Mostriamo un metodo per isolare con successo organismi meticolari e anaerobi dai tratti del seno cutaneo (tunnel) nei tessuti asportati da pazienti con idrosadenite suppurativa.
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Articolo metodologico
Approccio completo per l'isolamento microbico dai tunnel dell'idrosadenite suppurativa
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
L'idrosadenite suppurativa (HS) è una condizione debilitante caratterizzata da noduli e ascessi dolorosi, che progredisce verso i tratti sinusali (tunnel) all'interno degli strati dermici della pelle, causando disagio significativo, secrezioni maleodoranti, deturpazioni, contratture e cicatrici, che riducono gravemente la qualità della vita. L'HS è associata ad alterazioni del microbioma cutaneo, influenzando la regolazione immunitaria e la difesa della pelle contro i batteri nocivi. Nonostante la sua prevalenza, il contributo del microbioma HS alla patologia della malattia e la limitata risposta al trattamento rimangono in gran parte sconosciuti. Ad oggi, diversi studi di sequenziamento dell'rRNA 16S sul tessuto HS hanno raggiunto solo la granularità a livello di genere, identificando un aumento degli anaerobi Gram-negativi e una diminuzione dei commensali cutanei. Una comprensione più profonda della disbiosi microbica negli individui con HS è essenziale per ottimizzare le strategie di trattamento. Ciò richiede un duplice approccio alla valutazione del microbioma HS, compreso l'isolamento delle specie batteriche, che sono spesso sottoutilizzate negli studi traslazionali incentrati sui disturbi della pelle. L'isolamento di singoli microrganismi dal tessuto HS è fondamentale per chiarire il ruolo dei batteri nella patogenesi dell'HS. Qui, evidenziamo i metodi riproducibili per isolare con successo i patogeni anaerobi dal tessuto del tunnel HS, fornendo il passo iniziale e più critico nella comprensione del ruolo batterico nell'HS. Questo metodo apre la strada a una ricerca mirata sui contributi microbici all'HS e allo sviluppo di strategie di trattamento più efficaci e personalizzate che affrontano il complesso carico microbico di questa condizione cronica.
Introduzione
L'idrosadenite suppurativa (HS) è una condizione dermatologica comune caratterizzata da noduli e ascessi che progrediscono verso i tratti sinusali (tunnel) formati all'interno degli strati dermici e sottocutanei della pelle, causando dolore significativo, producendo secrezioni purulente, deturpazione e sequele psicosociali debilitanti 1,2. L'HS colpisce in modo sproporzionato le donne e gli individui con pelle di colore, che emerge tipicamente nella tarda adolescenza o nella prima età adulta2. I gravi sintomi fisici della condizione sono aggravati dal s....
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Protocollo
Questo protocollo è stato approvato dall'Institutional Review Board (IRB) dell'Università di Miami (protocollo #20200187). Il consenso informato viene ottenuto dai pazienti (n = 18, età media ± deviazione standard = 30,9 ± 9,4, 12 femmine, 6 maschi) con diagnosi di tunnel HS e/o dai loro tutori legali prima della procedura dopo una precedente discussione della ricerca per consentire di affrontare eventuali dubbi o domande.
1. Raccolta del campione del paziente
- Prima di maneggiare il tessuto asportato, utilizzare rigorose precauzioni sterili per ridurre al minimo il rischio di co....
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Risultati
In questo studio, descriviamo un protocollo per l'isolamento e la caratterizzazione di batteri anaerobi da tunnel HS. Questo protocollo è nuovo e notevole per la creazione del potenziale per testare la funzione e la virulenza di questi batteri utilizzando modelli di infezione cutanea in vitro, ex vivo e in vivo per aumentare la nostra comprensione del contributo microbico alla patogenesi dell'HS. In primo luogo, abbiamo identificato i tunnel dalla pelle resecata sondeggiandoli con una pinza ste.......
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Discussione
In questo studio, presentiamo un nuovo metodo per isolare e mantenere i batteri che colonizzano i tunnel HS. Questo metodo riproducibile non solo consentirà una caratterizzazione approfondita dei ceppi presenti in queste strutture patologiche, ma consentirà anche successivi studi funzionali che esploreranno il ruolo di specifici microbi nella patogenesi dell'HS. Le fasi critiche del protocollo includono la raccolta e il trasporto dei tessuti in mezzi anaerobici, che facilita la conservaz.......
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Dichiarazioni
Gli autori non segnalano alcun conflitto di interessi.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto da R01AR083385 (IP, MTC, HLT), P50MD017347 (TG, IP, HLT) e dalla sovvenzione di ricerca HS Foundation Danby (TG). Questo lavoro è stato inoltre supportato dalla sovvenzione NIH 1S1OD023579-01 per la casa dello scanner per vetrini VS120 presso la Miller School of Medicine Analytical Imaging Core Facility dell'Università di Miami.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Biospia con punzone da 6 mm | INTEGRA | 33-36 | Altri fornitori possono essere utilizzati |
| Biospia con punzone da 8 mm | INTEGRA | 33-37 | Altri fornitori possono essere utilizzati |
| Agarosio | Sigma Aldrich | A9539 | Altri fornitori possono essere utilizzati |
| Camere anaerobiche | BD | 260672 | |
| Mezzi di trasporto anaerobico | Sistemi anaerobici | AS-911 | |
| Infusione di cuore cerebrale Agar | Sistemi anaerobici | AS-6426 | |
| CO2 gaspak | BD | 260678 | |
| Glicerolo | SIGMA | G5516-1L | Altri fornitori possono essere utilizzati |
| Piastre PCR a guscio rigido | BIO-RAD | HSP9601 | Altri fornitori possono essere utilizzati |
| Incubatrice | VWR | Symphony | È possibile utilizzare qualsiasi incubatore callibrato |
| Anelli di inoculazione | VWR | 76544-926 | Altri fornitori possono essere utilizzati |
| LKV agar | HARDY Diagnostics | A60 | |
| Acqua microbica priva di DNA | Qiagen | 338132 | |
| Nunc CryoTube | Thermo scientific | 377267 | Altri fornitori possono essere utilizzati |
| PCR (CFX Connect Real Time System) | Modulo ottico BIO-RAD | CFX Connect | È possibile utilizzare Themocycler normale |
| GAR PISELLO | HARDY Diagnostics | A93 | |
| Q5 High Fidelity 2X Master Mix | BioLabs | M0492S | |
| Kit di purificazione QIAquick PCR QIAGEN | 28104 | ||
| Terreni di clostridi rinforzati | BD | 218081 | |
| Pinze sottili | Millipore Sigma | F4017 | Altri fornitori possono essere utilizzati |
| Trypticase Soy Agar (TSA II) con il 5% di sangue | di pecoraTermo scientifico | 221261 |
Riferimenti
- Gonzalez-Lopez, M. A. Hidradenitis suppurativa. Med Clin. 162 (4), 182-189 (2024).
- Revankar, R., Murrell, D. F., Murase, J. E. Shedding light on the impact of hidradenitis suppurativa on women and their families: A focus of the internation....
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Ristampe e permessi
