Una tecnica minimamente invasiva a doppio nodo vivo per la modellazione di lesioni da ischemia-riperfusione miocardica nei ratti

Sommario

Qui, proponiamo uno schema per indurre un danno da ischemia-riperfusione miocardica mediante legatura a doppia bobina di nodo attivo mirata all'arteria coronarica discendente anteriore sinistra (LAD), che può essere rilasciata in vitro per la riperfusione su richiesta senza toracotomia secondaria ed è minimamente invasiva.

Abstract

Il modello di danno da ischemia-riperfusione miocardica (MI/RI) è di grande importanza nell'esplorare i meccanismi fisiopatologici dell'infarto del miocardio e nel facilitare lo sviluppo di farmaci pertinenti. Tuttavia, tra i metodi di modellazione comunemente usati, il tradizionale metodo di legatura dell'arteria coronarica assistita da tubo in polietilene presenta svantaggi significativi. Richiede la riapertura del torace per sciogliere la legatura, il che non solo richiede tempo, ma provoca anche danni sostanziali agli animali da esperimento e può facilmente portare alla loro morte. Lo scopo di questo studio è quello di introdurre un metodo di preparazione del modello migliorato. In questo metodo, l'arteria coronaria discendente anteriore sinistra (LAD) viene legata utilizzando una doppia bobina a nodo vivo e il nodo vivo può essere aperto in vitro per ottenere la riperfusione, evitando così una seconda procedura invasiva. Metodi di valutazione come il monitoraggio dell'elettrocardiogramma (ECG), la determinazione dell'ecocardiografia (ME) in modalità M, il blu di Evans e la colorazione con 2,3,5-trifenito-trazolio cloruro (EB-TTC) hanno dimostrato che questo metodo potrebbe indurre un MI/RI stabile. Questo schema di modelli MI/RI migliorato è caratterizzato dalla sua semplicità e velocità e il tasso di successo della modellazione è altamente soddisfacente. Nel complesso, offre una guida pratica e preziosa per i ricercatori impegnati nel campo della ricerca MI/RI.

Introduzione

Secondo l'Organizzazione Mondiale della Sanità, la malattia coronarica occupa una posizione significativa nel carico globale delle malattie cardiovascolari, caratterizzate da un'elevata incidenza, un'elevata mortalità e un alto tasso di complicanze. Inoltre, la malattia mostra un andamento sempre più giovane. Le statistiche di alcuni paesi sviluppati indicano che l'incidenza della malattia coronarica nella fascia di età compresa tra i 35 e i 40 anni è aumentata di circa il 15%-20% nell'ultimo decennio. I metodi di riperfusione come la trombolisi farmacologica, la terapia interventistica e l'innesto di bypass coronarico sono sicuri, efficaci e ampiamente utilizzati. Tuttavia, il brusco ripristino del flusso sanguigno aggrava frequentemente il danno strutturale e funzionale al miocardio ischemico, dando origine a una cascata di esiti avversi. Questi includono l'apoptosi e la necrosi dei cardiomiociti, le aritmie e la disfunzione sistolica, che culminano infine nel danno da ischemia-riperfusione miocardica (MI/RI)^1,2. L'incidenza del danno MI/RI è del 25%-30% e il suo meccanismo non è stato completamente chiarito³. Pertanto, l'esplorazione di strategie efficaci di prevenzione e trattamento è diventata una questione importante che deve essere affrontata in campo cardiovascolare.

I modelli animali sono di fondamentale importanza nella ricerca sulle malattie cardiovascolari. Servono come strumenti indispensabili per chiarire i meccanismi patologici dell'MI/RI e per sviluppare nuove strategie terapeutiche⁴. L'affidabilità e la stabilità del modello animale di danno da ischemia-riperfusione miocardica influenzano direttamente il successo della traduzione e dell'applicazione delle strategie di trattamento nella pratica clinica. L'arteria coronaria discendente anteriore sinistra (LAD) è un vaso comune affetto da ischemia miocardica⁵. Il modello MI/RI costruito legando il LAD è molto simile alla patogenesi e al processo patologico del danno da ischemia-riperfusione miocardica umana⁶. Tra questi modelli, il tradizionale metodo di legatura dell'arteria coronarica assistita da tubo in polietilene è stato ampiamente impiegato in studi precedenti. Il suo uso diffuso può essere attribuito a vantaggi come la distribuzione uniforme della forza di legatura e un grado di protezione per l'endotelio vascolare⁷. Tuttavia, nonostante i suoi numerosi vantaggi, i dettagli operativi rimangono al centro del dibattito tra molti ricercatori.

Per il tradizionale metodo di legatura dell'arteria coronarica assistita da tubo in polietilene, il torace deve essere riaperto per sciogliere la legatura durante la riperfusione. Attualmente, esistono due metodi operativi principali: il metodo di legatura classica della toracotomia e il metodo di legatura minimamente invasiva modificato. Il classico metodo di legatura della toracotomia richiede un'incisione su larga scala del torace per esporre completamente il cuore per la legatura⁶. Il metodo di legatura minimamente invasivo modificato utilizza strumenti speciali per completare la legatura attraverso un'incisione più piccola⁸. Nella fase di riperfusione, il classico metodo di legatura della toracotomia richiede la riapertura del torace per sciogliere la legatura, il che non solo richiede tempo, ma provoca anche gravi traumi agli animali da esperimento ed è probabile che porti alla loro morte. Inoltre, la toracotomia ripetuta può innescare complicanze come l'infezione, interferendo con l'accuratezza dei risultati sperimentali ^7,9. Inoltre, poiché il grado di ogni operazione di toracotomia è difficile da essere completamente coerente, aumenterà la variabilità dei dati sperimentali. Per quanto riguarda l'applicazione del metodo di legatura minimamente invasiva modificato, nonostante l'incisione più piccola, la procedura pone sfide tecniche significative. Richiede che gli sperimentatori possiedano competenze tecniche altamente avanzate e si affidino a strumenti di precisione di fascia alta, come uno stereomicroscopio. Se tentato in uno spazio ristretto senza l'ausilio di tali strumenti, c'è un rischio maggiore di danneggiare inavvertitamente i tessuti circostanti. Questo, a sua volta, può minare la stabilità e l'affidabilità dei risultati sperimentali.

Di conseguenza, vi è l'urgente necessità di un approccio rafforzato alla preparazione dei modelli per affrontare queste sfide. Questo studio presenta un metodo migliorato per la modellazione di MI/RI. Il metodo prevede l'utilizzo di una doppia bobina di nodo vivo per legare il LAD e consente il rilascio in vitro del nodo vivo per ottenere la riperfusione, ovviando così alla necessità di una seconda toracotomia. Caratterizzato dalla sua semplicità di funzionamento e facilità di padronanza, questo metodo può indurre costantemente un danno da ischemia-riperfusione miocardica, offrendo un prezioso riferimento e ispirazione ai ricercatori nel campo della MI/RI.

Protocollo

Il protocollo sperimentale è stato condotto in conformità con le linee guida del Comitato per l'uso e la cura e l'uso degli animali presso l'Università di Medicina Tradizionale Cinese ShaanXi (numero di registrazione: SUCML20240820006). Tutti i dati della ricerca sugli animali sono stati documentati seguendo le linee guida ARRIVE (Animal Research: Reporting In Vivo Experiments). Per questo studio sono stati utilizzati ratti maschi Sprague Dawley (SD) di peso compreso tra 250 g ± 20 g e di età compresa tra 6 e 8 settimane. Le specifiche relative agli animali, ai reagenti e alle attrezzature impiegate sono elencate nella Tabella dei materiali.

1. Preparazione preoperatoria

1. 1.1.Eseguire il digiuno: Sottoporre i ratti a un periodo di digiuno di 8 ore con libero accesso all'acqua
2. Calibrazione e pesatura: misurazione precisa del peso corporeo utilizzando una bilancia elettronica (precisione di 0,1 g) per calcolare la dose di anestetico.
3. Indurre l'anestesia: somministrare una soluzione di uretano al 20% tramite iniezione intraperitoneale alla dose di 0,4 ml per 100 g di peso corporeo utilizzando una siringa sterile da 2,5 ml; Iniettare 1 cm lateralmente alla linea mediana ventrale.
4. Confermare l'anestesia: Bloccare la zampa posteriore con una pinza sterile; L'assenza di riflesso di ritiro dell'arto conferma l'anestesia profonda.

2. Monitoraggio dell'elettrocardiogramma (ECG) (Figura 1, Passaggio 1)

1. Immobilizzare il ratto in posizione supina: fissare il busto e gli arti in una "postura con gli arti distesi" utilizzando del nastro adesivo medico sul tavolo operatorio.
2. Collegare gli elettrodi: inserire sottocutaneamente gli aghi degli elettrodi sterilizzati nella seguente sequenza: l'arto anteriore destro (collegato all'elettrodo bianco), l'arto posteriore destro (collegato all'elettrodo nero) e l'arto posteriore sinistro (collegato all'elettrodo rosso). Successivamente, collegare questi elettrodi a un monitor ECG Lead II. Assicurarsi che venga stabilita una linea di base stabile e che i complessi QRS siano chiaramente visibili sul monitor.
   NOTA: Mantenere il monitoraggio continuo dell'ECG durante tutta la procedura. Valuta la profondità dell'anestesia e lo stato del ratto in tempo reale tramite anomalie della forma d'onda.

3. Depilazione e disinfezione del sito chirurgico (Figura 1, Fase 2)

1. Depilazione meccanica: utilizzare un tagliacapelli elettrico per rimuovere il pelo dal collo e dal torace sinistro (lunghezza residua ≤0,5 mm).
   NOTA: Tenere la lama a un angolo di 30° e muoverla contro la direzione di crescita dei peli.
2. Depilazione chimica: applicare la crema depilatoria in modo uniforme sulla pelle esposta per 2 minuti. Rimuovere accuratamente con un raschietto sterile, seguito da un lavaggio pulsato con una siringa da 2,5 ml con soluzione fisiologica a 37 °C. Ripetere 3 volte fino a quando non rimangono residui.
3. Disinfezione graduale: disinfettare la pelle tre volte in cerchi concentrici (dall'interno all'esterno) con una miscela di etanolo e iodoforo al 75% (1:1) utilizzando batuffoli di cotone sterili.

4. Impostazione dei parametri del ventilatore

1. Controllo preoperatorio dell'apparecchiatura: collegare il circuito del ventilatore all'adattatore del tubo tracheale a forma di Y.
2. Regolare i parametri (Figura 1, Passaggio 3): Impostare i parametri specie-specifici: volume corrente 3,0 ml, frequenza respiratoria 80 respiri/min e rapporto inspiratorio-espiratorio (I:E) 2:1.
3. Verificare la pervietà del circuito: Attivare il ventilatore e immergere l'estremità del circuito in soluzione fisiologica. Osservare la formazione ritmica delle bolle. In caso di assenza, verificare sistematicamente la presenza di perdite e risolvere i problemi.

5. Intubazione tracheale

1. Posizionamento dell'incisione: Coprire il campo operatorio con un panno sterile. Sollevare la cute della cartilagine subtiroidea con una pinza affilata e praticare un'incisione longitudinale di 2,5 cm lungo la trachea utilizzando le forbici dritte.
2. Dissezione strato per strato: ritrarre la pelle con una pinza sterile (mano sinistra) ed eseguire una dissezione progressiva superficiale con microforbici (mano destra).
   NOTA: Limitare il primo strato all'epidermide e al derma; Evitare danni allo strato muscolare.
3. Esposizione tracheale (Figura 1, Passaggio 4): utilizzare una pinza emostatica per la dissezione smussata del platisma e i muscoli della cinghia per esporre 4-5 cartilagini tracheali. Mobilizzare la trachea con una pinza e posizionare un tubo di silicone sotto di essa per la stabilizzazione.
   NOTA: L'arteria carotide e il nervo vago possono essere visti su entrambi i lati della trachea, quindi evitare di danneggiare queste strutture durante l'operazione.
4. Intubazione tracheale ( Figura 1, Passaggio 5): creare un'incisione trasversale a forma di Ω (circa 1/3 di circonferenza) tra il 3° e il 4° anello di cartilagine tracheale utilizzando le microforbici. Inserire rapidamente un tubo endotracheale in silicone da 14 G, allineando il marcatore di profondità con il bordo dell'incisione.
   NOTA: Dopo l'intubazione, sincronizzare il movimento toracico con il ritmo del ventilatore. Monitorare la pressione delle vie aeree e la frequenza respiratoria per rilevare eventuali anomalie. Regolare le impostazioni del ventilatore o controllare la pervietà del tubo se si verificano deviazioni.

6. Preparazione dell'incisione intercostale

1. Segnare il sito dell'incisione: utilizzare un pennarello chirurgico sterile per delineare il bordo sternale sinistro al 3°-4° spazio intercostale (identificato dalla palpazione del punto di impulso apicale massimo). Disegna una linea longitudinale di 3,0 cm.
2. Dissezione strato per strato: sollevare la pelle con una pinza sterile e incidere lungo la linea segnata utilizzando forbici sterili. Inserire la pinza emostatica per via sottocutanea con un angolo di 30° ed eseguire la dissezione smussata parallelamente allo spazio intercostale per separare lo strato muscolare.
3. Sezione delle costole: sezionare la 3a e la 4a costola e i muscoli intercostali utilizzando le microforbici. Nota: se si verifica un'emorragia dell'arteria intercostale, applicare immediatamente un batuffolo di cotone sterile con una pressione decisa per 60 s per ottenere l'emostasi¹⁰.

7. Localizzazione e legatura dell'arteria discendente anteriore sinistra (LAD)

1. Confermare il sito di legatura (Figura 1, Passaggio 6): Espandere lo spazio intercostale a 4 cm utilizzando un divaricatore sternale per esporre il cuore. Sezionare delicatamente il pericardio (identificare il tessuto timico come la struttura bianca sopra il cuore). Individuare il LAD 2 mm più in basso rispetto al punto medio della "V" formata dal cono polmonare (protrusione conica dell'auricola destra) e dal padiglione auricolare sinistro (struttura valvolare triangolare).
2. Calibrazione dell'ago (Figura 1, Passaggio 7-1): Bloccare una sutura in polipropilene 6-0 (con ago) utilizzando micro-pinze. Entrare nel miocardio 1 mm lateralmente alla giunzione LAD medio-distale con un angolo di 15° rispetto alla superficie miocardica (profondità: 1 mm; larghezza: 2 mm), avanzando da destra a sinistra.
3. Tecnica del doppio nodo scorsoio (Figura 1, Passaggio 7-1 - 7-5): Dopo che il filo della legatura è stato fatto passare attraverso il miocardio, arrotolare un'estremità del filo della legatura con la punta dell'ago in una bobina con una pinza microscopica e infilare l'altra estremità nella bobina e tirarla delicatamente per stringere la fissazione. Annodare nuovamente l'altra estremità del filo della legatura ripetendo l'operazione di cui sopra per formare una struttura a doppio nodo e assicurandosi che le due estremità del filo della legatura siano lasciate parallele l'una all'altra al di fuori della cavità toracica.
   NOTA: Durante il processo di serraggio, sono state utilizzate micropinzette per stringere gradualmente con una forza delicata e uniforme, mentre sono stati osservati cambiamenti di colore del miocardio per determinare il grado di ischemia, in modo da evitare uno sforzo eccessivo che porta alla rottura del vaso o alla legatura insicura. Il successo della messa a punto del modello è stato confermato osservando il pallore ischemico della parete anteriore/regione apicale del ventricolo sinistro e l'elevazione sostenuta del segmento ST ≥ 0,2 mV sull'elettrocardiogramma, e il timer ischemico di 30 minuti è stato avviato immediatamente dopo aver confermato l'esito positivo della legatura.

8. Sutura e ripristino della pressione negativa toracica

1. Chiusura delle costole: rimuovere il divaricatore sternale. Chiudere i muscoli intercostali attorno alle costole 3-4 utilizzando una sutura riassorbibile 4-0 in uno schema di bloccaggio continuo (intervalli di punti di 2 mm).
   NOTA: Evitare il contatto tra la sutura di legatura e le suture di chiusura per evitare interferenze con la riperfusione.
2. Chiusura dello strato muscolare ed evacuazione dell'aria: approssimare i muscoli pettorali maggiori e minori superficiali con una sutura 4-0. Prima del serraggio finale, inserire una siringa da 2,5 ml senza ago nell'ultimo foro del punto di sutura per aspirare l'aria intratoracica mentre un assistente fissa la sutura.
   NOTA: Monitorare il movimento toracico per la respirazione spontanea (come indicato dal ritmo asincrono relativo al ventilatore).
3. Chiusura e disinfezione della pelle: suturare continuamente la pelle con sutura 4-0. Disinfettare tre volte seguendo le linee guida del Protocollo 3.3.

9. Disinnesto del ventilatore

1. Estubazione: Estrarre lentamente il tubo endotracheale osservando la respirazione spontanea.
2. Chiusura tracheale e muscolare: sutura longitudinale degli anelli di cartilagine tracheale utilizzando una sutura 4-0 per garantire una chiusura ermetica. Riapprossimare i muscoli del collo.
3. Chiusura e disinfezione della pelle (Figura 1, Passaggio 8): Chiudere la pelle del collo con una sutura 4-0. Disinfettare utilizzando tamponi sterili imbevuti di etanolo e iodio povidone. Rimuovere i teli e trasferire il ratto su un termoforo a 38 °C per la riperfusione.
   NOTA: Se la respirazione spontanea non riesce, reinserire il tubo endotracheale e ripetere i passaggi 8.1-8.3 prima di ritentare l'estubazione.

10. Ischemia-riperfusione

1. Allentare la legatura (Figura 1, Passaggio 9): Dopo 30 minuti di ischemia, sciogliere il primo nodo tirando orizzontalmente il filo di legatura a un'estremità dell'ago di fasciatura, quindi sciogliere il secondo nodo tirando il filo di legatura all'altra estremità, quindi tirando orizzontalmente da un lato all'altro per assicurarsi che non ci sia resistenza che dimostri che il doppio nodo è stato sciolto con successo.
   NOTA: Se è richiesta la doppia tintura EB-TTC, la linea di legatura non può essere estratta.
2. Convalida della riperfusione: confermare la risoluzione del segmento ST all'ECG come prova del successo della riperfusione¹².

11. Determinazione dell'ecocardiografia (ME) in modalità M 10

1. Preparazione pre-procedura: A 2 ore dalla riperfusione, valutare la profondità dell'anestesia e integrare se necessario. Immobilizzare il ratto supino e applicare 2 mm di gel per ultrasuoni a 37 °C sulla regione precordiale.
2. Acquisizione dati: Accensione dell'ecografo. Seleziona il protocollo preimpostato, imposta la sonda MX250 su 18 MHz e registra immagini in modalità M del movimento ventricolare sinistro. Salva le immagini in modo appropriato.
3. Analisi dei dati: calcola la frazione di eiezione ventricolare sinistra (LVEF), l'accorciamento frazionario (LVFS), il diametro telesistolico (LVID), il diametro telediastolico (LVIDd) e la gittata sistolica (SV) utilizzando il software integrato nel sistema.
   NOTA: Acquisizione dei dati da ≥3 cicli cardiaci consecutivi; Riporta i valori medi per il rigore statistico.

12. Colorazione con blu di Evans e cloruro di 2,3,5-trifenito-trazolio (EB-TTC)

1. Reintubazione: rimuovere in sequenza le suture dalla pelle del collo, dai muscoli e dalla trachea. Inserire un tubo endotracheale e collegarlo al ventilatore per mantenere la respirazione.
2. Ritoracotomia: rimuovere i punti di sutura dalla pelle del torace, dai muscoli e dalle costole. Utilizzare un divaricatore toracico per allargare lo spazio intercostale ed esporre completamente il cuore.
3. Religate l'arteria LAD: Re-ligate l'arteria LAD; confermare il successo della legatura osservando il pallore apicale e l'elevazione persistente del segmento ST all'ECG.
4. Iniettare EB: utilizzando una siringa da insulina da 0,5 mL, aspirare 0,3 mL di soluzione di Evans Blue all'1,5%. Quindi, sezionare rapidamente l'arco aortico, inserire l'ago della siringa nell'aorta e fissarlo con un morsetto micro-emostatico. Quindi, iniettare la soluzione di Evans Blue e osservare il cuore per una colorazione blu uniforme.
5. Asportare il cuore: Dopo 30 s dall'iniezione, asportare il cuore con forbici sterili. Immergerlo immediatamente in soluzione fisiologica e risciacquare ripetutamente per rimuovere i residui di sangue e Evans Blue. Congelare il cuore a -80 °C.
6. Sezionare il cuore: Dopo 20 minuti di congelamento, rimuovere il cuore. Utilizzando una lama chirurgica, tagliare cinque fette trasversali di 1 mm di spessore perpendicolari all'asse lungo cardiaco dall'apice alla base.
7. Macchiare con TTC: Lasciare che le fette si equilibrino a temperatura ambiente. Trasferirli in una provetta da centrifuga ambrata da 50 ml contenente una soluzione TTC all'1,5%. Incubare la provetta in un agitatore termostatico preriscaldato a 37 °C per 30 minuti in condizioni di protezione dalla luce.
8. Acquisizione e analisi delle immagini: Dopo la colorazione, fissare le fette in paraformaldeide per 12 ore. Acquisisci immagini ad alta risoluzione e quantifica l'area dell'infarto (IA), l'area a rischio (AAR) e l'area ventricolare sinistra totale (LV) utilizzando il software Image J. Calcolare il rapporto infarto miocardico come IA/(AAR+IA) e il rapporto ischemia-rischio come (AAR+IA)/LV, seguendo la metodologia descritta da Cai et al¹².

Risultati

ECG
L'elettrocardiogramma è stato registrato durante tutto il processo da prima della legatura del cuore di ratto a 120 minuti dopo l'ischemia-riperfusione. Le variazioni dell'elettrocardiogramma sono mostrate nella Figura 2A. Durante l'ischemia, il segmento ST mostrava un'elevazione arcuata verso l'alto e l'onda T era alta e a picco. Dopo la riperfusione, l'elevazione del segmento ST è gradualmente diminuita.

Discussione

La legatura dell'arteria coronarica, un metodo classico per stabilire il modello di danno da ischemia-riperfusione miocardica, ha un grande significato nella ricerca sulle malattie cardiovascolari¹². Dagli anni '80, il metodo di legatura dell'arteria coronarica assistita da tubo in polietilene, sperimentato da Yamamoto et al., è stato ampiamente adottato nei laboratori di ricerca scientifica di tutto il mondo. Questo metodo offre numerosi vantaggi, tra cui la forz...

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Siringa da insulina da 0,5 mL	Wuxi Yushou Medical Equipment Co.	https://e.tb.cn/h.6NJ9o4dBdpXt4bT?tk=YobMVflhtgI	Utilizzato per assorbire EB e iniettare attraverso l'arco aortico.
2,3,5-trifenito-trazoliocloruro	Shanghai Yuanye Biotechnology Co., Ltd.	S19026	Per la colorazione del cuore
Siringa sterile monouso da 2,5 ml	Robust Ping An Medical Technology Co., Ltd.	20231230	Utilizzato per aspirare anestetici e anestetizzare ratti mediante iniezione intraperitoneale; utilizzato per estrarre aria dalla cavità toracica dei ratti durante le operazioni a torace chiuso.
4 % paraformaldeide	Guangzhou Viggs Biotechnology Co., Ltd.	SW002	Utilizzato per fissare il cuore dopo aver colorato
la sutura 4-0	Shandong Haidike Medical Products Co., Ltd.		Per cucire costole, muscoli e pelle
Sutura 6-0	Jiangsu Beiyueshen Medical Device Co., Ltd.	https://e.tb.cn/h.6NKQ9XNVD1J56np?tk=R8NKVfPJIUM	Per la legatura della LAD
Ago per agopuntura	Pechino Luoya Shanchuan Medical Equipment Co.	https://e.tb.cn/h.6NQZzrSfBLQ9OYZ?tk=yW5aVfPuXP3	Utilizzato per perforare la pelle degli arti di ratto e collegare la linea dell'elettrodo dell'elettrocardiogramma.
Rimozione di peli di animali	Jinyun New Concept Household Products Co.	https://e.tb.cn/h.6NJe67IEMgxPfUt?tk=9boIVflb6mm	Per la depilazione
Crema depilatoria	Guangzhou Miyanshe Brand Management Co., Ltd.	https://3.cn/2fP-knZw	Per la depilazione profonda
Etanolo	Tianjin Tianli Reagente Chimico Co., Ltd.	https://e.tb.cn/h.6NnxsK8EAvBV1Zu?tk=ja1XVflVhfM	Per la disinfezione
Evans Blue	Sigma	E2129	Per la colorazione del cuore
Pinze emostatiche	Shanghai Aide Medical Instrument Co.	https://e.tb.cn/h.6NQkHWD25dxnsv4?tk=xA1VVflTXjW	Utilizzato per fissare la siringa da insulina e fermare il sangue dell'arco aortico.
Micro forbici mediche	Nanjing Ji Xiaobao Trading Co.	https://e.tb.cn/h.6NJu33PgNRJCO1L?tk=smZjVflr730	Usato per aprire la trachea e le costole
Pinzette microscopiche mediche	Nanjing Ji Xiaobao Trading Co.	https://e.tb.cn/h.6Nqn2dyJIUjUN6n?tk=MEMaVflGK0b	Per pizzicare la sutura 6-0 per legare il
bisturi medico	Shandong Boryuida Analytical Instrument Co.	https://e.tb.cn/h.6NJyfb9CWH5Sj32?tk=HW0kVflEyOL	Per il taglio del cuore durante la colorazione EB-TTC
Forbici mediche	Shandong Boryuida Analytical Instrument Co.	https://e.tb.cn/h.6NJCLzckQnXXEPe?tk=CtcTVflFJQw	Usato per tagliare la pelle di ratto e suturare.
Panno medico chirurgico	Henan Meideqi Medical Equipment Co.	https://e.tb.cn/h.6NqItN9yA0xttr9?tk=cCCIVflzFjr	Utilizzato per fornire un'area chirurgica sterile
Nastro medico	Zhejiang Aotai Medical Technology Co.	https://e.tb.cn/h.6N93etxLPPlJ9ZQ?tk=DfblVflAo5d	Usato per riparare i topi
Pinzette mediche	Jiangsu Videocon Medical Technology Co.	https://e.tb.cn/h.6NreHXQv2YTJkIl?tk=S1imVfO17QV	Utilizzato per giudicare il grado di anestesia nei ratti, bloccare la pelle, le costole e altri tessuti e staccare i muscoli sottocutanei e il pericardio.
Agente di accoppiamento ad ultrasuoni medico	Fornitore verificato - Qingdao Hainuo Biological Engineering Co., Ltd.	https://3.cn/2fPpwB-j	Utilizzato per migliorare l'efficienza della trasmissione ultrasonica
Soluzione salina normale	Fornitore verificato - Shandong Qidu Pharmaceutical Co., Ltd.	https://e.tb.cn/h.6NMCUFJIti2EsiU?tk=FXBBVfOV1iN	Utilizzato per il lavaggio dei residui di crema depilatoria
Ecografo portatile color Doppler	VINNO Technology Co., Ltd.	Vinno 6	Utilizzato per la determinazione dell'ecocardiografia M-mode nei ratti
Povidone iodio	Shandong Anjie High-tech Disinfection Technology Co., Ltd.	https://e.tb.cn/h.6NqAb4WsT3xjMb9?tk=mhFxVfO4G1G	Per la disinfezione
placca chirurgica per ratti	Shandong Boryuida Analytical Instrument Co.	https://e.tb.cn/h.6NQyjjGNGInF3Eu?tk=qgQwVflHilH	Usato per riparare i topi
Frigorifero frigorifero	Zhejiang Zhixing Ultra-low Temperature Technology Co.	DL-78	Per congelare il cuore
Tubi in gel di silice	Shandong Chengwu Sano Medical Equipment Co.	https://e.tb.cn/h.6N9L82XWNGlgDDG?tk=pWzCVfOQIgN	Utilizzato per sostenere la trachea
Macchina per la respirazione artificiale per piccoli animali	Anhui Zhenghua Biological Equipment Co., Ltd.	DW-3000H	Usato per aiutare i ratti a respirare dopo la toracotomia
Batuffolo di cotone sterile	Fornitore verificato - Qingdao Hainuo Biological Engineering Co., Ltd.	https://e.tb.cn/h.6NJbKVmD0b7QhTf?tk=wMceVfOTrBX	Per immergere la disinfezione con etanolo e iodio povidone
batuffolo di cotone sterile	Qingdao Hainuo Biological Engineering Co., Ltd.	https://e.tb.cn/h.6NMAQz1252EJHSM?tk=nyfLVfOUSBi	Utilizzato per pulire il sangue residuo nella cavità toracica
Coperta di isolamento termico	Guangdong Zhongke Life Science & Tecnologia Co.	Per l'isolamento postoperatorio del corpo nei ratti
Divaricatore per toracotomia	Guangdong Zhongke Life Science & Tecnologia Co.	https://e.tb.cn/h.6NQra4Z9UG8dnvo?tk=6eFUVfllCFW	Utilizzato per esporre il campo visivo chirurgico
Elettrocardiogramma di tipo II	Chengdu Taimeng Technology Co., Ltd.	BL-420N	Per il monitoraggio dell'elettrocardiogramma
Uretano	Shandong Keyuan Biochemical Co., Ltd.	U820333	Utilizzato in ratti anestetizzati
Oscillatore a temperatura costante dell'acqua	Shanghai Boxun Medical Biological Instrument Co., Ltd.	SHZ-B	Per la colorazione del cuore