Valutazione sperimentale del polimorfismo genico ABCB1 C3435T (rs1045642) e la sua associazione con l'analgesia postoperatoria nella chirurgia di sostituzione dell'anca

Sommario

Questo studio ha indagato se una variante genetica comune influenzi il controllo del dolore postoperatorio dopo la protesi dell'anca. I pazienti con diversi genotipi hanno mostrato differenze chiare nell'intensità del dolore, nell'uso di analgesici e nelle risposte biologiche legate al dolore.

Abstract

Questo studio ha indagato l'associazione tra il polimorfismo genico ABCB1 (MDR1) C3435T (rs1045642) e l'analgesia postoperatoria in pazienti sottoposti a intervento di protesi d'anca. Un totale di 100 pazienti che hanno subito una protesi d'anca nel nostro ospedale tra gennaio 2023 e gennaio 2024 hanno ricevuto analgesia endovenosa controllata dal paziente post-operatorio con sufentanil. Sono stati raccolti campioni di siero preoperatori e la rilevazione genomica è stata effettuata utilizzando il saggio di genotipizzazione TaqMan SNP. Secondo il genotipo C3435T, i pazienti sono stati classificati in omozigoti di tipo selvatico (gruppo CC), eterozigoti mutanti (gruppo CT) e omozigoti mutanti (gruppo TT). Parametri clinici, inclusi caratteristiche di base, punteggi del dolore della Visual Analogue Scale (VAS), consumo di sufentanil, mediatori del dolore sierico (prostaglandine E2 (PGE2), sostanza P (SP) e β-endorfina (β-EP)), punteggi di ansia e depressione di Hamilton, qualità del sonno e l'incidenza di eventi avversi entro 24 ore dall'intervento sono stati confrontati tra i gruppi. Le caratteristiche di base erano simili tra i gruppi (p > 0,05). I punteggi VAS, il dosaggio di sufentanil e i livelli sierici di PGE2, SP e β-EP a 24 ore erano significativamente più bassi nei gruppi CT e TT rispetto al gruppo CC (p < 0,05). Il gruppo TT ha inoltre mostrato punteggi di ansia e depressione di Hamilton ridotti rispetto a entrambi i gruppi CC e CT (p < 0,05), mentre il gruppo CT ha mostrato punteggi di ansia e depressione più alti rispetto al gruppo CC (p < 0,05). La qualità del sonno e i tassi di eventi avversi non sono stati significativamente diversi tra i gruppi (p > 0,05). Questi risultati suggeriscono una possibile associazione tra il polimorfismo ABCB1 (MDR1) C3435T (rs1045642) e la variabilità nell'efficacia analgesica post-operatoria. I pazienti portatori del genotipo TT tendevano a sperimentare analgesia migliori, necessità di sufentanil più basse e risultati psicologici migliorati. Sebbene questi risultati siano promettenti, devono essere interpretati con cautela a causa della piccola dimensione del campione e del design a centro singolo. Ulteriori studi su larga scala sono necessari per confermare queste osservazioni e valutarne l'applicabilità clinica.

Introduzione

La protesi dell'anca si riferisce alla sostituzione dell'articolazione danneggiata con una protesi artificiale tramite intervento chirurgico. Per la necrosi precoce della testa femorale, l'osteoartrite dell'anca e altre malattie, i sintomi possono essere alleviati e la condizione può essere ritardata tramite un trattamento conservativo con la medicina tradizionale cinese e occidentale^integrata. Quando il dolore e la deformità dell'articolazione dell'anca influenzano la camminata, non possono essere alleviati con trattamenti conservativi come farmaci, che influiscono seriamente sulla qualità della vita. La sostituzione dell'anca può essere scelta per alleviare il dolore articolare, ricostruire la funzionalità dell'anca e migliorare la qualità della vita. Una serie di cambiamenti fisiopatologici causati dal dolore aumenterà il rischio di malattie cardiovascolari e cerebrovascolari nei pazienti anziani ^2,3. Il dolore postoperatorio influisce seriamente sul recupero della funzione dell'articolazione dell'anca, prolunga il riposo a letto dei pazienti e aumenta il rischio di trombosi degli arti^inferiori. Un'analgesia efficace può non solo alleviare le reazioni da stress dopo un'operazione, ma anche ridurre il tempo di ricovero dei pazienti. La regolazione epigenetica significa che la sequenza del DNA non cambia, ma l'espressione genica è influenzata da fattori ambientali, e così^{via 5}. Studi recenti hanno^{dimostrato 6,7} che esiste una correlazione tra la regolazione epigenetica e l'occorrenza e lo sviluppo del dolore cronico, e il dolore cronico o acuto è spesso il risultato dell'interazione tra fattori ambientali e geni. Comprendere la relazione tra i componenti regolatori epigenetici e il dolore cronico e identificare biomarcatori (come quelli legati alla regolazione epigenetica) strettamente legati alla comparsa e allo sviluppo del dolore, in particolare il dolore cronico, può aiutare a diagnosticare la suscettibilità al dolore cronico, valutare gli effetti dei trattamenti farmacologici e, in ultima analisi, promuovere un'analgesia individualizzata e precisa. Il polimorfismo C3435T (rs1045642) nel gene ABCB1 (gene di resistenza multifarmaco 1, MDR1) è una variante mononucleotide ben caratterizzata situata nell'esone 26. Questo polimorfismo codifica una variante della P-glicoproteina (P-gp), un trasportatore di efflusso transmembrana che regola l'assorbimento e l'efflusso cellulare di vari farmaci, inclusi gli oppioidi, influenzandone così la farmacocinetica e la risposta^{terapeutica 8}. Tra le varianti genetiche di ABCB1, il polimorfismo sinonimo C3435T (rs1045642) è stato ampiamente studiato in relazione alla variabilità interindividuale nella risposta farmacologica. ABCB1 C3435T (rs1045642) è una sostituzione sinonimo situata nell'esone 26 del gene^{MDR1 9}. Sebbene non alteri la sequenza amminoacidica, le evidenze accumulate suggeriscono che questa variante possa influenzare la stabilità dell'mRNA e la cinetica della traslazione, influenzando così il ripiegamento della P-glicoproteina, i livelli di espressione o l'efficienza del trasporto. Sebbene i risultati tra gli studi non siano del tutto coerenti, diversi rapporti hanno indicato che l'allele T è associato a una riduzione dell'espressione di P-gp o a una specificità alterata del^{substrato 10}. Poiché la P-gp espressa nella barriera emato-encefalica limita la penetrazione del sistema nervoso centrale di molti farmaci, inclusi alcuni oppioidi, il polimorfismo ABCB1 C3435T può contribuire alle differenze individuali nella sensibilità al sufentanil e agli effetti avversi correlati^{agli oppioidi 11}.

Lo scopo di questo studio era indagare se il polimorfismo ABCB1 C3435T sia associato alla variabilità interindividuale nell'efficacia analgesica postoperatoria e negli esiti correlati al dolore nei pazienti sottoposti a interventi di protesi d'anca. La sostituzione dell'anca è comunemente associata a dolori postoperatori da moderati a gravi, e oppioidi come il sufentanil sono usati regolarmente per l'analgesia post-operatoria. Tuttavia, esistono differenze interindividuali sostanziali nella risposta analgesica e negli effetti avversi correlati agli oppioidi, che non possono essere spiegate pienamente da fattori clinici soli. Poiché la P-glicoproteina codificata dal gene ABCB1 svolge un ruolo chiave nella regolazione del trasporto dei farmaci attraverso membrane biologiche, inclusa la barriera emato-encefalica, la variazione genetica in ABCB1 può influenzare la disposizione degli oppioidi e gli effetti analgesici centrali. Pertanto, esaminare la relazione tra il polimorfismo ABCB1 C3435T e l'analgesia post-operatoria può aiutare a chiarire il contributo genetico alla variabilità nel controllo del dolore dopo un intervento di protesi d'anca. Discutendo le differenze negli effetti analgesici postoperatori tra pazienti con genotipi differenti, questo studio mira a rivelare le variazioni individuali nel dolore postoperatorio e a fornire una base teorica per l'analgesia clinicamente individualizzata. Contemporaneamente, amplia la comprensione del meccanismo attraverso cui il polimorfismo del gene C3435T influenza l'analgesia postoperatoria, fornendo una base per ricerche successive.

Protocollo

Questo studio è stato condotto in conformità con la Dichiarazione di Helsinki ed è stato approvato dal Comitato Etico Medico dell'Ospedale di Medicina Tradizionale Cinese di Fuzhou (Approvazione n.: LC-2023-048). Il consenso informato scritto è stato ottenuto da tutti i partecipanti prima dell'iscrizione.

Dati e metodi
Sulla base dell'ipotesi di ricerca, abbiamo sviluppato un protocollo prospettico di studio di analisi delle coorti. In totale, 100 pazienti sottoposti a interventi di protesi elettiva dell'anca sono stati arruolati prospetticamente, con un'età media di 58,41 ± 6,97 anni. La Figura 1 illustra la roadmap tecnica di questo protocollo, con descrizioni dettagliate del disegno dello studio fornite nelle sezioni seguenti.

Progettazione dello studio e partecipanti
Si trattava di uno studio di coorte prospettico che ha arruolato adulti consecutivi programmati per un'artroplastica primaria dell'anca sotto anestesia generale tra gennaio 2023 e gennaio 2024. I criteri di inclusione erano tra i 18 e i 60 anni, la Società Americana di Anestesiologi (ASA) classe I-II e interventi chirurgici eseguiti dallo stesso team ortopedico. I criteri di esclusione includevano disfunzioni cardiopolmonari, epatiche o renali significative (definite come creatinina sierica >1,5 mg/dL o ALT >3x limite superiore della norma); storia di dolore cronico (ad esempio, fibromialgia, dolore neuropatico); abuso di sedativi o oppioidi; allergia nota agli analgesici; esposizione ad altri oppioidi durante la malattia attuale; e uso preoperatorio a lungo termine di analgesici o steroidi (>1 settimana entro 3 mesi prima dell'intervento). Dai partecipanti sono stati raccolti 5 mL di sangue venoso anticoagulato con EDTA per la genotipizzazione. Il DNA genomico è stato estratto dal sangue periferico utilizzando un kit di estrazione del DNA commerciale secondo le istruzioni del produttore. Il polimorfismo ABCB1 C3435T (rs1045642) è stato genotipizzato utilizzando metodi basati su reazione a catena della polimerasi, e la determinazione del genotipo è stata effettuata secondo i protocolli^{consolidati 10}. Dopo la genotipizzazione del polimorfismo ABCB1 C3435T (rs1045642), i partecipanti sono stati stratificati in gruppi CC, CT e TT. Non è stato incluso alcun gruppo di controllo sano esterno; Tutti i confronti sono stati effettuati tra gruppi di genotipi (CC, CT, TT). Il personale di laboratorio che analizzava biomarcatori e genotipi era cieco rispetto agli esiti clinici.

Anestesia e gestione intraoperatoria
Il monitoraggio standard includeva elettrocardiografia, pressione sanguigna non invasiva (misurata ogni 5 minuti), ossimetria di polso e anidride carbonica di fine marea (EtCO₂). È stata stabilita una linea endovenosa con un catetere da 18G, e i pazienti sono stati preossigenati con 100% O₂ tramite mascherina per 3 minuti. L'anestesia è stata indotta con midazolam 0,05 mg/kg, cisatracurio 0,1 mg/kg, sufentanil 0,4 μg/kg e propofol titolato a 1-2 mg/kg fino a perdita di conoscenza e adeguata rilassamento della mandibola. L'intubazione tracheale è stata eseguita dopo aver confermato un sufficiente blocco neuromuscolare (conteggio train-of-four = 0). La ventilazione meccanica era impostata in modalità a volume controllato con una frequenza respiratoria di 15 respirazioni/minuto, volume mareale di 6-8 mL/kg di peso corporeo previsto e PEEP di 5 cm H₂O, con regolazioni per mantenere l'EtCO₂ a 35-45 mmHg. L'anestesia è stata mantenuta con propofol 0,08-0,12 mg/kg/min e sufentanil 0,15-0,30 μg/kg/h. Gli anestetici endovenosi sono stati interrotti alla chiusura della ferita. L'emodinamica è stata gestita con bolus di fluidi o vasopressori secondo necessità per mantenere la MAP entro il 20% rispetto alla linea basale.

Procedura di artroplastica dell'anca¹²
I pazienti erano posizionati in posizione di decubito laterale con il lato operatorio rivolto verso l'où. È stato utilizzato un approccio posterolaterale: è stata effettuata un'incisione cutanea di 15-20 cm centrata sopra il grande trocantero. Tessuto sottocutaneo e fascia lata sono stati incisi, e il gluteo massimo è stato spaccato in modo brusco. La capsula posteriore è stata esposta e è stata eseguita una capsulotomia a forma di T lungo il bordo acetabulare. L'anca è stata slogata da rotazione esterna e adduzione. La testa femorale fu resezionata e il collo femorale fu ritagliato a 1,0-1,5 cm sopra il trocantero minore. Per l'emiartroplastica, il canale femorale è stato preparato con spillature sequenziali (aumento di dimensione: 1 mm di gradini), e il fusto femorale è stato impiantato con circa 15° di anteversione. Per l'artroplastica totale dell'anca, l'acetabulo è stato esastato fino a osservare sanguinamento puntiato, con un angolo di abduzione a coppa di 45° e un angolo di anteversione di 15°. I componenti sono stati cementati o press-fit basandosi sulla valutazione intraoperatoria della qualità ossea e della stabilità dell'impianto. Dopo la riduzione, la stabilità dell'anca e l'ampiezza di movimento sono state valutate intraoperatoriamente dal chirurgo operatorio tramite flessione passiva, estensione, rotazione interna ed esterna e abduzione, con particolare attenzione alla presenza di impingement o lussazione. Veniva inserito uno scarico a aspirazione chiuso se necessario, e la ferita veniva chiusa a strati utilizzando suture assorbibili per la fascia profonda e il tessuto sottocutaneo, e suture non assorbibili o graffette cutanee per la chiusura della pelle.

Analgesia endovenosa controllata dal paziente postoperatorio (PCIA)
Un regime standardizzato di sufentanil PCIA è stato utilizzato per tutti i partecipanti. La soluzione analgesica consisteva in sufentanil a 1,5 μg/mL, diluito allo 0,9% di soluzione salina e caricato in una pompa d'infusione programmabile. Le impostazioni della pompa erano infusione di fondo 1 mL/h, dose di bolus 1 mL e intervallo di blocco 10 minuti, senza dose di carico salvo indicazione clinica. I pazienti hanno ricevuto istruzioni standardizzate sull'uso della PCIA nell'area di recupero. Il consumo cumulativo di sufentanil è stato registrato dal registro del pompaggio a 24 ore postoperatorie. Tutti i modelli di pompa, i monouso e i consumabili sono elencati nella Tabella dei Materiali.

Prelievo e analisi del sangue
I campioni di genotipizzazione preoperatoria consistevano in 5 mL di sangue venoso anticoagulato con EDTA miscelato con inversione delicata. Per le analisi dei mediatori del dolore, sono stati raccolti 5 mL di sangue venoso nei giorni postoperatori 1, 2, 3 e 7. Per la preparazione del siero, i campioni venivano lasciati coagulare per 30 minuti a temperatura ambiente; Per il plasma, veniva utilizzato l'anticoagulante specificato dal saggio. I campioni sono stati centrifugati a circa 1.000 x g per 15 minuti a temperatura ambiente per separare siero e plasma. Il sovrantantante veniva alquotato in tubi a basso legame etichettati e conservato a −80 °C fino all'analisi. Per minimizzare i cicli di congelamento-disgelo, sono stati preparati almeno due aliquote per ogni momento temporale.

Estrazione del DNA genomico e genotipizzazione degli SNP
Il DNA genomico è stato estratto dal sangue intero utilizzando un kit di estrazione genomica a colonna di silice (disponibile commercialmente) seguendo il protocollo del produttore. La concentrazione e la purezza del DNA sono state misurate spettrofotometricamente, con campioni che mostrano rapporti A260/280 di 1,8-2,0 considerati accettabili. Il DNA veniva conservato a −20 °C fino all'uso.

Il polimorfismo ABCB1 C3435T (rs1045642) è stato genotipizzato utilizzando un saggio di genotipizzazione SNP TaqMan pre-progettato su una piattaforma PCR in tempo reale. Il saggio includeva innesco pre-ottimizzati e sonde per idrolisi. Le condizioni di ciclo termico seguivano le raccomandazioni del produttore (95 °C per l'attivazione enzimatica, poi 40 cicli a 95 °C per 15 secondi e 60 °C per 60 secondi). Sono stati inclusi controlli senza template e campioni duplicati (≥10% del totale) per il controllo qualità. La chiamata del genotipo è stata eseguita utilizzando software di analisi per la discriminazione allelica, con un tasso di chiamata ≥95% e una concordanza duplicata del 100% necessaria per l'accettazione.

Saghi mediatori del dolore
Le prostaglandine sieriche E₂ (PGE₂), la sostanza P (SP) e la β-endorfina (β-EP) sono state misurate utilizzando kit di immunoimmunosaggio validati o sandwich secondo le istruzioni del produttore. Le curve di calibrazione venivano generate utilizzando almeno cinque standard che coprivano l'intervallo di concentrazione previsto; le incognite e i controlli venivano eseguiti in duplicato. Sono stati registrati i limiti inferiori di rilevamento, i coefficienti di variazione intra-saggio e i coefficienti di variazione inter-saggio; sono stati ripetuti saghi con CV intra-assay >10% o CV inter-saggio >15%). Tutti i nomi dei kit e i numeri di catalogo sono elencati nella Tabella dei Materiali.

Misure di risultato
Le caratteristiche basali includevano età, sesso, indice di massa corporea, durata dell'intervento, approccio chirurgico (anteriore/posteriore), tipo di protesi (cementata/non cementata), VAS del dolore preoperatorio (0-10), punteggi preoperatori di ansia e depressione e dosaggio intraoperatorio di sufentanil. Gli esiti primari a 24 ore erano l'intensità del dolore a riposo misurata dalla Visual Analogue Scale (VAS, 0-10) e il consumo cumulativo di sufentanil registrato dalla pompa PCIA. Gli esiti secondari a 24 ore includevano la qualità del sonno (punteggio 0-3; punteggi più alti indicano un sonno peggiore), l'incidenza di nausea e vomito postoperatorio (PONV) e i punteggi della Hamilton Anxiety and Depression Scale. Gli esiti esplorativi includevano livelli sierici di PGE₂, SP e β-EP nei giorni postoperatori 1, 2, 3 e 7.

Analisi statistica
Le variabili continue sono presentate come media ± deviazione standard (SD) o mediana (intervallo interquartile) secondo la distribuzione; variabili categoriche come conteggi (percentuali). I dati sono stati testati per la normalità utilizzando il test di Shapiro-Wilk e per l'omogeneità delle varianze tramite il test di Levene. Per variabili normalmente distribuite con varianze uguali, è stata applicata un'analisi unidirezionale della varianza (ANOVA) con confronti post-hoc di Bonferroni (o Tukey); altrimenti, veniva utilizzato il test di Kruskal-Wallis con la procedura post-hoc di Dunn. Le variabili categoriche sono state analizzate usando χ² o il test esatto di Fisher, secondo le applicazioni. Sono state calcolate frequenze di genotipo e alleli e l'equilibrio di Hardy-Weinberg è stato valutato con il test χ² . Sono stati stimati i odds rapports (OR) con intervalli di confidenza (IC) del 95% per le associazioni tra genotipo (ad esempio, portatori di alleli T vs CC) e esiti dicotomi, dove applicabile. Prima di applicare i test parametrici, le distribuzioni dei dati venivano testate per la normalità (test di Shapiro-Wilk) e l'omogeneità della varianza (test di Levene). Nei casi in cui le assunzioni venivano violate, venivano utilizzate alternative non parametriche (test di Kruskal-Wallis con test di Dunn post-hoc). Esegui la verifica dell'equilibrio Hardy-Weinberg utilizzando il test del chi-quadrato. Calcolare il rapporto di probabilità (OR) e l'intervallo di confidenza (IC) al 95% per analizzare l'associazione tra genotipo e punteggio del dolore post-operatorio, nonché il consumo di sufentanil. Un p < 0,05 a due facce è stato considerato statisticamente significativo. Le analisi sono state condotte con software statistico validato.

Risultati

Caratteristiche dei partecipanti e distribuzione dei genotipi
Un totale di 100 pazienti sono stati arruolati e genotipati con successo per il polimorfismo ABCB1 C3435T. La distribuzione dei genotipi era del 40,0% (40/100) per la CC, del 49,0% (49/100) per la TC e dell'11,0% (11/100) per la TT. Le frequenze alleliche erano del 64,5% per C (129/200) e 35,5% per T (71/200). La distribuzione dei genotipi si conformava all'equilibrio di Hardy-Weinberg (χ² =0,49, p=0,48; Tabella ...

Discussione

La protesi dell'anca è un intervento ortopedico importante e comune, e il dolore post-operatorio è uno dei principali problemi affrontati dai pazienti. L'effetto dell'analgesia postoperatoria è influenzato da molti fattori, inclusi fattori individuali come età del paziente, genere, peso e sensibilità al dolore, oltre a fattori esterni come la modalità operatoria e l'esercizio di riabilitazione^{postoperatoria 13,14}. Inoltre, il sis...

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Iniezione di cloruro di sodio allo 0,9%	Fresenius Kabi	19194	Diluente per sufentanil (soluzione PCIA) e altri farmaci; usata per l'irrigazione delle ferite durante l'intervento chirurgico [documento: "PCIA postoperatorio", "Procedura di artroplastica dell'anca"].
Software per l'analisi della discriminazione allelica (per PCR in tempo reale)	Non specificato (come la piattaforma PCR in tempo reale)	Non specificato	Utilizzato per la chiamata dei genotipi di ABCB1 C3435T; richiede frequenza di chiamata e GE; 95% e concordanza duplicata al 100% [documento: "Estrazione genomica del DNA e genotipizzazione SNP"].
Centrifuga (per separazione siero/plasma)	Beckman Coulter	Avanti J - E	Opera a ~1000 e volte g (&asinto; 3000 giri/min, raggio rotore di 10 cm); centrifuga i campioni di sangue per 10-20 minuti a temperatura ambiente per separare siero/plasma [documento: "Prelievo e elaborazione del sangue"].
Iniezione di cisatracurio	Jiangsu Hengrui Pharmaceutical Co., Ltd	H20060869	Agente bloccante neuromuscolare per l'intubazione tracheale, dose 0,1 mg/kg [documento: "Anestesia e gestione intraoperatoria"].
Analizzatore di Chimica Clinica	Roche Diagnostica	Cobas c 501	Rileva biomarcatori sierici (PGE2, SP, β-EP) [documento: "Analisi mediatrice del dolore"].
Anticoagulante EDTA	BD Vacutainer	366450	Utilizzata per la raccolta preoperatoria di sangue venoso (5 mL) per l'estrazione genomica del DNA e la genotipizzazione; campioni miscelati con inversione delicata per prevenire la coagulazione [documento: "Progetto dello studio e partecipanti", "Prelievo e elaborazione del sangue"].
Elettrocardiografo (ECG)	Philips	CardioPerfect MX800	Parte del monitoraggio intraoperatorio standard [documento: "Anestesia e gestione intraoperatoria"].
Fine Nota	Clarivate Analytics	X9	Aiuta nella gestione e nella formattazione delle fonti (in linea con le norme di citazione delle riviste) [riferimento: "JoVE_Materials.xls"].
Monitor di anidride carbonica di fine marea (ETCO2)	Masimo	Rad - 97	Parte del monitoraggio intraoperatorio standard; Utilizzato per mantenere la normocapnia [documento: "Anestesia e gestione intraoperatoria"].
Frigorifero a bassa temperatura (-80°C; C/-20° C)	Haier	DW - 86L626 (-80° C); DW - 25L262 (-20° C)	-80°C; C per conservare siero/plasma alquotato; -20°; C per la memorizzazione del DNA genomico estratto [documento: "Campionamento e elaborazione del sangue", "Estrazione del DNA genomico e genotipizzazione SNP"].
Iniezione di midazolam	Jiangsu Enhua Pharmaceutical Co., Ltd	H10980025	Agente indutivo anestesico, dose 0,05 mg/kg [documento: "Anestesia e gestione intraoperatoria"].
Misurador di pressione sanguigna non invasivo	Omron	HEM - 9072T	Parte del monitoraggio intraoperatorio standard [documento: "Anestesia e gestione intraoperatoria"].
Pompa programmabile per analgesia endovenosa (PCIA)	Phoenix Pharmaceuticals	EK-022-16	Utilizzato per la somministrazione post-operatoria di sufentanil; impostazioni: infusione di fondo 1 mL/h, dose di bolo 1 mL, intervallo di blocco 10 min; registra il consumo cumulativo di sufentanil [documento: "PCIA postoperatorio"].
Iniezione di Propofol	AstraZeneca	H20120088	Induzione anestesica (titolata fino alla perdita di coscienza) e mantenimento (0,08-0,12 mg· kg-1· min-1) [documento: "Anestesia e gestione intraoperatoria"].
Kit radioimmunosaggio Prostaglandin E2 (PGE2)	Cayman Chemical	514010	Kit validato per la rilevazione sirica di PGE2; eseguito in duplicata, con CV e LE intra-saggio; 10% e CV & Saggio inter-saggio; 15% (ripetuto se superando i limiti) [documento: "Analisi mediatrice del dolore"].
Polossimetro			Fa parte del monitoraggio intraoperatorio standard (misura SpO2) [documento: "Anestesia e gestione intraoperatoria"].
Piattaforma PCR in tempo reale	Phoenix Pharmaceuticals	EK-022-16	Utilizzato per la genotipizzazione ABCB1 C3435T; Condizioni di cicli termici: attivazione enzimatica, 40 cicli di denaturazione (95° C, ~15 s) e ricottura/estensione (60° C, ~60 s) [documento: "Estrazione genomica del DNA e genotipizzazione SNP"].
Kit di estrazione del DNA genomico basato su colonne di silice	Qiagen	51104	Utilizzato per estrarre DNA genomico dal sangue totale; le procedure includono lisi cellulari, digestione proteica, adsorbimento del DNA, lavaggi sequenziali ed eluzione in 100 & mu; L elution buffer [documento: "Estrazione genomica del DNA e genotipizzazione SNP"].
Spettrofotometro	Thermo Fisher Scientific	NanoDrop One	Misura la concentrazione e la purezza del DNA; campioni con A260/280 e asimppo; 1.8-2.0 considerata accettabile [documento: "Estrazione genomica del DNA e genotipizzazione SNP"].
SPSS	IBM Corporation	26	Utilizzato per l'analisi statistica: test di normalità di Shapiro-Wilk, Levene' test s, ANOVA, test di Kruskal-Wallis, χ ² test, ecc. [documento: "Analisi statistica"; riferimento: "JoVE_Materials.xls"].
Kit di radioimmunoanalisi della Sostanza P (SP)	Merck Millipore	RAB0456	Kit validato per la rilevazione sirica della SP; stessi standard di controllo qualità del kit PGE2 [documento: "Pain mediator assays"].
Iniezione di Sufentanil	Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Group Co., Ltd.	NA	Utilizzato per l'induzione anestesica (0,4 & mu; g/kg), mantenimento intraoperatorio (0,15-0,30 μ g· kg-1· h-1), e PCIA postoperatorio (1,5 e mu; g/mL diluito allo 0,9% di soluzione salina) [documento: "Anestesia e gestione intraoperatoria", "PCIA postoperatorio"].
Saggio di genotipizzazione SNP TaqMan (per ABCB1 C3435T, rs1045642)	Qiagen	51104	Saggio di idrolisi alle-specifico pre-progettato per la genotipizzazione PCR in tempo reale del polimorfismo ABCB1 C3435T [documento: "Estrazione genomica del DNA e genotipizzazione SNP"].
Apparecchiatura per l'intubazione tracheale (laringoscopio, tubo endotracheale)	Draeger	Capnomac Ultima	Utilizzato per l'intubazione tracheale dopo la conferma del blocco neuromuscolare [documento: "Anestesia e gestione intraoperatoria"].
Ventilatore a Controllo di Volume	Drä ger	Primus	Utilizzato per la ventilazione meccanica intraoperatoria; Impostazioni: frequenza respiratoria ~15 respirazioni/minuto, volume tidal 6-8 mL/kg peso corporeo previsto [documento: "Anestesia e gestione intraoperatoria"].
Kit immunodosaggio per Sandwich β-Endorfina (β-EP)	Phoenix Pharmaceuticals	EK-022-16	Kit validato per la rilevazione siero/beta-EP; curve di calibrazione generate con ≥ 5 standard [documento: "Saghi mediatori del dolore"].