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Articolo metodologico

Preparazione di tessuti neovascolari da tessuti gliomatici umani per l'analisi proteomica quantitativa dell'angiogenesi tumorale

496 visualizzazioni

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DOI:

10.3791/69547

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20 marzo 2026

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1Shandong Provincial Key Laboratory of Precision Oncology, Shandong Cancer Hospital and Institute, Shandong First Medical University & Shandong Academy of Medical Science, 2Shandong Provincial Key Medical and Health Laboratory of Ovarian Cancer Multiomics, & Jinan Key Laboratory of Cancer Multiomics, Shandong First Medical University & Shandong Academy of Medical Science, 3School of Medicine, Wayne State University, 4Department of Pathology, The Second Xiangya Hospital, Central South University, 5Hunan Clinical Medical Research Center for Cancer Pathogenic Genes Testing and Diagnosis,, 6Department of The 1st General Surgery, The Third Xiangya Hospital, Central South University

In questo articolo

Sommario

Questo protocollo ha preparato con successo tessuto neovascolare di alta qualità sufficiente da campioni di glioma utilizzando microdissezione a cattura laser per l'analisi proteomica quantitativa dell'angiogenesi tumorale, superando i limiti degli studi che tradizionalmente si concentrano principalmente sui fattori angiogeni e fornendo un profilo proteomico su larga scala dell'angiogenesi del glioma.

Abstract

Il glioma rappresenta tumori maligni primari del sistema nervoso centrale con incidenza e mortalità significative. L'angiogenesi tumorale è il segno distintivo della fisiopatologia del glioma ed è un evento importante nell'ambiente tumorale. La struttura aberrante della neovascolarizzazione tumorale svolge un doppio ruolo: fonte di apporto di nutrienti e portale metastatico che consente l'invasione delle cellule tumorali nel flusso sanguigno. La terapia anti-angiogenesi è un argomento caldo nel campo del cancro. La maggior parte degli studi precedenti si concentra sui fattori attivanti e inibitori dell'angiogenesi tumorale; Tuttavia, questo chiarisce solo l'angiogenesi tumorale in un intervallo molto limitato. Espressione proteica anomala o modifiche post-traduzionali contribuiscono alla morfologia anomala dei vasi sanguigni nel glioma. Questo protocollo utilizzava la microdissezione a cattura laser (LCM) per isolare e purificare una quantità adeguata di tessuti neovascolari dai tessuti gliomatici, che veniva impiegato per l'analisi proteomica quantitativa marcata con isotopi per identificare proteine differenzialmente espresse nei tessuti neovascolari gliomici rispetto ai controlli. Questi dati forniscono una base scientifica cruciale per chiarire i meccanismi patologici dell'angiogenesi tumorale, scoprire bersagli terapeutici anti-angiogenici e costruire biomarcatori basati sull'angiogenesi tumorale.

Introduzione

I gliomi sono tumori altamente eterogenei del sistema nervoso centrale (SNC) che hanno origine dalle cellule gliali e forniscono supporto strutturale e metabolico aineuroni 1, e sono classificati istologicamente in sottotipi: astrocitomi, oligodendrogliomi ed ependimomi2. Secondo il sistema di classificazione dell'OMS, i gliomi di grado I e II sono i gliomi di basso grado (LGG), tipicamente caratterizzati da tassi di crescita lenti e potenziale stabilità a lungo termine, spesso adatti a una resezione chirurgica in base alla posizione anatomica. Al contrario, i gradi III e IV sono i gliomi di alto grado (HGG), prevalentemente indifferenziati e maligni con comportamenti altamente invasivi e una prognosisfavorevole 3. I trattamenti attuali restano limitati e in gran parte inefficaci; Sebbene la massima resezione sicura combinata con radioterapia/chemioterapia post-operatoria migliori moderatamente la prognosi, persistono limitazioni e tossicità significative a causa della crescita diffusa infiltrativa dei tumori e dei confini indistinti che impediscono la resezioneradicale 4,5. I gliomi umani, in particolare quelli di alto grado di glioma, sono tumori maligni altamente vascolari la cui crescita, proliferazione e invasione dipendono fortemente dalla loro anomalizzazione neovascolare, che è un segno fondamentale della malignitàdel glioma 6,7. Lo studio sull'angiogenesi del tumore targeting vanta significativi meriti scientifici per le scoperte terapeutiche.

L'angiogenesi coinvolge fondamentalmente la proliferazione, la migrazione e la differenziazione delle cellule endoteliali sotto stimoli specifici, con ricerche focalizzate sui regolatori: (i) induttori, tra cui fattore di crescita endoteliale vascolare (VEGF)8, vasorina (VASN)9, fattore inducente di ipossia 1 (HIF1)10, fattore di crescita trasformante β (TGF-β)11, endocan12, fattore di crescita derivato dalle piastrine (PDGF)13 e fattore di crescita epidermico (EGF)14; e (ii) inibitori, tra cui angiostatina15,endostatina 16, ricevitore del fattore attivatore piastrinico-1 (TSP-1)17 e inibitori tissutali delle metalloproteinasi (TIMPs)18. Negli studi clinici di fase I/II/III sui tumori cerebrali, la maggior parte dei farmaci anti-angiogeni mira la segnalazione del VEGF grazie al suo ruolo centrale nell'angiogenesi, esemplificato dal bevacizumab, un anticorpo monoclonale che inibisce la neovascolarizzazione tramite il bloccoVEGF 19,20,21. Tuttavia, recenti studi di fase II/III non hanno mostrato benefici complessivi significativi nella sopravvivenza per i pazienti con glioblastoma avanzato che hanno ricevuto bevacizumab più lomustina rispetto alla lomustina sola 19,20,21,22. In modo fondamentale, la terapia anti-VEGF migliora le anomalie vascolari ma sopprime solo l'angiogenesi senza citotossicità tumorale diretta e può indurre resistenza al trattamento. Di conseguenza, mirare a uno o pochi regolatori angiogenici non riesce a ottenere una cura radicale; Strategie efficaci richiedono la soppressione concomitante dell'angiogenesi e il blocco dell'invasione e delle metastasi tumorali tramite vie vascolari. Il valore diagnostico e prognostico delle proteine nei gliomi è ben consolidato, tuttavia il trattamento del glioma maligno ha registrato progressi limitati nel corso dei decenni.

La proteomica può analizzare globalmente tutte le proteine nei campioni biologici, inclusi profili di espressione, modifiche post-traduzionali (PTM) e interazioni, utilizzando tecniche basate sulla spettrometria di massa (MS), inclusi approcci top-down (TDP) e bottom-up (BUP). La sclerosi multipla ad alta produttività consente l'identificazione di decine di migliaia di proteine per ogni serie, rendendola essenziale per lo studio dei meccanismi tumorali e l'identificazione dei bersagli terapeutici. L'abbondanza proteica e i suoi PTM possono essere identificati nei tessuti gliomici e nelle biopsie liquide come sangue e i suoiderivati 23,24,25, liquido cerebrospinale 26 eurine 27. Per la vascolarizzazione tumorale, espressioni proteiche anomale e PTM guidano cambiamenti vascolari patologici. Le alterazioni proteiche nella neovascolarizzazione del glioma possono essere identificate con la proteomica, che guida lo sviluppo di protocolli per una profilazione proteomica affidabile della neovascolarizzazione del glioma.

Tuttavia, i tessuti neovascolari sono solo uno dei componenti presenti nell'intero tessuto glioma. L'isolamento e la purificazione dei tessuti neovascolari dall'intero tessuto gliomico è il passo chiave per un'analisi accurata della proteomica quantitativa dell'angiogenesi del glioma. La microdissezione a cattura laser (LCM)28,29,30,31 è un approccio efficace per isolare e purificare i tessuti neovascolari da interi tessuti gliomati. È molto difficile ottenere una quantità sufficiente di proteine tissulari neovascolari per la proteomica quantitativa. Nel 2007, un team di ricerca ha cercato di utilizzare la LCM per separare i tessuti neovascolari dal glioma di grado IV per l'analisi proteomica, identificando solo quattro proteine con MS32. Successivamente, nel 2012, hanno utilizzato continuamente la LCM per arricchire i tessuti neovascolari dei gliomi di grado IV per analisi proteomica quantitativa, che ha identificato solo 29 proteine con MS33. Questi due studi di proteomica sull'angiogenesi del glioma mostrano una portata proteomica molto bassa nell'angiogenesi del glioma, che non può rappresentare il complesso paesaggio proteomo dell'angiogenesi del glioma.

Questo protocollo sviluppò una procedura che consente l'acquisizione di quantità sufficienti di proteine neovascolari per l'analisi proteomica quantitativa dell'angiogenesi del glioma, costruendo così un paesaggio proteomico su larga scala dell'angiogenesi tumorale. Questo ha un valore scientifico significativo per la scoperta di biomarcatori efficaci basati sull'angiogenesi e bersagli/farmaci terapeutici anti-angiogenesi.

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Protocollo

Questo protocollo che coinvolge campioni di tessuto umano è stato approvato dal Medical Ethics Review Committee della Shandong First Medical University (Approvazione n. R202211090133), e il consenso informato è stato ottenuto dai pazienti e dalle loro famiglie. I campioni di glioma utilizzati in questo studio sono stati tutti prelevati da campioni neurochirurgici resezionati del reparto di neurochirurgia del Xiangya Hospital della Central South University, inclusi 7 casi di tessuti di astrocitoma grado III. I normali vasi di controllo (n = 3) sono stati prelevati da microvasi all'interno di tessuto cerebrale danneggiato rimosso a causa di un trauma cerebrale. Tutti i pazienti erano pazienti alla prima esperienza senza radioterapia o chemioterapia precedente prima dell'intervento, e tutti sono stati diagnosticati dal dipartimento di patologia dell'Ospedale Xiangya, Central South University. Tre tessuti vascolari di controllo normali sono stati ottenuti dalla resezione neurochirurgica di vasi sanguigni molto piccoli da danni cerebrali normali da forza esterna (senza glioma) presso l'ospedale Xiangya. I reagenti e le attrezzature utilizzate sono elencati nella Tabella dei Materiali.

1. Utilizzo della LCM per isolare tessuti neovascolari da tessuti gliomatici umani

  1. Prepara il vetrino LCM: Applica manualmente la membrana di naftalato di polietilene (PEN) su vetrini metalliche riutilizzabili e conserva i vetrini rivestiti a -80 °C.
    NOTA: Verranno utilizzate vetrine metalliche pre-rivestite per aderire direttamente alle sezioni di tessuto congelato.
  2. Prepara la soluzione di colorazione con blu di toluidina (0,5%): sciogli 0,25 g di blu di toluidina in 40 mL ddH₂O. Aggiungi una compressa inibitrice di proteasi e mescola fino a disciolto. Regola il volume a 50 mL con ddH₂O, filtra e conserva sul ghiaccio.
  3. Tessuto di processo: mantenere il criostato alla temperatura operativa (camera -25 °C/testa campione). Recuperare tessuto gliomico da una conservazione a -80 °C, trasferire sul ghiaccio, rimuovere il sangue con carta filtrante e selezionare i blocchi di tessuto appropriati per l'infondimento.
  4. Protocollo di inserimento del tessuto: Disco del campione pre-raffreddato. Applica il mezzo di incorporazione e immergi rapidamente il blocco di tessuto (tissue block). Congela tutto il blocco a -25 °C per 10 minuti per indurirlo.
  5. Tessuto di sezione e vasi di schermo: tessuti di sezione di 8 μm di spessore. Montare sezioni di tessuto su vetrine standard, colorare il tessuto con una soluzione di colorazione di toluidina blu e selezionare i vasi neovascolari sotto microscopia ottica.
    NOTA: Se non vengono rilevati vasi, si eliminano 3–5 sezioni di tessuto e si ripete il ciclo di colorazione fino a quando non compaiono le regioni dei vasi neovascolari.
  6. Montare la sezione di tessuto vasopositivo sul vetrino LCM preparato: trasferire le sezioni positive sul vaso su vetrine LCM rivestite con PEN, sigillare, etichettare e conservare a -80 °C.
  7. Fissare le sezioni di tessuto montate sul vetrino LCM in etanolo al 70% pre-raffreddato (4 °C, 1–2 min); drenare e tingere allo 0,5% di blu di toluidina (4 °C, 30 s); Svuotare la macchia, risciacquare due volte in ddH₂O (4 °C; due bagni separati), scolare, incubare in soluzione inibitrice di proteasi (30 s) e conservare a -80 °C.
  8. Avvia lo strumento LCM in anticipo, preriscalda per 30 minuti, usa un laser a infrarossi a stato solido per preriscaldare per altri 30 minuti, e poi installa un dispositivo di raccolta a tubo microcentrifuga da 500 μL.
  9. Carica le fette LCM montate sul campione di tessuto (conservate a -80 °C) sullo strumento LCM preparato e regola la messa a fuoco sui vasi neovascolari nei tessuti gliomici con l'assistenza del software compatibile.
  10. Delinea con precisione la linea di marcatura laser lungo il bordo esterno del vaso neovascolare (evita la parete vascolare), usa il laser per bruciare e separare i vasi neovascolari, e poi raccoglili nel tappo del tubo EP.
    NOTA: Usa la seconda combustione laser per assicurarti che i vasi neovascolari si siano completamente staccati.
  11. Inverti e sigilla il tubo di campione del vaso neovascolare raccolto e conservalo in un congelatore a -80 °C.

2. Estrazione di proteine da tessuti neovascolari gliomatici isolati con LCM e quantificazione del contenuto proteico

  1. Prepara un tampone proteico di estrazione contenente 4% di dodecilsolfato di sodio (SDS), 1 mM di ditiotreitolo (DTT) e 150 mM di Tris-HCl (pH 8,0).
    NOTA: La SDS è una polvere pericolosa che irrita gravemente occhi, pelle e le vie respiratorie, che devono essere pesate in una cappa aspirante; e la DTT è un irritante, che deve essere pesato in una cappa a fumo.
  2. Sospensa i tessuti del vaso neovascolare gliomatico raccolti da LCM nel tampone di estrazione. Sonica su bagno d'acqua ghiacciata per 1 minuto per una lisi completa.
  3. Centrifugare a 16.000 x g per 10 minuti e trasferire il surnante in nuovi tubi microcentrifughe.
  4. Un supernatant aliquota minimo per la quantificazione delle proteine. Aggiungi la DTT al supernadante rimanente (concentrazione finale: 1 mM di DTT), mescola delicatamente pipettando per evitare bolle. Alochi e conserva a -80 °C.
  5. Esegui il test proteico dell'acido bicinconinico (BCA) seguendo i passaggi seguenti:
    1. Preparare la soluzione operativa (Reagente A:B = 50:1).
    2. Prepara albumina sirica bovina (BSA) standard (0,5 mg/mL).
    3. Aggiungi le soluzioni corrispondenti secondo la Tabella 1.
    4. Mescola campioni/standard con la soluzione di lavoro e trasferisci su una piastra da 96 pozzi.
    5. Incubare a 37 °C per 30 minuti.
    6. Misura l'assorbenza a 562 nm.
    7. Calcola le concentrazioni rispetto alla curva standard.

3. Utilizzo della proteomica quantitativa per analizzare le proteine neovascolari preparate

  1. Prepara campioni peptidici triptici delle proteine neovascolari estratte.
    1. Aggiungere acetone gelato a ogni campione proteico estratto (tumore; controllo) (campione: acetone = 1:5, v/v), mescolare accuratamente e incubare a -20 °C per 1 ora. Centrifuga a 12.000 x g (4 °C) per 15 minuti. Scartare il soprandanzante per rimuovere i reagenti di estrazione proteica (SDS, DTT e Tris-HCL) e risospendere il pellet in un tampone di dissoluzione da 20 μL con 1 μL al 1% di SDS.
      NOTA: Usa acetone con adeguata ventilazione indossando occhiali di sicurezza, evita le fonti di accensione e smalti i rifiuti in un contenitore dedicato a prova di scintille.
    2. Aggiungi 2 μL di reagente riducente (DTT) a ogni campione, mescola accuratamente e incuba a 60 °C per 1 ora. Aggiungi 1 μL di reagente bloccante la cisteina (iodoacetamide), poi incuba a temperatura ambiente per 10 minuti.
    3. Aggiungi tripsina (proteina: tripsina = 20:1, v/v) a ogni campione. Miscela vortici e incuba a 37 °C durante la notte.
  2. Utilizzare targs isobarici per la quantificazione relativa e assoluta (iTRAQ) per etichettare i peptidi triptici preparati.
    NOTA: In questo protocollo, i reagenti iTRAQ a sei plex (tag plex 113, 114, 115, 116, 117 e 118) vengono utilizzati per etichettare campioni peptidici triptici (tumore; controllo), ciascun tipo di campione viene etichettato tre volte (Tabella 2).
    1. Ricostituire ogni tubo reagente iTRAQ con isopropanolo da 50 μL.
    2. Aggiungere campioni di peptidi triptici ai tubi reagenti corrispondenti, incubare a temperatura ambiente per 1 ora.
    3. Termina le reazioni aggiungendo acqua ultrapura di 3× volume, poi incuba per 30 minuti a temperatura ambiente.
    4. Allo stesso modo, raccogli i sei campioni etichettati, mescola accuratamente e liofilizza.
  3. Utilizzare uno scambio cationico forte (SCX) per frazionare il campione di peptide triptico marcato con iTRAQ.
    1. Ricostituire peptidi liofilizzati in 2 mL Soluzione A (10 mM KH₂PO₄, 25% ACN, pH 2,7). Carica su una colonna di scambio cationico funzionalizzato con sulfoetil (4,6 × 100 mm, 5 μm, 200 Å).
    2. Eluto con portata costante di 1 mL/min usando la soluzione B (500 mM KCl, 10 mM KH₂PO₄, 25% ACN, pH 2,7): 0 %→10 % (2 min) → 10 %→20 % (25 min) → 20 %→45 % (5 min) → 50 %→100 % (5 min). Monitorare a 214 nm durante tutto il processo, raccogliere ogni minuto per provetta, per un totale di 30 frazioni.
    3. Concentrare ogni frazione tramite centrifugazione a vuoto, poi ricostituire con 40 μL di acido trifluoroacetico (TFA) allo 0,1% (v/v). Tutte e 30 le frazioni sono conservate in un congelatore a -80 °C.
      NOTA: La TFA è altamente corrosiva e tossica, causa gravi danni alla pelle e agli occhi e irrita il sistema respiratorio; deve essere maneggiata in una cappa con DPI appropriati che includano guanti resistenti agli acidi, occhiali protettivi e camice da laboratorio, e i rifiuti devono essere raccolti come rifiuti acidi.
  4. Utilizzare LC-MS/MS per analizzare ogni campione di peptide frazionato.
    1. Usa una cartuccia C18 a fase inversa di estrazione in fase solida (densità standard, I.D. 7 mm, volume 3 mL) per desalinizzare.
    2. Utilizzare una colonna di cromatografia liquida (LC) a fase inversa C18 (lunghezza 10 cm, 75 μm di diametro diametrale, 3 μm di resina) per eluire 10 μL di ciascuna frazione con la soluzione C (acido formico allo 0,1%) e un gradiente di soluzione D (80% acetonitrile e acido formico) a una velocità di 250 nL/min per 140 minuti.
    3. Inserimento online dei peptidi separati da LC in uno spettrometro di massa ad alta risoluzione per l'analisi MS/MS.
    4. Converti i file raw spectrum (.raw) generati da Q Exactive in formato .mgf con Proteome Discoverer 1.4, e poi invia questi file .mgf al server MASCOT 2.2, il modulo integrato del software per la ricerca nel database.
      NOTA: Il database umano Uniprot (146.704 sequenze totali; scaricato il 20 luglio 2025 da http://www.uniprot.org) è utilizzato con parametri di ricerca dettagliati (Tabella 3).
    5. Recupera i file di ricerca risultanti (.dat) dal server MASCOT in Proteome Discoverer 1.4. Dati per la filtrazione a una soglia di tasso di false discovery (FDR) di <0,01 per ottenere identificazioni ad alta fiducia.
    6. Identificare la sequenza di amminoacidi proteici con dati MS/MS, quantificare l'abbondanza proteica con le intensità di ioni reporter iTRAQ.
    7. Calcola la riproducibilità sperimentale per determinare il valore di soglia delle proteine espresse differenzialmente (DEP) più una significatività p<0,05.
      NOTA: In questo studio, il valore di soglia è determinato come fold-change (FC) > 1,4, il che può effettivamente rimuovere gli errori sistematici.
  5. Analizzare le caratteristiche funzionali dei DEP neovascolari glioma.
    1. Accedi alla homepage DAVID (Database for Annotation, Visualization and Integrated Discovery, versione 6.7; https://david.ncifcrf.gov/) e seleziona Avvia Analisi nella barra del menu per avviare l'analisi.
    2. Seleziona, il pannello sinistro funge da interfaccia di upload; inserire ID di proteine o geni nella casella di input Step 1 come richiesto (utilizzando la funzionalità di copia-incolla).
    3. Per il Passaggio 2, selezionare il tipo di identificatore corrispondente alle proteine caricate; questo studio ha utilizzato UniProt Accession.
    4. Per il Passaggio 3, selezionare la lista genica o le impostazioni di fondo: l'analisi di arricchimento genico richiede la scelta di un insieme genico di fondo. Il sistema utilizza di default l'intero genoma della specie, oppure gli utenti possono caricare una lista personalizzata di proteine/geni come background.
    5. Clicca su Invia Lista per inviare le voci e avviare l'analisi.
      NOTA: I risultati dell'analisi sono visualizzati sul lato destro del pannello "Risultati Riepilogo Annotazione". Gli utenti possono selezionare i risultati in base alle esigenze analitiche; questo studio ha utilizzato specificamente la lista GOTERM_BP_FAT per analizzare i processi biologici che coinvolgono i DEP.
    6. Ottenere processi biologici (BP), componenti cellulari (CC), funzioni molecolari (MF) e vie KEGG per i DEP neovascolari del glioma.

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Risultati

È stata ottenuta una quantità sufficiente di campioni proteici isolati in LCM per la proteomica quantitativa

Per ottenere profili proteomici affidabili delle proteine differenzialmente espresse nei tessuti neovascolari del glioma, questo studio ha selezionato il sottotipo di glioma più prevalente, astrocitoma di grado III, e tessuti neovascolari isolati utilizzando LCM grazie alla disponibilità di vasi neovascolari arricchiti. Inoltre, la prot...

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Discussione

La LCM combinata con la proteomica quantitativa a marcatura isotopica ha identificato il primo profilo proteomico su larga scala dell'angiogenesi del glioma

L'angiogenesi tumorale è un segno patologico critico dei gliomi, strettamente associato alla loro elevata invasività e resistenzaterapeutica 6,7. Le terapie anti-angiogeniche tradizionali (come gli inibitori del VEGF) mostrano un'e...

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Dichiarazioni

Gli autori dichiarano di non avere interessi in conflitto.

Ringraziamenti

Questo lavoro è stato sostenuto dai China National Nature Scientific Funds (81272798 a X.Z. e 82203592 a N.L.), dalla Fondazione Provinciale di Scienze Naturali dello Shandong (da ZR2022QH112 a N.L.), dai Fondi Speciali del Progetto di Ingegneria per Studiosi Provinciali di Taishan dello Shandong (NO.tstp20221143 a X.Z.), dal Programma Nazionale Cinese di Talenti Stranieri di Alto Livello (H20240743; Esperto Straniero: X.Z.), e il Progetto di Ricerca Scientifica e Coltivazione della Prima Università Medica di Shandong in Campi Strategici Emergenti (202403).

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Piastra a 96 pozziThermo Fisher Scientific (USA)468667Consumabili
AcetoneNanJing Reagent (Cina)C0720114023Reagente
AcetonitrileMerck (Cina)CN34892Reagente
Kit per il test proteico BCAAbcam (Regno Unito)ab102536Reagente
Album siero bovino (BSA) standardSolarbio (Cina)PC0001-1Reagente
tubo centrifuga (50ML)Kirgen (Cina)KG2811Consumabili
Microtomo criostaticoLeica (Germania)C1900Equipaggiamento
CisteinaAladdin (Cina)C108238Reagente
DL-Ditiotreitolo (DTT)Amresco (USA)D8220Reagente
Colonna HPLC a fase inversa EASY-Spray C18Thermo Scientific (USA)ES800AConsumabili
Bilanciamento elettronicoSartorius (USA)BSA224SEquipaggiamento
Mezzo di incorporamentoLeica (Germania)39475237Consumabili
Cartucce Empore SPE C18Sigma-Aldrich (USA)66872-UConsumabili
Tubo di EppendorfKirgen (Cina)KG2211Consumabili
Carta filtranteCytiva (USA)Class42Consumabili
Acido formicoAladdin (Cina)F112032Reagente
Becher di vetroSHUBO (Cina)1015479Consumabili
Cilindro graduato in vetroSHUBO (Cina)1601Consumabili
‌ Cromatografia liquida ad alta risoluzione - Spettrometria di massaThermo Scientific (USA)Q-EsattivoEquipaggiamento
Contenitore isolatoFhefon (Cina)LCZYX-12Consumabili
Microscopio Rovesciato Leica (Germania)XDS-1Equipaggiamento
IodoacetamideSolarbio (Cina)I8010Reagente
IsopropanoloAladdin (Cina)I112018Reagente
Reagenti iTRAQSigma-Aldrich (USA)4381663Reagente
KClBeyotime (Cina)ST1596Reagente
KH2PO4ShangHai YuanYe (Cina)S24278Reagente
Microdissezione a cattura laserLeica (Germania)LMD 6000Equipaggiamento
Lamina di microdissezione a cattura laserLeica (Germania)3800040Consumabili
Lame usa e getta Leica ad alto profiloLeica (Germania)14035838926Consumabili
Contenitore di azoto liquidoKEYICRYO (Cina)YDS-3Equipaggiamento
Agitatore a piastra riscaldante magneticaShanghaiSILE (Cina)LAB-0002-0068-SHSLEquipaggiamento
Lettore di microplaccheTECAN (Svizzera)INFNITE F200Equipaggiamento
PEN  MembranaLeica (Germania)11505189Consumabili
Misuratore di pHSartorius (USA)PB-10Equipaggiamento
PipettaEppendorf (Germania)3123000268Equipaggiamento
PipettaEppendorf (Germania)3123000241Equipaggiamento
PipettaEppendorf (Germania)3123000225Equipaggiamento
PolySULFOETHYL APolyLC Inc (USA)104SE0303Consumabili
Inibitore della proteasiRoche (Svizzera)05892791001Reagente
Centrifuga refrigerataBeckman (USA)AllegraTM X-22REquipaggiamento
FrigoriferoMEILING (Cina)BCD-180KCTEquipaggiamento
Dodecile solfato di sodio (SDS)Amresco (USA)1027P033Reagente
Barattolo di TinturaBeyotime (Cina)FG005Consumabili
Culo d'acciaio inoxMuzixing (Cina)XYS-101Consumabili
ConsigliKirgen (Cina)KG1313Consumabili
Soluzione di colorazione blu toluidinaSigma-Aldrich (USA)198161-5G/198161-25GReagente
Acido trifluoroaceticoAladdin (Cina)T103293Reagente
Tris-HClAmresco (USA)T8230Reagente
Soluzione tripsina-EDTASolarbio (Cina)T1300Reagente
Congelatore a Ultra Bassissima TemperaturaSanyo (Giappone)MDF-382EEquipaggiamento
Purificatore d'acqua ultra-puraELGA (Regno Unito)PureLAB flexEquipaggiamento
Disruptore a celle ultrasonicheQSONICA (USA)Q500Equipaggiamento
Liofilizzatore a vuotoThermo (USA)SNL 315SVEquipaggiamento
Miscelatore a vorticeTecnologia dei Cristalli e Tecnologia Industrie (USA)HYQ-3110Equipaggiamento
Incubatore a bagno d'acquaStrumento Tecnologico Shanghai Yiheng (Cina)HWS-26Equipaggiamento
Carta di pesaturaCole-parmer (USA)133802Consumabili

Riferimenti

  1. Lapointe, S., Perry, A., Butowski, N. A. Primary brain tumours in adults. Lancet. 392 (10145), 432-446 (2018).
  2. Pienkowski, T., et al. Proteomic profiling reveals dynamic regulation of vesicle trafficking across glioma grades. J Neurooncol. 175 (2), 585-598 (2025).
  3. Louis, D. N., et al. The 2021 WHO classification of tumors of the central nervous system: A summary. Neuro Oncol. 23 (8), 1231-1251 (2021).
  4. Kan, L. K., et al. Potential biomarkers and challenges in glioma diagnosis, therapy and prognosis. BMJ Neurol Open. 2 (2), e000069(2020).
  5. Bertolini, G., et al. Prognostic impact of second surgical resection in IDH wildtype recurrent glioblastoma following chemo-radiation therapy: a propensity score analysis cohort study. J Neurooncol. 174 (3), 789-798 (2025).
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