Identificazione degli inibitori PD-1/PD-L1 con la tecnologia di risonanza plasmonica di superficie

Huifang Li; Tess Puopolo; Justin Gutkowski; Navindra P. Seeram; Chang Liu

doi:10.3791/67859

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Articolo metodologico

Identificazione degli inibitori PD-1/PD-L1 con la tecnologia di risonanza plasmonica di superficie

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DOI:

10.3791/67859

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2 maggio 2025

Huifang Li¹ , Tess Puopolo¹ , Justin Gutkowski¹ , Navindra P. Seeram¹ , Chang Liu¹

¹Department of Biomedical and Pharmaceutical Sciences, College of Pharmacy, University of Rhode Island

In questo articolo

Sommario

Questo protocollo descrive un test di blocco per inibitori di PD-1/PD-L1 utilizzando la tecnologia di risonanza plasmonica di superficie. Impiega una strategia di immobilizzazione in due fasi e un sistema tampone su misura per misurare con precisione le unità di risposta, facilitando la valutazione dei tassi di blocco per composti o farmaci biologici. Inoltre, supporta l'identificazione ad alto rendimento degli inibitori PD-1/PD-L1.

Abstract

L'interruzione dell'interazione PD-1/PD-L1 è una strategia promettente per l'immunoterapia del cancro. Piattaforme di screening affidabili sono essenziali per valutare l'efficacia degli inibitori di PD-1/PD-L1. Un test di blocco PD-1/PD-L1 umano precedentemente stabilito che utilizza la tecnologia di risonanza plasmonica di superficie (SPR) (piattaforma di screening SPR inibitore PD-1/PD-L1 di prima generazione) ha dimostrato risultati paragonabili a quelli ottenuti attraverso la fluorescenza omogenea risolta nel tempo (HTRF) e i saggi basati su cellule, con un potenziale per lo screening su larga scala. In questo articolo, viene presentata una versione ottimizzata di questo test (piattaforma di screening SPR con inibitore PD-1/PD-L1 di seconda generazione), caratterizzata da un processo di accoppiamento a doppia fase che combina l'accoppiamento di ammina e bio-streptavidina per migliorare il controllo dell'orientamento PD-1 sul chip e ridurre il consumo di proteina PD-1. La piattaforma aggiornata è stata convalidata con successo utilizzando l'inibitore PD-1/PD-L1 BMS-1166, mostrando effetti di blocco paragonabili al precedente metodo basato su SPR e ad altre tecniche consolidate come l'ELISA. Questi risultati confermano l'affidabilità dell'approccio. Questa piattaforma ottimizzata per lo screening SPR offre uno strumento affidabile e ad alto rendimento per identificare nuovi inibitori di PD-1/PD-L1, far progredire la ricerca sull'immunoterapia del cancro ed evidenziare il potenziale di SPR nello screening degli inibitori del checkpoint immunitario.

Introduzione

Le terapie di blocco dei checkpoint immunitari, in particolare quelle mirate alla morte cellulare programmata-1 (PD-1) e al ligando 1 della morte cellulare programmata (PD-L1), sono all'avanguardia nelle strategie di immunoterapia del cancro. Le terapie anti-PD-1/PD-L1 hanno ricevuto l'approvazione per l'uso in vari tipi di cancro, come i tumori ematologici, cutanei, polmonari, epatici, della vescica urinaria e renali¹. PD-1 è una glicoproteina transmembrana appartenente alla superfamiglia delle immunoglobuline, caratterizzata da un singolo dominio immunoglobulina variabile (IgV) al N-terminale, un gambo di cir....