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Articolo di ricerca

amalago come sinergizzante insetticida ecologico nella gestione di Aedes aegypti

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DOI:

10.3791/68723

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24 ottobre 2025

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1Caribbean Centre for Research in Biosciences, Natural Products Institute, University of the West Indies, 2Life Sciences, University of the West Indies, 3The Mosquito Control Research Unit, Department of Life Sciences, University of the West Indies, 4Cell Therapy Institute, Paracelsus Medical University, 5Vector Group, Liverpool School of Tropical Medicine

In questo articolo

Sommario

Gli estratti etanolici di Piper amalago var. amalago dimostrano effetti sinergici se usati con deltametrina contro Ae. aegypti. L'attività sinergica dimostrata è il risultato del suo principio attivo, la piperina, che è un inibitore dei CYP noti per essere sovraregolati nelle zanzare che mostrano resistenza agli insetticidi.

Abstract

La resistenza agli insetticidi mette a dura prova la gestione di Ae. aegypti, il principale vettore dei virus dengue, chikungunya e Zika nei Caraibi e in America Latina. Lo sviluppo di nuove strategie di gestione dei vettori è fondamentale per ridurre la trasmissione delle sue malattie. I Piper spp., tradizionalmente utilizzati per le loro proprietà culinarie, hanno dimostrato attività insetticida. amalago, una varietà originaria dei Caraibi e dell'America Latina, come sinergizzanti insetticidi, composti che sono moderatamente tossici per gli insetti ma aumentano la tossicità se usati in combinazione con insetticidi sintetici.

È stata valutata la tossicità della deltametrina su Ae. aegypti raccolti sul campo utilizzando il biotest del flacone CDC. Dopo aver confermato la resistenza, sono stati preparati estratti di etanolo o esano dalle parti aeree del Piper amalago var. Gli estratti sono stati applicati alle successive generazioni di Ae. aegypti allevate in laboratorio. Delle frazioni preparate, l'estratto di etanolo a stelo era la più potente, con valori di LD50 di 0,007 mg/mg (estratto vegetale/peso corporeo di Ae. aegypti femminile). L'estratto di etanolo ha dimostrato un effetto sinergico con la deltametrina utilizzando un biotest in flacone CDC modificato. La mortalità è aumentata dal 22% ± 0,42% con la sola deltametrina, alla dose di 10 μg di principio attivo in 30 minuti al 96% ± 0,17% con l'applicazione di estratto di etanolo staminale (LD25 = 2,2 μg/mg) seguito da deltametrina alla dose e al tempo indicati. Gli studi GC-MS hanno dimostrato che la piperina è il composto più abbondante negli estratti preparati. Lo studio dimostra l'uso di Piper amalago var. amalago come efficace sinergizzante contro Ae. aegypti.

Introduzione

Aedes aegypti è un'importante zanzara antropofila vettore in America Latina e nei Caraibi (LAC)1. Diversi fattori, tra cui l'accesso a un'adeguata fornitura di acqua pulita, la qualità dei servizi sanitari pubblici, i cambiamenti nei modelli meteorologici, i movimenti umani e il commercio hanno facilitato non solo la distribuzione di questo vettore opportunistico, ma anche la distribuzione degli agenti patogeni trasmessi dalla specie 2,3 in tutta la regione 1,4. Il vettore depone indiscriminatamente in recipienti che raccolgono l'umidità all'interno e intorno alle abitazioni umane e le sue uova sono resistenti alla siccità, consentendo la sopravvivenza in condizioni ambientali difficili5. Le zanzare Ae. aegypti sono vettori adattati alla temperatura con tassi di schiusa delle uova, alimentazione del sangue e trasmissione virale che aumentano con l'aumentare delle temperature 6,7,8,9. Le zanzare Ae. aegypti sono in grado di trasmettere i flavivirus (dengue, Zika, virus del Nilo occidentale, febbre gialla) e un alfavirus (chikungunya)1, prendendo di mira gli ospiti umani nei paesi endemici. Ad eccezione della febbre gialla, i vaccini per i patogeni trasmessi da Aedes spp. sono ancora in fase di sviluppo o di sperimentazione preclinica o non sono prontamente disponibili10,11. L'introduzione di nuovi virus trasmessi da Aedes nella regione tra il 2013 e il 2016, insieme all'aumento delle osservazioni di casi di dengue dal 2019 12,13,14, ha fatto precipitare la necessità di una migliore gestione del vettore Aedes all'interno del LAC15.

Le principali strategie di controllo per Ae. aegypti prevedono l'uso di insetticidi sintetici. I sintetici commerciali sono utilizzati dalle agenzie di sanità pubblica per controllare le popolazioni di Ae. aegypti per ridurre i focolai di malattie16,17, dagli agricoltori del settore agricolo per controllare i parassiti delle colture 16,18,19 e dalla popolazione generale nelle loro case 18,20,21 . Queste sostanze chimiche sono generalmente aspecifiche e hanno un impatto negativo sull'ambiente a causa della loro non selettività. L'uso eccessivo di questi insetticidi ha portato all'evoluzione della resistenza nelle zanzare19. La resistenza agli insetticidi in questo vettore si traduce in un ciclo infinito di aumento dell'uso degli insetticidi per ottenere efficacia19, a meno che non venga interrotto22. L'esplorazione di metodi nuovi ed efficaci per il controllo delle popolazioni di zanzare Aedes aegypti è importante per prevenire la trasmissione dei loro agenti patogeni che causano malattie23,24.

Le piante hanno sviluppato metaboliti secondari che sono tossici per gli insetti o scoraggiano l'alimentazione. Pertanto, le piante e i loro metaboliti presentano possibili sostanze chimiche biorazionali efficaci che possono fornire nuove alternative per gestire sia gli insetti vettori fitofagi che ematofagi 23,25,26,27,28,29. La regione LAC ospita un'ampia varietà di piante30 e le comunità all'interno della regione hanno una forte conoscenza delle piante e delle loro proprietà curative31. Più dell'80% delle persone provenienti dai paesi in via di sviluppo si affida all'uso di piante per compensare il costo della medicina allopatica 32,33,34. Le piante abitualmente utilizzate nella medicina tradizionale sono note per avere metaboliti secondari unici che hanno aggiunto valore sia all'industria farmaceutica35 che a quella agricola26,35. La biodiversità del bacino LAC 30,31,36 si presta alla scoperta di metaboliti vegetali unici che possono fornire alternative agli insetticidi chimici sintetici, che possono essere meno tossici per l'uomo e altri organismi 26. Gli insetticidi a base vegetale possono ridurre la dipendenza dagli insetticidi sintetici commerciali e, per estensione, ridurre le pressioni selettive associate allo sviluppo della resistenza agli insetticidi nelle zanzare.

Numerosi studi hanno dimostrato l'attività insetticida di estratti preparati dal genere Piper (Piperaceae), un genere noto per la sua ricca diversità chimica 23,27,28,31,37,38. Piper amalago L., originario dell'ALC, con tre varietà intraspecifiche39, due delle quali si trovano in Giamaica, sono tradizionalmente utilizzate per trattare le malattie digestive 31,40,41; Tuttavia, il loro potenziale come insetticidi e/o sinergizzanti di insetticidi appare poco esplorato 23,42,43. L'estratto di radice di esano-acetone di Piper amalago var. nigrinodum (C. DC) Yunck., un endemico giamaicano, ha fornito una nuova ammide, acido pirrolidide 7-(3',4'-metilendiossifenil)-2E,4 E-eptadienoico, che era tossico per le larve di Ae. aegypti 42. amalago, originaria dei Caraibi, tra cui la Giamaica, e l'America tropicale meridionale39, estratto di olio essenziale di foglie, ha dimostrato il potenziale come controllo biologico per prevenire la riproduzione di farfalle che si nutrono di agrumi43. Questo estratto di olio di foglie può avere un potenziale nell'industria agricola. L'estratto etanolico della foglia e del gambo di Piper amalago var. amalago era moderatamente tossico per l'Anopheles gambiae23 allevato in laboratorio. Da parti di piante appartenenti al genere Piper sono stati estratti diversi composti con una gamma di valori farmacologici, con i composti eluiti che variano in funzione della polarità del solvente di estrazione e del tipo di estrazione 41,42,44,45,46,47,48,49. Basandosi su metaboliti attivi con attività insetticida già ottenuti da Piper amalago 27,28,50, continuiamo a esplorare l'attività insetticida di Piper amalago var. In questo studio, gli effetti dell'etanolo e degli estratti di esano di Piper amalago var. amalago sono stati esplorati come insetticida e sinergizzante della deltametrina contro Ae. aegypti, nonché il potenziale meccanismo d'azione.

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Protocollo

Preparazione di estratti vegetali
Un primo esemplare di Piper amalago var. amalago è stato raccolto nel febbraio 2018 e lasciato asciugare all'aria per un periodo di 72 ore. L'esemplare è stato identificato dal botanico e dal curatore dell'erbario. L'esemplare è stato montato, con i numeri di voucher 36616 e 36617, e depositato nell'erbario dell'Università delle Indie Occidentali, Mona, Giamaica. Successivamente sono stati raccolti campioni di piante per preparare estratti di etanolo o esano. Le estrazioni sono state condotte come segue: le foglie, gli steli, le foglie e gli steli essiccati sono stati polverizzati e poi immersi in 350 mL di etanolo o esano di grado analitico per 72 ore. Dopo il periodo di 72 ore, ogni estratto è stato filtrato per aspirazione utilizzando un imbuto Büchner rivestito con carta da filtro da 90 mm, con una pompa a vuoto collegata, per separare le particelle vegetali dall'estratto. L'estratto è stato quindi concentrato mediante evaporazione rotante, decantato e posto sotto una cappa aspirante per rimuovere il solvente in eccesso23. Di ogni estratto si è ottenuta la massa finale. Per prevenire la possibile ossidazione degli estratti, il materiale vegetale è stato raccolto ed estratto di routine.

Allevamento di zanzare
Le larve e le pupe di Ae. aegypti sono state raccolte dai siti di riproduzione delle zanzare nelle comunità delle parrocchie di Kingston e St. Andrew (KSA), Jamaica51, inizialmente, nel settembre 2019, e sono state allevate le generazioni successive (F1- F 12). Le zanzare sono state mantenute a una temperatura costante di 27 ± 2 °C e al 70% ± 10% di umidità in un'incubatrice. I ceppi di New Orleans (NO) Ae. aegypti sono stati utilizzati come ceppo di controllo per tutti gli esperimenti. Di routine, le larve venivano mantenute in vassoi e nutrite con pellet di koi fino alla pupa. Le pupe sono state rimosse e trasferite in tazze in gabbie per l'allevamento di insetti per ceppo. Alle zanzare adulte è stato fornito il 10% di saccarosio ad libitum. Successive raccolte di zanzare sono state condotte per mantenere le loro popolazioni vicine a quelle delle zanzare catturate sul campo.

Test di resistenza agli insetticidi (IR)
La suscettibilità del ceppo KSA alla deltametrina è stata valutata utilizzando il test in bottiglia dei Centers for Disease Control and Prevention (CDC) 52,53,54. I biotest in bottiglia sono stati effettuati su femmine adulte di età compresa tra 3 e 5 giorni. Gli adulti non alimentati con sangue (n = 20-25) sono stati trasferiti dalla loro gabbia con un aspiratore alimentato da aspirazione per inalazione in flaconi da 250 mL, prerivestiti con deltametrina alla dose diagnostica CDC di 10 μg/flacone. I flaconi di controllo sono stati pre-rivestiti con acetone. La mortalità è stata registrata ogni 15 minuti fino a 2 h53,54. Le zanzare erano considerate morte se non erano in grado di stare in piedi53,54. L'esperimento è stato ripetuto tre volte. Le zanzare di prova sono state classificate come suscettibili o resistenti utilizzando la linea guida CDC53,54.

Dosaggio insetticida - Applicazione topica
Ogni estratto vegetale preparato è stato risospeso in etanolo per ottenere una soluzione madre iniziale (1 mg/μL) e ulteriormente diluito in serie (0-0,25 mg/μL) utilizzando etanolo. L'estratto risospeso è stato applicato localmente al torace di zanzare femmine adulte di 3-5 giorni non alimentate con sangue (n = 10) seguendo i metodi precedentemente pubblicati 23,24,55. In breve, le zanzare femmine sono state trasferite dalla loro gabbia utilizzando un aspiratore per inalazione a tazze e anestetizzate/abbattute sul ghiaccio. L'estratto risospeso, 0,2 μL, è stato applicato al torace dorsale utilizzando una siringa da 10 μL della serie 700 montata su un dosatore ripetuto. Per il gruppo di controllo, l'etanolo, 0,2 μL, è stato applicato localmente. Dopo ogni esposizione al trattamento, le zanzare sono state trasferite in bicchieri di carta e alimentate con una soluzione di saccarosio al 10%. Eventuali cambiamenti nel volo o nell'andatura delle zanzare sono stati osservati per le prime 5 ore successive all'esposizione iniziale. La mortalità è stata registrata a 24 ore in condizioni standard per gli insetti. Ogni concentrazione del saggio è stata condotta in triplicato. L'esperimento è stato condotto due volte.

Saggi sinergici
Per determinare il potenziale dell'estratto come sinergizzante, è stato utilizzato un saggio biologico in bottiglia modificato con un sinergizzante23. Le zanzare femmine non nutrite con sangue, di 3-5 giorni (n = 20-25), sono state esposte localmente all'estratto vegetale alla concentrazione di dose letale del 25% (LD25) mentre erano anestetizzate/abbattute, come descritto sopra. Le zanzare sono state trasferite in una tazza a rete e osservate per 1 ora. Dopo 1 ora di volo attivo, le zanzare sono state delicatamente rimosse dalle tazze con un aspiratore alimentato da aspirazione da inalazione55 e poi trasferite in flaconi prerivestiti con 10 μg di deltametrina (totale flaconi rivestiti = 4). L'etanolo è stato utilizzato come agente di controllo per applicazioni topiche. I flaconi di controllo sono stati rivestiti con acetone. Il tasso di mortalità è stato osservato ogni 15 minuti fino a 2 ore o fino al raggiungimento del 100% di mortalità. L'efficacia dell'estratto come sinergizzante è stata confrontata con quella di un sinergizzante noto, il piperonil butossido (PBO), come suggerito in precedenza53,54. Inizialmente, le zanzare sono state esposte a bottiglie trattate con 400 μg di PBO per 1 ora. Dopo l'esposizione di 1 ora, le zanzare sono state trasferite in tazze a rete e alimentate con una soluzione di zucchero al 10%. Dopo 1 ora, le zanzare sono state trasferite delicatamente con l'aiuto dell'aspiratore in flaconi rivestiti con 10 μg di deltametrina (totale flaconi rivestiti = 4)53,54. Le zanzare sono state osservate ogni 15 minuti fino a 2 ore o fino al raggiungimento del 100% di mortalità. L'esperimento è stato condotto tre volte.

Caratterizzazione di estratti vegetali mediante gascromatografia - spettrometria di massa (GC - MS) e cromatografia liquida ad alta prestazione (HPLC)
L'estratto di P. amalago var. amalago è stato analizzato mediante sistema GC-MS accoppiato ad un rivelatore selettivo di massa con colonna DB-5 ms (60 m × 0.25 mm; spessore del film 0.25 μm). L'elio puro è stato utilizzato come gas di trasporto a una velocità di flusso di 1 mL/min. Il programma di temperatura è stato avviato a 45 °C e aumentato a una velocità di 1 °C/min fino a 280 °C, dove la velocità è stata poi aumentata a 2 °C/min. Le temperature dell'iniettore e del rivelatore sono state mantenute rispettivamente a 210 °C e 220 °C. Il volume di iniezione dell'estratto era di 1 μL. Gli indici di ritenzione sono stati calcolati utilizzando la procedura di Kovats. I composti all'interno dell'estratto sono stati identificati attraverso un confronto dei dati spettrali di massa con quelli della libreria del National Institute of Standards and Technology Mass Spectral Database (NIST) 17, come descritto in precedenza56.

L'identificazione del composto presente è stata ottenuta mediante confronto dell'estratto con uno standard di riferimento mediante HPLC. La separazione dell'estratto è stata effettuata mediante HPLC in fase stazionaria. La colonna utilizzata era C-18, con il 75% di acetonitrile e il 25% di acqua come solventi. L'estratto è stato standardizzato rispetto al fitochimico chiave identificato con un'affidabilità del 99% dall'analisi GC-MS.

Saggi CYP in vitro per zanzare
La cinetica di Michaelis-Menten è stata inizialmente calcolata per CYP9J32 (90 pmol/mL; Km 19,52 μM), la concentrazione utilizzata nel test inibitorio. I saggi CYP sono stati condotti utilizzando l'estratto di piperina purificato disciolto in una concentrazione finale di acetonitrile dello 0,1%. Il substrato fluorogenico, DEF, è stato disciolto in DMSO. La concentrazione finale di DMSO è stata dello 0,5%. È stato testato un solvente di controllo preparato con DMSO allo 0,5% e acetonitrile finale allo 0,1% per correggere eventuali effetti dei solventi nell'intervallo di diluizione. Come riferimento per confrontare le proprietà inibitorie della piperina, la deltametrina e il PBO sono stati utilizzati come controlli standard. La procedura ha seguito metodi simili a quelli descritti in precedenza23. Le reazioni enzimatiche sono state condotte in piastre a 96 pozzetti, in una soluzione tampone di fosfato di potassio 50 mM con 5 mM di MgCl2, regolata a pH 7,4, variando la concentrazione del composto in esame. Tutte le reazioni sono state preincubate a 37 °C per 5 minuti, mantenendo i 420 giri/min su un agitatore. Per avviare la reazione è stato aggiunto un sistema generatore di NADPH, costituito da NADP+ (0,001 mM), glucosio-6-fosfato (0,025 mM) e glucosio-6-fosfato deidrogenasi (5 unità/mL). Il volume finale in ciascun pozzetto era di 200 μL. Le reazioni sono state monitorate a 485 nm/530 nm (eccitazione/emissione) utilizzando uno spettrofotometro a fluorescenza con incubatore e agitatore. I dati inibitori sono presentati come media ± errore standard della media (SEM). I saggi sono stati eseguiti in triplice copia.

Modellazione dell'omologia
I modelli strutturali preliminari per CYP9J32 (Ae. aegypti) sono stati costruiti utilizzando AlphaFold57. Il gruppo eme è stato posizionato seguendo un allineamento strutturale con Homo sapiens CYP3A4 (PDB ID: 6DAA)58. È stata condotta una simulazione di dinamica molecolare delle coordinate strutturali per CYP9J32 in acqua utilizzando i parametri precedentemente descritti23.

Docking molecolare
Le coordinate finali della simulazione di dinamica molecolare sopra descritta sono state utilizzate per condurre analisi di docking molecolare con piperina utilizzando un protocollo23 precedentemente descritto.

Analisi dei dati
I dati di tossicità con l'uso di insetticidi sono presentati come % di mortalità ± deviazione standard (SD). I saggi di tossicità degli estratti vegetali sono stati condotti in triplicato. I dati dei test di tossicità dell'estratto vegetale sono presentati come dosi letali (concentrazione dell'estratto vegetale per peso corporeo di Ae femmina. Aegypti) al 50% e al 95% di mortalità ± intervallo di confidenza fiduciale del 95% (IC 95%) per popolazione (versione R 3.6.2). La mortalità nel gruppo di controllo per tutti i test di tossicità è stata inferiore al 20%. La formula di Abbott è stata utilizzata per correggere il tasso di mortalità in ciascun gruppo trattato quando necessario,72. Le analisi statistiche sono state completate utilizzando SPSS per Windows (versione 17.0). L'analisi unidirezionale della varianza (ANOVA) è stata utilizzata per determinare le differenze significative (p < 0,05) tra le medie, ove possibile.

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Risultati

La suscettibilità di Ae. aegypti raccolti a Kingston e St. Andrew (KSA), Giamaica, al biotest della bottiglia CDC; La dose discriminante di deltametrina è stata valutata misurando la mortalità delle zanzare per deltametrina (10 μg di principio attivo) al tempo diagnostico di 30 minuti. La mortalità per deltametrina è stata osservata fino a 2 ore. Le zanzare catturate in natura erano resistenti alla deltametrina, con una mortalità compresa tra lo 0% e il 22%, mentre il ceppo suscettibile di New Orleans (NO) è mor...

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Discussione

amalago, una pianta originaria dei Caraibi e dell'America Latina, come insetticida e sinergizzante della deltametrina contro Ae. aegypti. Sono stati preparati estratti etanolici ed esano delle parti aeree dell'impianto. Tutti gli estratti etanolici hanno provocato una mortalità del 100% entro 24 ore (Tabella 1). La preparazione dello stelo ha avuto il maggiore effetto tossico contro l'Aedes aegypti, anche se molto meno efficace rispet...

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Dichiarazioni

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Ringraziamenti

Siamo grati al signor M.T. Babumon per il supporto con i test GC-MS e HPLC.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Flaconi da 250 mLWheaton Industries, DWK Scienze della vitaN/ASaggio di tossicità
Siringa serie 700 Hamilton, NV, Stati UnitiN/ASaggio di tossicità
Carta da filtro da 90 mmWhatmanN/ASaggio di estrazione
Acetone (99%) Fisher Bioreagent (NJ, USA)https://www.fishersci.com/shop/
prodotti/acetone-99-thermo-
scientific/AAL104070F#?
parola chiave=Acetone%2099%		Soluzione di dissoluzione, reagente di controllo
Acetonitrile (99,8%)Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, Stati Uniti)https://www.sigmaaldrich.com/
GB/en/search/acetonitrile-(99.8%25)
?focus=products& pagina=1& perpage
=30& sort=rilevanza& term=
acetonitrile%20%2899.8%
25%29& tipo=prodotto		Soluzione di dissoluzione
Piastre nere a 96 pozzetti Thermo Labsystems, Basingstoke, Regno UnitoN/ASaggio enzimatico
Colonna DB-5 ms  (60m &volte; 0.25 mm; 0.25 μ m spessore del film)Hewlett-PackardN/AIdentificazione del metabolita secondario attivo nella pianta
Deltametrina (98%)Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, Stati Uniti)https://www.sigmaaldrich.com
/GB/en/search/deltamethrin-
(98%25)?focus=products& pagina
=1& perpage=30& sort=rilevanza
& termine=deltametrina%20%2898
%25%29& tipo=prodotto		Insetticida standard
Dietossifluoresceina (DEF; 98,1%)Cypex Ltd. (Dundee, Regno Unito)531001-10Saggio enzimatico
Dimetilsolfossido (DMSO) (99,9%)Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, Stati Uniti)https://www.sigmaaldrich.com/
GB/en/search/dimetil-solfossido
-(dmso)-(99.9%25)?focus=products
& pagina=1& perpage=30& sort=
rilevanza& term=dimetil%20solfossido
%20%28DMSO%29%20%2899.9%
25%29& tipo=prodotto		Soluzione di dissoluzione
Etanolo (99%)Fisher Bioreagent (NJ, USA)https://www.fishersci.com/us/
en/catalog/search/products?
keyword=Etanolo+%2899%25%29		Soluzione di dissoluzione, reagente di controllo
Sistema GC–MS Agilent Technologies, CA, Stati UnitiAgilent 7820 AIdentificazione del metabolita secondario attivo nella pianta
Sistema GC–MS Agilent Technologies, CA, Stati UnitiAgilent 7820 AIdentificazione del metabolita secondario attivo nella pianta
Glucosio-6-fosfatoSigma-Aldrich (Gillingham, Regno Unito)https://www.sigmaaldrich.com/
GB/en/search/glucosio-6-fosfato?
focus=products& pagina=1& perpage
=30& sort=rilevanza& termine=glucosio
-6-fosfato& tipo=prodotto		Saggio enzimatico
Glucosio-6-fosfato deidrogenasi Sigma-Aldrich (Gillingham, Regno Unito)https://www.sigmaaldrich.com/GB
/it/cercare/glucosio-6-fosfato-
deidrogenasi?focus=prodotti
& pagina=1& perpage=30& sort=
rilevanza& termine=glucosio-6-fosfato
%20deidrogenasi& tipo=prodotto		Saggio enzimatico
Esano (98%)Fisher Bioreagent (NJ, USA)https://www.fishersci.com/us/
en/catalog/search/products?
keyword=Hesane+%2898%25%29		Soluzione di dissoluzione
IncubatriceShel Lab, Sheldon Manufacturing, Stati UnitiL127Allevamento di insetti
Gabbie per allevamento di insettiBugdorm, TaiwanN/AAllevamento di insetti
Cloruro di magnesioSigma-Aldrich (Gillingham, Regno Unito)https://www.sigmaaldrich.com/
GB/en/search/magnesium-
chloride?focus=products& pagina
=1& perpage=30& sort=rilevanza
& term=Magnesio%20cloruro& tipo=prodotto		Saggio enzimatico
Rivelatore selettivo di massa Agilent Technologies, CA, Stati UnitiAgilent 5975Identificazione del metabolita secondario attivo nella pianta
Nicotinammide adenina dinucleotide fosfato (NADP+)Sigma-Aldrich (Gillingham, Regno Unito)https://www.sigmaaldrich.com/
GB/en/search/nicotinamide-
adenina-dinucleotide-fosfato
-(nadp%2B)?focus=products&
pagina=1& perpage=30& sort=rilevanza
& termine=nicotinamide%20adenina%
20dinucleotide%20fosfato%20
%28NADP%2B%29& tipo=prodotto		Saggio enzimatico
Erogatore ripetitivo PB600 Hamilton, NV, Stati UnitiSaggio di tossicità
Piperina (97%) Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, Stati Uniti)https://www.sigmaaldrich.com/
GB/en/search/piperine-(97%25)?dym
=piperidina%20%2897%25%
29%2Cpiperazine%20%2897%
25%29& focus=prodotti& pagina=1
& perpage=30& sort=rilevanza&
termine=piperina%20%2897%25%
29& tipo=prodotto		Standard composto
Piperonil butossido (PBO; 90%)Fluka, Buchs (Svizzera)N/AInsetticida piretroide standard
Fosfato di potassioSigma-Aldrich (Gillingham, Regno Unito)https://www.sigmaaldrich.com/
GB/en/search/potassio-fosfato?
focus=products& pagina=1& perpage
=30& sort=rilevanza& termine=potassio
%20fosfato& tipo=prodotto		Saggio enzimatico
Evaporatore rotante Bü chii (DE, USA)B-481Saggio di estrazione
SigmaPlot v. 10.Systat Software IncVersione 10.0Saggio enzimatico
HPLC in fase stazionariaAgilent Technologies, CA, Stati UnitiAgilent serie 1100Identificazione del metabolita secondario attivo nella pianta
Pompa a vuoto GAST (Stati Uniti)0523-V4-G588DXSaggio di estrazione
Varioskan ThermoFisher, Regno UnitoN/ASaggio enzimatico, spettrofotometro a fluorescenza con incubatore e agitatore

Riferimenti

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