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Articolo metodologico

Costruzione di un modello di xenotrapianto di adenocarcinoma polmonare nei topi e valutazione dell'efficienza del decotto XY attraverso la via MAPK

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DOI:

10.3791/68023

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25 aprile 2025

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1College of Traditional Chinese Medicine, Changchun University of Chinese Medicine, 2Respiratory Department, First Affiliated Hospital to Changchun University of Chinese Medicine, 3Key Laboratory of Active Substances and Biological Mechanisms of Ginseng Efficacy, Changchun University of Chinese Medicine, 4Jilin Provincial Key Laboratory of Bio-Macromolecules of Chinese Medicine, Ministry of Education, Changchun University of Chinese Medicine, 5Northeast Asia Research Institute of Traditional Chinese Medicine, Changchun University of Chinese Medicine

In questo articolo

Sommario

Questo studio dimostra che il decotto XY esercita effetti terapeutici contro l'adenocarcinoma polmonare regolando la via MAPK.

Abstract

L'adenocarcinoma polmonare è in aumento in tutto il mondo, spingendo l'esplorazione e lo sviluppo di metodi di trattamento efficaci. Negli ultimi anni è stato sempre più riconosciuto il potenziale terapeutico della medicina tradizionale cinese per l'adenocarcinoma polmonare, come il decotto XiaoYi (XY). Il meccanismo d'azione della medicina tradizionale cinese nel trattamento dell'adenocarcinoma polmonare continua ad essere chiarito. In questo studio, sono stati utilizzati modelli animali per studiare gli effetti terapeutici del decotto XY nel trattamento dell'adenocarcinoma polmonare. I componenti chimici del decotto XY nei topi sono stati separati e analizzati in modalità ionica positiva e negativa utilizzando UHPLC-QE-MS. I risultati sono stati poi convalidati attraverso esperimenti in vivo , che hanno dimostrato una riduzione delle dimensioni del tumore, un miglioramento dei cambiamenti patologici e un aumento dell'apoptosi. Di conseguenza, sono stati identificati quindici componenti assorbiti nel sangue dopo la somministrazione di decotto XY: stachiosio, quercetina-3-O-beta-glucopiranosil-7-O-alfa-ramnopiranoside; Imperialino; Spinosina B; Peimine; Flavone base + 3O, 2MeO, O-Hex; Picropodofillotossina; (2S,3R,4S,5S,6R)-2-[(2R,3R,4S,5S,6R)-4,5-diidrossi-2 [[(3S,5R,8R,10R,12R,13R,14R,17S)-12-idrossi-17-(2-idrossi-6-metilepto-5-en-2-il) 4,4,8,10,14-pentametil-2,3,5,6,7,9,11,12,13,15,16,17-dodecaidro-1H ciclopenta[a]fenantre-3-il]ossi]-6-(idrossimetil)ossano-3-il]ossi-6-(idrossimetil)ossano-3,4,5-triolo; Tricin; Ginsenoside Rg1; (20R)-ginsenosidio Rh1; Giujuboside B; Aucubina; Ginsenoside Rg3; e acido beta-elemonico. Esperimenti sugli animali hanno dimostrato che il decotto XY inibiva la crescita tumorale, migliorava i cambiamenti patologici e promuoveva l'apoptosi delle cellule tumorali in modo dose-dipendente. I meccanismi coinvolti possono essere correlati all'upregolazione dell'espressione delle proteine p-JNK e p-P38 nella via MAPK e alla sottoregolazione dell'espressione della proteina p-ERK nella via MAPK. In conclusione, il decotto XY ha il potenziale per regolare la via MAPK ed esercitare effetti terapeutici contro l'adenocarcinoma polmonare.

Introduzione

L'incidenza del cancro ai polmoni è in aumento in tutto il mondo. Rappresenta il 18% di tutti i tumori maligni ed è responsabile di un numero significativo di decessi correlati al cancro 1,2. Il carcinoma polmonare non a piccole cellule (NSCLC) è una forma prevalente di cancro del polmone, con l'adenocarcinoma come principale tipo patologico3. A causa dei suoi sintomi insidiosi, il NSCLC viene spesso diagnosticato in uno stadio avanzato e ha un alto tasso di mortalità 4,5. I pazienti con NSCLC in stadio IV hanno un tasso di sopravvivenza a cinque anni di solo il 5%6, mentre anche il NSCLC in stadio iniziale resecabile chirurgicamente ha un tasso di sopravvivenza a cinque anni di appena il 50%7.

Attualmente, il trattamento dell'adenocarcinoma polmonare comprende chirurgia, radioterapia, chemioterapia, immunoterapia e terapia mirata. Inoltre, la medicina tradizionale cinese (MTC) per l'adenocarcinoma polmonare è sempre più riconosciuta e apprezzata8. La MTC ha una lunga storia ed è stata utilizzata nel trattamento di varie malattie oncologiche con risultati terapeutici efficaci 9,10. Considera il corpo umano come un'entità intera, con il principio terapeutico incentrato sul ripristino del movimento del Qi (Qi si riferisce all'energia vitale che promuove la circolazione del sangue e dei fluidi corporei, contribuendo a migliorare l'immunità e ridurre l'infiammazione nei pazienti con NSCLC) negli organi interni per ripristinare l'equilibrio generale e inibire la progressione del cancro.

La MTC non solo tratta le malattie oncologiche con bassa tossicità, bersagli multipli e alta efficienza11, ma facilita anche la riparazione dei danni causati dalla radioterapia e dalla chemioterapia, prolungando così la sopravvivenza12.

La tecnologia della cromatografia liquida-spettrometria di massa (LC-MS) integra la cromatografia liquida con la spettrometria di massa per ottenere la separazione e la rilevazione di componenti in miscele di composti complessi13. LC-MS offre un'alta risoluzione, un'elevata sensibilità e un'elevata specificità, consentendo la separazione e l'identificazione di vari componenti chimici nei decotti della medicina tradizionale cinese (MTC). Se combinata con la chimica farmaceutica del siero, che separa e rileva i componenti attivi che entrano nel sangue dopo somministrazione orale14,15, la LC-MS consente la previsione e l'analisi dei potenziali meccanismi d'azione dei farmaci. Questo approccio aiuta a comprendere la composizione chimica e i componenti farmacologici dei decotti MTC, fornendo dati essenziali per una ricerca approfondita sui loro effetti farmacologici e sulle applicazioni cliniche, rendendolo altamente applicabile nella ricerca sulla MTC16,17.

La via di segnalazione MAPK svolge un ruolo cruciale nella genesi, progressione, metastasi e invasione del cancro del polmone, con Erk, p38 e JNK come importanti sottofamiglie. È stato dimostrato che i decotti MTC influenzano l'espressione delle proteine nella via MAPK18. Il decotto XiaoYi (XY) è derivato dal decotto YiGuan ed è usato per trattare l'adenocarcinoma polmonare presso il Primo Ospedale Affiliato dell'Università di Medicina Cinese di Changchun (Figura 1), dimostrando una precisa efficacia clinica. Tuttavia, il suo meccanismo terapeutico rimane poco chiaro.

In questo studio, la cromatografia liquida ad altissime prestazioni abbinata alla spettrometria di massa Q-Exactive Orbitrap (UHPLC-QE-MS) è stata impiegata per chiarire il possibile meccanismo terapeutico del decotto XY contro l'adenocarcinoma polmonare e i suoi effetti sono stati convalidati attraverso studi in vivo .

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Protocollo

Tutte le procedure sugli animali sono state approvate dal Comitato Etico Animale dell'Università di Medicina Tradizionale Cinese di Changchun (Etica n. 2024008). Topi maschi C57BL/6 di sei settimane (20 ± 2 g), allevati in condizioni specifiche prive di agenti patogeni (SPF), hanno mostrato modelli tipici di attività fisica in un ambiente controllato con temperatura e umidità costanti. Avevano accesso ad libitum a cibo e acqua e sono stati mantenuti sotto un ciclo luce/buio di 12 ore. I dettagli dei reagenti e delle attrezzature utilizzate in questo studio sono forniti nella Tabella dei materiali.

1. Preparazione dell'estratto acquoso di decotto XY

  1. Mettere il Panax ginseng C.A. Mey (Renshen, 15 g), il Chinemys reevesii (Gray) (Guiban, 30 g) e il Trionyx sinensis Wiegmann (Biejia, 30 g) in un vaso per decotto. Aggiungere 1000 ml di acqua deionizzata e immergere per 30 minuti a temperatura ambiente.
  2. Lessare le tre erbe aromatiche del passaggio 1.1 per 1 ora. Contemporaneamente, immergere Rehmannia glutinosa Libosch (Dihuang, 30 g), Trichosanthes kirilowii Maxim. (Tianhuafen, 30 g), Coix lacryma-jobi L. var. mayuen (Romano.) Stapf (Yiyiren, 20 g), Paeonia lactiflora Pall. (Baishao, 30 g), Boswellia carterii Birdw. (Ruxiang, 7 g), Commiphora myrrha Engl. (Moyao, 7 g), Agrimonia pilosa Ledeb. (Xianhecao, 20 g), Alpinia oxyphylla Miq. (Yizhiren, 20 g), Ziziphus jujuba Mill. spinosa (Bunge) (Suanzaoren, 30 g), Melia toosendan Sieb. et Zucc. (Chuanlianzi, 5 g), Fritillaria thunbergii Miq. (Zhebeimu, 15 g), Anemarrhena asphodeloides Bge. (Zhimu, 10 g), Platycodon grandiflorum (Jacq.) (Jiegeng, 10 g), Polygala tenuifolia Willd. (Yuanzhi, 15 g), e Phragmites communis Trin. (Lugen, 30 g) in un altro contenitore per 30 min. Dopo l'ammollo, trasferiteli nella pentola del decotto dal passaggio 1.1.
  3. Lessare tutte le 18 erbe aromatiche dei passaggi 1.1 e 1.2 per 30 minuti. Versare il liquido a base di erbe, aggiungere 1000 ml di acqua deionizzata e far bollire per altri 30 minuti. Ripeti questo processo di ebollizione tre volte per ottenere tre porzioni di liquido a base di erbe, quindi uniscile e mescolale accuratamente.
  4. Filtrare il liquido a base di erbe miscelato attraverso un panno da 400 maglie. Concentrare il filtrato a pressione ridotta, quindi trasferire il liquido concentrato a base di erbe nell'apparecchiatura di raffreddamento per un'ulteriore lavorazione.
  5. Versare il liquido concentrato a base di erbe in una vaschetta di liofilizzazione e posizionarlo nella camera di pre-congelamento di un liofilizzatore sottovuoto. Una volta completata la pre-congelamento, trasferire il vassoio nella camera di essiccazione a sublimazione per rimuovere l'acqua.
  6. Rimuovere l'umidità residua ad alta temperatura. Polverizzare l'estratto di erbe liofilizzato utilizzando un polverizzatore per ottenere una polvere di decotto XY finemente liofilizzata (Figura 2).

2. Preparazione del siero contenente farmaci

  1. Assegnare in modo casuale topi maschi C57BL/6 di sei settimane (20 ± 2 g) al gruppo XiaoYi (XY) o al gruppo di controllo.
    NOTA: La dose per topi è stata calcolata utilizzando il fattore di conversione da uomo a topo:
    Dose sperimentale equivalente per topi (g/kg) = {Dose umana (g/kg) / Peso corporeo (70 kg)} x 9,1
    Sulla base di questo calcolo, il dosaggio per i topi è stato determinato in 2,6 g/kg.
  2. Pesare 0,9152 g di decotto XY liofilizzato in polvere e scioglierlo in 3,2 ml di acqua distillata per preparare la soluzione farmacologica.
    NOTA: I topi sono stati digiunati per 12 ore prima della somministrazione orale.
  3. Somministrare il decotto XY ai topi del gruppo XY tramite sonda gastrica, somministrando al gruppo di controllo un volume equivalente di acqua deionizzata.
  4. 2 ore dopo la somministrazione orale, anestetizzare i topi con pentobarbital sodico (seguendo protocolli istituzionalmente approvati). Enucleare i bulbi oculari usando una pinzetta per raccogliere campioni di sangue, quindi sopprimere i topi tramite asfissia da CO2 seguita da lussazione cervicale seguendo le linee guida etiche19.
  5. Lasciare stabilizzare i campioni di sangue a temperatura ambiente per 90 minuti. Centrifugare a 3450 x g (4 °C) per 15 minuti per raccogliere il surnatante.

3. Analisi UHPLC-QE-MS

  1. Aggiungere 100 mg di polvere liofilizzata per decotto XY a 500 μL di soluzione di estrazione (metanolo: acqua = 4:1). Mescolare accuratamente, sonicare e incubare in un bagno di acqua ghiacciata per 1 ora.
  2. Mantenere la miscela a -40 °C per 1 ora, quindi centrifugare a 13.800 x g (4 °C) per 15 minuti. Filtrare il surnatante attraverso una membrana filtrante da 0,22 μm, quindi combinare 100 μl di ciascun surnatante per creare campioni di controllo qualità (QC).
  3. Dopo aver scongelato i campioni di plasma, prelevare 400 μl del campione di plasma del gruppo di controllo e 400 μl dei campioni di plasma del gruppo XY. Aggiungere 40 μl di acido cloridrico (2 mol/L) a ciascun campione. Agitare per 1 minuto e lasciare riposare il composto a 4 °C per 15 minuti. Ripeti questo passaggio quattro volte.
  4. Aggiungere 1,6 mL di acetonitrile e agitare per 5 minuti. Centrifugare a 13.800 x g per 5 min a 4 °C. Sottoporre 1.800 μl del surnatante all'essiccazione con azoto.
  5. Ricostituire i campioni essiccati in 150 μL di metanolo all'80% contenente 10 μg/mL dello standard interno mediante vortice per 5 minuti. Centrifugare a 13.800 × g per 5 minuti a 4 °C, quindi trasferire 120 μl di surnatante in una fiala di vetro fresca per l'analisi LC-MS (Figura 3).

4. Colture cellulari e preparazione animale

  1. Seminare 1 mL di cellule di carcinoma polmonare di Lewis in un piatto di coltura contenente il Modified Eagle Medium (DMEM) di Dulbecco integrato con il 10% di siero fetale bovino e l'1% di penicillina/streptomicina. Incubare le cellule in condizioni controllate a 37 °C con CO2 al 5%.
  2. Quando le cellule raggiungono l'80% di confluenza, farle passare utilizzando lo 0,25% di tripsina. Continuare a passare fino a quando lo stato cellulare non si stabilizza, quindi regolare la concentrazione cellulare a 3 x 106 cellule/mL.
  3. Iniettare 0,1 mL della sospensione cellulare preparata per via sottocutanea nell'ascella destra di topi maschi C57BL/6 per stabilire il modello di adenocarcinoma polmonare.
    NOTA: Il tessuto tumorale può essere palpato nell'ascella dei topi 5 giorni dopo l'inoculazione.
  4. Dopo 5 giorni, dividere casualmente i topi in cinque gruppi (n = 6 per gruppo): Gruppo modello (M) - Nessun trattamento; decotto XY gruppo a basso dosaggio (XY-L) - 1,3 g/kg; decotto XY gruppo a dose media (XY-Z) - 2,6 g/kg; decotto XY gruppo ad alto dosaggio (XY-H) - 5,2 g/kg; Gruppo cisplatino (DDP) - Trattato con cisplatino20.
  5. Sciogliere il decotto di polvere XY in 200 μL di acqua distillata alla dose corrispondente e somministrarlo tramite gavage. I gruppi M e DDP ricevono un volume uguale di acqua distillata tramite gavage.
  6. Somministrare cisplatino al gruppo DDP tramite iniezione intraperitoneale (3 mg/kg) una volta ogni 3 giorni. Iniettare lo stesso volume di soluzione fisiologica negli altri gruppi.

5. Analisi patologica del tessuto tumorale

  1. Dopo 21 giorni, sopprimere tutti i topi utilizzando l'asfissia da CO2 seguita da lussazione cervicale (seguendo le linee guida etiche) e asportare il tessuto tumorale21. Misurare il volume e il peso del tumore (Figura 4).
  2. Fissare i tessuti tumorali asportati in paraformaldeide al 4% per 24 ore). Disidratare il tessuto utilizzando soluzioni di etanolo graduato.
  3. Eliminare i blocchi di tessuto disidratato utilizzando lo xilene, quindi incorporarli nella cera di paraffina fusa. Lascia che la cera si solidifichi in un blocco di paraffina. Sezionare il blocco di tessuto in fette spesse 5 μm utilizzando un microtomo.
  4. Decerare le sezioni di tessuto in xilene, quindi reidratare in soluzioni di etanolo graduate. Macchiare le sezioni con ematossilina per 5 minuti, quindi risciacquare con acqua deionizzata.
  5. Controcolorare le sezioni con una soluzione di eosina allo 0,5% per 1 minuto. Osservare le sezioni colorate al microscopio ottico e acquisire immagini per l'analisi.

6. Analisi immunoistochimica del tessuto tumorale

  1. Eseguire la deceratura e la reidratazione seguendo le procedure descritte nei passaggi 5.2-5.4.
  2. Incubare le sezioni in un bloccante endogeno della perossidasi a temperatura ambiente per 15 minuti. Bloccare il legame non specifico incubando le sezioni con siero di capra.
  3. Applicare gli anticorpi primari: Ki-67 (1:600) e Caspasi-3 (1:100). Incubare le sezioni per una notte a 4 °C. Lavare con tampone PBS), quindi applicare un anticorpo secondario per uso generico (1:500) e incubare a 37 °C per 30 minuti.
  4. Sviluppa la reazione cromatica aggiungendo la soluzione DAB. Controcolorare le sezioni con una soluzione di ematossilina.
  5. Eseguire la disidratazione, la pulizia e la sigillatura delle sezioni macchiate. Osserva l'espressione proteica al microscopio ottico e acquisisci immagini per l'analisi.

7. Analisi del Western blot

  1. Omogeneizzare i tessuti tumorali utilizzando un lizzatore tissutale. Estrarre la proteina totale e determinarne la concentrazione utilizzando un kit per il dosaggio dell'acido bicinconninico (BCA) (vedere la Tabella dei materiali).
  2. Eseguire la quantificazione delle proteine, seguita dall'elettroforesi SDS-PAGE e dal trasferimento delle proteine su una membrana.
  3. Incubare la membrana per una notte a 4 °C con gli anticorpi primari: P38 (1:2000), p-P38 (1:1000), ERK (1:20000), p-ERK (1:500), JNK (1:2000), p-JNK (1:5000), β-actina (1:200) (vedi Tabella dei materiali).
  4. Il giorno successivo, incubare la membrana con un anticorpo secondario coniugato con perossidasi di rafano (HRP) a temperatura ambiente per 1,5 ore. Rileva le bande proteiche utilizzando un sistema di chemiluminescenza potenziata (ECL).
    NOTA: Le intensità delle bande proteiche sono state quantificate utilizzando il software ImageJ.

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Risultati

I campioni di polvere XY e siero del gruppo di controllo e del gruppo XY sono stati analizzati utilizzando UHPLC-QE-MS, rivelando picchi ben separati. I diagrammi di ionizzazione totale per le modalità di ioni positivi e negativi sono mostrati nella Figura 3. La composizione del decotto XY è stata identificata in base al tempo di ritenzione, alla modalità di acquisizione e ai frammenti dello spettro di massa. Quindici componenti per l'ingresso nel sangue sono...

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Discussione

L'incidenza del cancro è in aumento ogni anno, attirando un notevole interesse clinico e di ricerca22,23. Recenti studi hanno dimostrato l'efficacia della medicina tradizionale cinese (MTC) nel trattamento del cancro del polmone 24,25,26. Ad esempio, è stato dimostrato che il decotto di Maimendong aumenta il numero e l'attività delle cel...

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Dichiarazioni

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Ringraziamenti

Questo lavoro è stato sostenuto dal Piano di Sviluppo Scientifico e Tecnologico della Provincia di Jilin (YDZJ202301ZYTS459).

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
AcetonitrileCNW Technologies08/05/1975
2-Cloro-L fenilalaninaShanghai Hengbo Biotechnology Co., Ltd.103616-89-3
Soluzione di idrossido di ammonioCina National Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd.#2028
Anticorpo-β-actinaAbcamab8228
Anti-Erk1 (pT202/pY204) + Erk2 (pT185/pY187) AnticorpoAbcamab4819
Anti-ERK1/ERK2 AnticorpoAbcamab184699
Anti-JNK1 (pY185) + JNK2 (pY185) + JNK3 (pY223) AnticorpoAbcamab76572
Anticorpo Anti-JNK1/JNK2/JNK3 Abcamab208035
Anti-Ki67 AntibodyCell Signaling TechnologyGB121141
Anti-p38 (fosfo T180) AnticorpoAbcamab178867
Anticorpo Anti-p38 alpha/MAPK14 Abcamab170099
Kit per il dosaggio della concentrazione proteica BCABoster Biological Technology17E17B46
Albumina sierica bovina (BSA)DAKOBIOFROXX
Inibitore della fosfatasi ad ampio spettro (100x)Boster Biological TechnologyAR1183
C57bl/6 topiLiaoning Changsheng Biotechnology Co., Ltd.SCXK2021-0006
Colonna cromatograficaWatersACQUITY UPLC BEH C18 1.7 μ m2.1*100 mm
CisplatinoCina National Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd.232120
Soluzione per il recupero dell'antigene citrato (pH 6.0)Wuhan Baiqiandu Biotechnology Co., Ltd.B2010
Vetrino di coperturaJiangsu Shitai Laboratory Equipment Co., Ltd.10212432C
Fase criogenicaWuhan Junjie Electronics Co., Ltd.JB-L5
DABJiangsu Shitai Laboratory Equipment Co., Ltd.
Agitatore di decolorazioneBeijing Liu Yi Instrument FactoryWD-9405A
DisidratatoreWuhan Junjie Electronics Co., Ltd.JJ-12J
Forno di essiccazioneShanghai Huitai Instrument Manufacturing Co., Ltd.DHG-9140A
Dulbecco's modificato eagle mediumGibco8121587
EDTA (pH 8.0) Soluzione di recupero dell'antigeneWuhan Baiqiandu Biotechnology Co., Ltd.B2001
EDTA (pH 9.0) Soluzione per il recupero dell'antigeneWuhan Baiqiandu Biotechnology Co., Ltd.B2002
Tampone per elettroforesiNCM Biotech20230801
Macchina per l'inclusioneWuhan Junjie Electronics Co., Ltd.JB-P5
EosinChina National Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd.
EthanolChina National Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd.
Siero fetale bovinoGibco2166090RP
Acido formicoSIGMA64-18-6
GraphPad Prism softwareGraphPad software, LLCVersione 9.0.0
EmatossilinaCina National Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd.H3136
Cromatografia liquida ad alte prestazioniAgilent1260 Infinity II Prime
Centrifuga refrigerata ad alta velocitàThermo Fisher Scientific LegendMicro 17R
Spettrometria di massa ad alta risoluzioneThermo Fisher ScientificQ Exactive Focus
HRP coniugato capra anti-topoSeraCare5220-0341
Capra coniugata HRP Anti-ConiglioSeraCare5220-0336
Capra coniugata HRP Anti-Coniglio/Topo Anticorpo secondario universaleDAKOK5007
Capra coniugata HRP Anti-rattoSeraCare5220-0364
Coniglio coniugato HRP Anti-capraSeraCare5220-0362
Acido cloridricoCina National Pharmaceutical Group Reagente chimico Co., Ltd.H9892
Perossido di idrogenoCina National Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd.B12555
Kit di chemiluminescenza ECL ipersensibileNCM BiotechP10300
Software ImageJNational Institutes of Healthv1.8.0
Sistema di imagingNikon (Giappone)NIKON DS-U3
Cellule di carcinoma polmonare di LewisCina National Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd.
Panno a reteBaijie100110779650
Strumento di controllo della temperatura di riscaldamento in metalloBaiwan Electronictechnology Co., Ltd.HG221-X3
MetanoloAladinoM116118
MicropipettaDlab Scientific Co., Ltd.KE0003087/KA0056573
Vetrino per microscopioJiangsu Shitai Laboratory Equipment Co., Ltd.10212432C
MicrotomoShanghai Leica Instruments Co., Ltd.RM2016
Forno a microondeGalanz Microwave Electrical Appliances Co., Ltd.P70D20TL-P4
Balsamo neutroCina National Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd.
Microscopio otticoNikon (Giappone)Nikon Eclipse CI
FornoShanghai Huitai Instrument Manufacturing Co., Ltd.DHG-9140A
PAGE kit di preparazione rapida del gelBiosharpPL566B-5
ParaformaldeideCina National Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd.8.18715
Soluzione salina tamponata con fosfato (1x)Gibco8120485
Marcatore proteico colorato precolorato (10-180 kDa)Cywin Innovation (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.SW176-02
Tampone di caricamento delle proteine (5X)Boster Biological TechnologyAR1112
polverizzatoreShangzhiqiao Co., Ltd.DFT-100A
PVDF (0,45 μ m)Cywin Innovation (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.SW120-01
Soluzione di trasferimento rapido della membranaCywin Innovation (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.SW171-02
Lisato di RIPABoster Biological Technology Co., Ltd.AR0105
TBS tamponeNCM Biotech23HA0102
Stazione di lavoro di flottazione tissutaleJinhua Kedi Instrument Equipment Co., Ltd., provincia di Zhejiang.tampone transmembrana KD-P
NCM Biotech23CA2000
Tripsina (0,25%, 1x)HyCloneJ210045
Apparecchio di disgregazione cellulare ad ultrasuoniNingbo Xinyi ultrasonic equipment Co., Ltd.JY92-IIDN
Microscopio ottico verticaleNikon (Giappone)Nikon Eclipse CI
liofilizzatore sottovuotoLanjing Co., Ltd.HD-LG20D
Miscelatore a vorticeKylin-BellXW-80A
XileneCina National Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd.
Kit cromogenico 20052892129544935119002010410004160214736

Riferimenti

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