Tecniche efficienti per il campionamento completo di tessuti accessibili in Xenopus adulto

Summary

Questa è la prima parte di un protocollo di campionamento completo di Xenopus . I tessuti campionati sono il ventricolo cardiaco, il tronco arterioso, il lobo del fegato sinistro, la cistifellea, il polmone, il pancreas, la milza, la laringe, l'esofago, lo stomaco, l'intestino, i testicoli, i corpi adiposi, l'ovidotto, i reni accoppiati, il plesso sciatico, la pelle, il timo e l'intero occhio.

Abstract

Xenopus è stato a lungo un organismo modello fondamentale per lo studio dello sviluppo e della malattia dei vertebrati, offrendo approfondimenti sui processi cellulari e sulla funzione genica. Nonostante la ricchezza di informazioni sullo Xenopus embrionale, rimane una lacuna significativa nei metodi standardizzati per il campionamento di tessuti adulti, in particolare per approcci moderni come la proteomica quantitativa. Questo studio introduce un protocollo completo per il campionamento rapido, preciso ed efficiente di più tessuti in Xenopus adulto. Il protocollo affronta le sfide associate alle sottili differenze anatomiche rispetto ad altri anuri, garantendo la riproducibilità anche per coloro che hanno un'esperienza limitata nella dissezione delle rane. Questo protocollo è ottimizzato per analisi biochimiche di alta qualità, dando priorità alla freschezza del campione. Stiamo facilitando la raccolta rapida di un massimo di 18 tessuti in un'ora. Inoltre, i metodi si applicano a condizioni perfuse e non perfuse, fornendo flessibilità per una serie di esigenze sperimentali. Questo lavoro non solo colma una lacuna metodologica critica per Xenopus laevis e tropicalis , ma funge anche da risorsa preziosa per i ricercatori che adattano le tecniche a modelli di anfibi simili, migliorando così la portata e l'affidabilità degli studi biologici ed evolutivi comparativi.

Introduction

Xenopus offre vantaggi unici rispetto a topi, pesci zebra e altri organismi modello per lo studio delle malattie umane, in particolare in contesti di sviluppo ed evolutivi. Il suo sviluppo embrionale esterno e gli embrioni grandi e facilmente manipolabili consentono l'osservazione in tempo reale e gli interventi sperimentali (ad esempio, innesto di tessuti, editing genetico) che sono impegnativi nei topi, che si sviluppano internamente e richiedono procedure invasive. Inoltre, il cuore a tre camere e gli arti tetrapodi di Xenopus forniscono un ponte evolutivo più diretto per lo studio dei difetti congeniti

Protocol

Tutti gli esperimenti sono stati approvati ed eseguiti in conformità con le norme e i regolamenti della Harvard Medical School IACUC (Institutional Animal Care and Use Committee IS 00001365_3). Se si segue il protocollo di perfusione¹³ prima del campionamento, andare al passaggio 2.3.

1. Preparazione (senza perfusione)

1. Assicurarsi che l'istituto di ricerca abbia approvato la tecnica di eutanasia descritta nel presente protocollo.
2. Preparare una soluzione di 5 g/L di MS-222 (tricaina metansolfonato) e 5 g/L di bicarbonato di sodio (vedi Tabella dei materia....

Results

Seguendo tutte le fasi di questo protocollo, il ventricolo cardiaco, il tronco arterioso, il lobo epatico sinistro, la cistifellea, il polmone, il pancreas, la milza, la laringe, l'esofago, lo stomaco, l'intestino, i testicoli, i corpi adiposi, l'ovidotto, i reni accoppiati, il plesso sciatico, la pelle, il timo e l'intero occhio sono stati asportati in modo pulito entro un'ora dall'eutanasia (vedi Figura 1, Figura 2, Figura 3

Discussion

Il protocollo qui presentato è progettato per fornire flessibilità agli utenti a vari livelli di esperienza, garantendo al contempo la raccolta dei tessuti essenziali in modo tempestivo ed efficiente. Si consiglia ai nuovi utenti di seguire ogni passaggio del protocollo come descritto per garantire la raccolta sistematica dei tessuti. Gli utenti più esperti, tuttavia, possono scegliere di saltare alcuni passaggi e campionare solo i tessuti di cui hanno bisogno. Ad esempio, l'accesso alla.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
1x PBS	Corning	21-040-CV
Lente d'ingrandimento 5x con luce LED e supporto	amazon.com	B08QJ6J8P1	luce non deve produrre calore
Pipette di trasferimento monouso	VWR	414004-036
Pinze da dissezione a punta fine	Fisher Scientific	08-875
Forbici da dissezione affilate piont, dritte 6,5"	VWR	76457-374
I	Fisher Scientific	14-370-284	sono un'alternativa accettabile
Contenitore per eutanasia	Plastica USA	Articolo  2860	contenitori opachi alternativi accettabili
Coperchio del contenitore per eutanasia	US Plastic	Articolo  3047
Forbici per iridectomia 6"	VWR	470018-938	Le forbici per iride sono un'alternativa accettabile
MS-222: Sincaina (precedentemente tricaina)	Pentair AES	TRS1
Forcipe per tessuto dentale di ratto 5,5 pollici, acciaio inossidabile	Fisher Scientific	S08100
Bicarbonato di sodio, polvere, USP	Fisher Scientific	18-606-333
Pinza per campioni, perni a T seghettati	VWR	82027-442
per la dissezione	di Fisher Scinetific	S99385