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Articolo metodologico

Metabolomica spaziale multimodale con imaging con spettrometria di massa guidata al microscopio nel medio infrarosso

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DOI:

10.3791/68709

25 luglio 2025

* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

Presentiamo un flusso di lavoro di metabolomica spaziale multimodale che integra l'imaging con spettrometria di massa (MSI) e l'imaging nel medio infrarosso (MIR) sulla stessa sezione di tessuto per analisi metaboliche e biochimiche spazialmente risolte.

Abstract

La metabolomica spaziale è un campo in rapida evoluzione per mappare la distribuzione dei metaboliti all'interno di tessuti, organi e persino singole cellule. Questo approccio fornisce informazioni metaboliche contestuali, fondamentali per comprendere l'eterogeneità biochimica dei sistemi biologici. L'imaging nel medio infrarosso (MIR) e l'imaging con spettrometria di massa (MSI) sono emersi come approcci potenti per la metabolomica spaziale, ognuno dei quali offre vantaggi unici e complementari. In questo studio, presentiamo un flusso di lavoro per l'esecuzione dell'imaging MIR e della ionizzazione di desorbimento laser assistita da matrice MSI (MALDI-MSI) sulla stessa sezione di tessuto, che comprende procedure sperimentali, co-registrazione dell'imaging, integrazione dei dati e analisi bioinformatiche. L'imaging MIR viene impiegato come modalità a monte, consentendo l'analisi biochimica non distruttiva dei tessuti. Successivamente, una matrice viene depositata nel tessuto per MALDI-MSI, guidata dalle informazioni spaziali ottenute dall'imaging MIR. Le immagini vengono integrate dopo la co-registrazione, consentendo l'analisi metabolomica spaziale multimodale utilizzando strumenti bioinformatici avanzati come Seurat. L'integrazione dell'imaging MIR e dell'MSI rappresenta un progresso trasformativo nella metabolomica spaziale, offrendo opportunità senza precedenti per esplorare la complessità spaziale e chimica dei processi metabolici sia in salute che in malattia. Questo approccio multimodale ha un potenziale significativo per guidare le innovazioni nella scoperta di biomarcatori, nella diagnostica delle malattie e nello sviluppo terapeutico.

Introduzione

La metabolomica spaziale prevede la mappatura dei metaboliti all'interno del loro contesto tissutale nativo integrando l'imaging con spettrometria di massa (MSI) o altre tecniche spazialmente risolte, con l'analisi metabolica, offrendo informazioni sul metabolismo a risoluzione sub-tissutale, cellulare o subcellulare 1,2,3,4,5,6,7,8 . Tra queste modalità di imaging, la ....

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Protocollo

Il protocollo è stato condotto in conformità con il protocollo sperimentale sugli animali (DSF-2024-004) approvato dal Comitato istituzionale per la cura e l'uso degli animali (IACUC) del Laboratory Animal Resources Center dell'Università di Fudan.

NOTA: Questo studio fornisce un flusso di lavoro per l'esecuzione di imaging MIR e MALDI-MSI sulla stessa sezione di tessuto. Questo approccio integrato comprende procedure sperimentali, co-registrazione di immagini, fusione di dati e analisi bioinformatiche a valle (Figura 1C). L'imaging MIR viene utilizzato come modalità a monte, c....

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Risultati

Per convalidare la strategia di metabolomica spaziale multimodale sopra descritta, l'abbiamo implementata in un modello murino di cancro. Le cellule tumorali sono state geneticamente modificate per esprimere la proteina fluorescente verde (GFP), consentendo una localizzazione precisa della regione tumorale attraverso l'imaging a fluorescenza. La Figura 2A mostra i risultati dell'imaging QCL-MIR label-free con una copertura spettrale di 950-1800 cm-1, nota come "regione delle impro.......

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Discussione

Qui, presentiamo una strategia di metabolomica spaziale multimodale che integra l'imaging MSI e MIR per consentire un profilo metabolico ad alto rendimento e molecolarmente specifico sugli stessi campioni. L'imaging MIR consente una mappatura chimica non distruttiva e senza marcatura basata su vibrazioni molecolari, fornendo informazioni dettagliate sui gruppi strutturali e funzionali. Al contrario, l'MSI offre un'elevata sensibilità e specificità per l'identificazione e la quantificazio.......

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Dichiarazioni

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Ringraziamenti

Ringraziamo il Dr. Yilong Zou della Westlake University per il supporto sull'imaging MALDI2-MSI e l'ufficio Bruker Scientific Technology Co., Ltd. di Shanghai per l'assistenza sull'imaging MIR basato su QCL. Ringraziamo anche il Dr. Shuguo Sun, Università di Scienza e Tecnologia di Huazhong per aver gentilmente fornito i topi KrasLSL-G12D/+ Tp53fl/fl Rb1fl/fl ZsgreenLSL . Questo studio è supportato da sovvenzioni del Programma principale per le malattie croniche non trasmissibili-National Science and Technology (2023ZD0500400 a LS, GW e DY), della National Natural Science Foundation of China....

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Paraformaldeide al 4%, soluzione di fissazione tissutaleSangon Biotech 
Albumina sierica bovinaSigma Aldrich126615
C57BL/6JNifdc topiCharles River219
CaF2 vetriniCrystranCAFP25-1
Microtomo CriostatoDakewe BiotechCT520
CytospecPeter LaschVersione 2.10.01Software per l'analisi dei dati MIR, inclusa la correzione della linea di base, la normalizzazione, la generazione di immagini e l'analisi iperspettrale.
tampone DPBSFisher Scientific 14-190-250
Siero fetale bovinoGibco10270106
LiofilizzatoriLABCONCOFreeZone
Gelatin Sigma-AldrichG1890Tipo A, da tampone HBSS per pelle suina
Sangon Biotech
DMEM ad alto contenuto di glucosioThermoFisher Scientific 
MatlabMathWorksMatlab R2024aSoftware per l'analisi dei dati MIR, tra cui correzione della linea di base, normalizzazione, generazione di immagini e analisi iperspettrale.
Sistema di imaging per spettrometria di massa a ionizzazione a ionizzazione con desorbimento laser assistito da matrice (MALDI-MSI)Bruker Daltonics GmbH.timsTOF fleX MALDI-2
MetanoloSinopharm Reagente chimico10014108
mMassInstitute of Entomology, Centro di Biologia dell'Accademia Ceca delle Scienze, Repubblica CecaVersione 5.5.0Software per l'analisi dei dati MSI. Importa i dati MSI grezzi in SCILS Lab per la pre-elaborazione. Esegui il prelievo di picco in mMass con intensità relativa > 0,01%.
Matrice N-(1-naftil) etilendiammina dicloridrato (NEDC) Sigma Aldrich222488
Penicillina-streptomicinaThermoFisher Scientific 
Microscopia a medio infrarosso (QCL-MIR) con laser a cascata quantistica... Bruker Optics GmbHLUMOS II ILIM
Fosforo rossoSigma-Aldrich8.0727
SCiLS LabBruker DaltonicsSCiLS Lab 2024bSoftware per l'analisi dei dati MSI. Importa i dati MSI grezzi in SCILS Lab per la pre-elaborazione. Esegui il prelievo di picco in mMass con intensità relativa > 0,01%.
SpruzzatoreHTX TechnologiesTM
Tripsina, 0,25% EDTAThermoFisher Scientific 
E672002A0032101056401115140122C25200072

Riferimenti

  1. Alexandrov, T. Spatial metabolomics: From a niche field towards a driver of innovation. Nat Metab. 5 (9), 1443-1445 (2023).
  2. Gilmore, I. S., Heiles, S., Pieterse, C. L. Metabolic imaging at the single-cell scale: Recent advances in mass spectrometry im....

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Imaging nel medio infrarossoMALDI MSIco registrazione delle immaginianalisi bioinformaticamappatura dei metaboliti tissutaliimaging multimodaleeterogeneit metabolicascoperta di biomarcatori

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