, vengono inviati e utilizzati solo i tessuti tumorali derivati da mastectomie. Assicurati che questi vengano consegnati freschi, su ghiaccio bagnato ed entro 24 ore dal ritiro dei campioni. Una volta imballati i campioni e sigillata la scatola, prenota rapidamente un corriere per trasportarli. Assicurarsi che le scatole non vengano lasciate in aree ad alta temperatura per periodi prolungati, poiché un forte calo o aumento della temperatura può compromettere la vitalità dei campioni.
- Prima di consegnare al corriere, prendere nota del numero di fiale/tubi spediti e dell'orario di partenza del corriere dalla Biobanca. All'arrivo del pacco, assicurarsi che il destinatario prenda nota di quanto segue: Ora di arrivo e ricezione presso il centro designato, temperatura all'arrivo, numero di fiale/provette ricevute ed eventuale campione compromesso
- Per l'analisi dell'RNA, verificare se i campioni da consegnare hanno un risultato istopatologico e le percentuali di tumore corrispondenti dalla Divisione di Patologia Chirurgica, prima di inviare i campioni per l'analisi dell'RNA. Identificare e selezionare il blocco di tessuto con il più alto contenuto tumorale per ogni paziente da sottoporre all'estrazione dell'RNA. Trasportare i campioni solo quelli con percentuali di tumore.
- Inviare i campioni in gruppi di non più di 40 per facilitare l'elaborazione in batch. Scegli qualsiasi combinazione di tessuto tumorale da biopsia con ago centrale o mastectomia e tessuto normale da mastectomia. Esaminare le seguenti condizioni se è necessario trasportare tessuto normale dalla biopsia con ago centrale:
-Arruolato allo stadio 3, ma il risultato dell'istopatologia mostra lo stadio 4
-Arruolato allo stadio 3, ma il risultato istopatologico mostra una progressione loco-regionale della malattia. - Assicurarsi che tutti i campioni siano trasportati su ghiaccio bagnato. Analogamente al protocollo seguito per l'invio di campioni per la coltura cellulare 3D, una volta che i campioni sono stati imballati e la scatola è sigillata, è necessario prenotare prontamente un corriere per il trasporto. Evitare di lasciare le scatole in aree ad alta temperatura per periodi prolungati, poiché fluttuazioni di temperatura significative possono compromettere la vitalità dei campioni.
- Prima di consegnare al corriere, prendere nota del numero di fiale/tubi spediti e dell'orario di partenza del corriere dalla Biobanca. All'arrivo del pacco, tenere presente quanto segue: orario di arrivo e ricezione presso il centro designato, temperatura all'arrivo, numero di fiale/provette ricevute ed eventuale campione compromesso (se presente).
- Aggiornare il database dei campioni inviati e inserire tutte le informazioni necessarie prima dell'ulteriore elaborazione dei campioni. Monitorare e valutare il database una volta alla settimana.
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Risultati
Per la raccolta dei campioni durante la biopsia con ago centrale, l'esecuzione della procedura sotto guida ecografica ha avuto un enorme impatto sulla comodità del paziente e sull'efficienza del flusso di lavoro, nonché sull'integrità dell'RNA dei campioni. In caso contrario, i risultati attesi potrebbero non essere ottenuti e i pazienti devono tornare alle cliniche per ripetere la procedura, prolungando così la raccolta e l'elaborazione del campione.
Inoltre,...
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Discussione
Il successo dell'implementazione di questo protocollo si basa non solo sulla precisione tecnica, ma anche sul coordinamento dei team clinici e di ricerca per garantire una qualità costante dei campioni e l'integrità dei dati. Questo protocollo incorpora diverse procedure chiave progettate per massimizzare l'accuratezza diagnostica e generare campioni biologici di alta qualità adatti per le analisi molecolari a valle. I passaggi chiave includono la biopsia con ago centrale ecoguidata per ...
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno alcun conflitto di interessi, finanziario, personale o istituzionale, da rivelare.
Ringraziamenti
Questa ricerca è finanziata dal Dipartimento di Scienza e Tecnologia, Consiglio filippino per la ricerca e lo sviluppo sanitario (DOST-PCHRD) e condotta in collaborazione con il Philippine Genome Center (PGC) e l'Università delle Filippine Diliman - Institute of Biology (UPD-IB). Gli autori desiderano inoltre ringraziare il Sig. Lech Havel Tizon, il Sig. Conrad Chong e la Sig.ra Susan Valibia per la loro assistenza nell'ottimizzazione di questo protocollo, così come gli specializzandi in patologia che hanno contribuito alle riprese di questo protocollo, la Dott.ssa Clarisse Veronica Mirhan e la Dott.ssa Patricia Franco.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Soluzione di formalina al 37% | PHILUSA Corporation | N/A | Utilizzato come conservante dei tessuti per l'analisi istopatologica |
| Alcol isopropilico al 70% | Green Cross Inc. | N/A | Usato come disinfettante |
| Stampante a codice a barre | Zebra | GC420t | Per la stampa di etichette con codice a barre da utilizzare nell'etichettatura dei tubi contenenti i campioni |
| Candeggina | Green Cross Inc. | N/A | Usata come disinfettante; per la decontaminazione degli strumenti chirurgici |
| Impacchi di ghiaccio blu | Rubbermaid | 1002 | Per mantenere i campioni a basse temperature durante il trasporto |
| Biopsia con ago del nucleo 14-G | Bardo | MN1410 | Uno strumento chirurgico tubolare invasivo progettato per essere collegato a un manopola-pistola per biopsia per l'estrazione automatica di un piccolo campione di tessuto da una struttura anatomica (una biopsia), causando danni minimi ai tessuti circostanti, per l'esame/test patologico del tessuto. |
| Pistola biopsia mammaria con ago del nucleo | Bardo | MG1522 | Strumento biopsico riutilizzabile utilizzato per la raccolta di campioni di tessuto durante la biopsia con ago |
| Piastra di Petri usa e getta 90 mm x 15 mm | Prodotti Biomedici Phoenix | LOT: 20220206 | Utilizzato nella raccolta di campioni di biopsia con ago durante l'immersione dei tessuti in PBS |
| Soluzione salina tamponata con fosfato di Dulbecco (PBS) | Thermo Fisher Scientific | 21600010 | Una soluzione salina bilanciata utilizzata per una varietà di applicazioni in coltura cellulare, come il lavaggio delle cellule prima della dissociazione, il trasporto di cellule o tessuti, la diluizione delle cellule per il conteggio e la preparazione dei reagenti. |
| Pinza | Fornitore locale | N/A | |
| Kimtech Science Kimwipes Tergicristalli delicati per compiti | Kimberly Clark Professionista | KC34120 | 4,3 x 8,4 in. (11,0 cm x 21,3 cm); 1-strato 280 Count; Per pulire superfici, componenti, strumenti e studi medici, queste salviette puliscono facilmente liquidi, polvere e piccole particelle. |
| Soluzione di stoccaggio dei tessuti MACS | Miltenyi Biotec | 130-100-008 | Soluzione di stoccaggio utilizzata per consentire una conservazione ottimizzata di nuovi campioni di organi e tessuti |
| Micropipetta | Shanghai Lichen Instrument Technology Co., Ltd. | STEM-GC-3197-Y | per pipetare/trasferire liquidi in piccoli volumi |
| Punte della micropipetta | Tarsons | 521100 | per pipetare/trasferire liquidi in piccoli volumi |
| Parafilm | Parafilm M | 5259-04LC PM996 | Per una tenuta ermetica e impermeabile dei tubi per prevenire perdite |
| Primocin 250 mg (5 x 1 mL) | InvivoGen | ANT-PM-05 | Utilizzato per proteggere i tessuti dalla contaminazione microbica |
| Frigorifero (4 & deg; C) | LG | Modello: GR-Y331SLZB | Per la conservazione di campioni tissutali e reagenti |
| RNAsoluzione successiva | Thermo Fisher Scientific | AM7021 | Soluzione di stabilizzazione dell'RNA utilizzata nell'immagazzinamento e nella biobanca dei tessuti |
| Tubo conico sterile da 15 mL | Thermo Scientific | 339650 | Utilizzato per creare aliquote di reagenti/mezzi usati nell'immagazzinamento dei tessuti |
| Cryovials sterili da 5 mL | Thermo Scientific | 5000-1020 | Utilizzato per creare aliquote di reagenti/mezzi usati nell'immagazzinamento dei tessuti |
| Bisturi sterile (#11) | Surgitech | N/A | Per il taglio del tumore e dei tessuti mammari normali |
| Forbici chirurgiche (18,5 cm 7 & frac14; " str) | Olten Instruments | BO-0125 | Per il taglio del tumore e dei tessuti mammari normali |
| Registratore di temperatura | Extech Instruments | 42280 | Per registrare temperatura e umidità durante il trasporto dei campioni |
| Inchiostro tissue | Epredia | 3120123 | Per la colorazione dei margini di campioni chirurgici esportati per analisi istopatologica |
| Congelatore ultra-basso | Haier Biomedical | DW-86L579 | Per la conservazione indefinita del tumore e dei tessuti mammari normali |
| Contenitore per campioni di urina 60mL | Guardia sicura | 0016UCS06PC | Per la conservazione dei tessuti per l'analisi istopatologica |
| Sacchetti Ziplock | Reynolds Consumer Products LLC | Utilizzato per imballare i campioni per il trasporto |
Riferimenti
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