Method Article

Sviluppo e convalida di una metodologia per stabilire modelli di ratto obesi con pancreas grasso tipico

DOI:

10.3791/69553

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November 11th, 2025

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1Key Laboratory of Acupuncture and Medicine Research of Ministry of Education, Nanjing University of Chinese Medicine, 2Department of Acupuncture and Moxibustion, Yangzhou TCM Hospital Affiliated to Nanjing University of Chinese Medicine, 3Department of Specialty Medicine, Ohio University, 4Research Department, Swiss University of Traditional Chinese Medicine

In This Article

Summary

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Questo studio offre un metodo riproducibile e standardizzato al fine di stabilire modelli di ratto obesi che mostrano obesità semplice, comunemente caratterizzata da pancreas grasso. Include anche protocolli dettagliati per il campionamento del tessuto pancreatico e l'immunoistochimica.

Abstract

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L'obesità è emersa come un'epidemia sanitaria globale predominante, con quasi la metà della popolazione mondiale ora classificata come sovrappeso o obesa. Una caratteristica patologica chiave negli individui obesi è la deposizione ectopica di lipidi nei tessuti non adiposi, inclusa la condizione pancreatica-a chiamata steatosi pancreatica o pancreas grasso. Nei modelli di roditori indotti da diete ricche di grassi (HFD), la steatosi pancreatica precede costantemente la steatosi epatica, sottolineando la particolare suscettibilità del pancreas all'accumulo di lipidi. Questo coinvolgimento precoce posiziona il pancreas come un organo critico per la comprensione della disregolazione metabolica nell'obesità. Sebbene i ratti obesi indotti dalla dieta (DIO) ricapitolino gli aspetti fondamentali della progressione della malattia umana, i modelli animali ben caratterizzati che mostrano in modo affidabile questo fenotipo pancreatico rimangono scarsi in letteratura.

Una considerazione metodologica significativa nella modellazione dell'obesità umana è la tempistica dell'introduzione dell'HFD. Molti modelli esistenti avviano l'HFD durante il periodo di svezzamento, il che può introdurre effetti confondenti della programmazione metabolica dello sviluppo che non riflettono pienamente l'obesità umana, che si sviluppa principalmente dopo lo sviluppo. Al contrario, il presente studio stabilisce un protocollo standardizzato in cui l'HFD viene introdotto dopo lo svezzamento. Questo approccio imita più accuratamente la traiettoria umana comune dell'insorgenza dell'obesità in età adulta, evita gli adattamenti metabolici precoci della vita e si traduce in una progressione fisiologicamente più rilevante verso la steatosi pancreatica.

Questa ricerca fornisce un quadro dettagliato e riproducibile per generare un modello di obesità nel ratto caratterizzato da una patologia prominente del pancreas grasso. La metodologia include una fase di acclimatazione di 1 settimana, un periodo di induzione HFD di 14 settimane a partire dallo svezzamento e il prelievo sistematico dei tessuti. Vengono descritte due vie di processamento tissutale: lo snap-freezing per analisi molecolari (ad esempio, Western blotting) e la fissazione della perfusione di paraformaldeide per valutazioni morfologiche (ad esempio, IHC, H&E). Questo modello offre una solida piattaforma per indagini meccanicistiche sulla disfunzione metabolica pancreatica associata all'obesità.

Introduction

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L'obesità semplice è definita come l'obesità che esiste in modo indipendente senza altre comorbidità, principalmente attribuita a uno squilibrio energetico derivante da stili di vita malsani, come modelli alimentari scorrettie attività fisica insufficiente1. L'obesità contribuisce in modo significativo all'aumento dell'incidenza di malattie non trasmissibili tra le popolazioni più giovani, caratterizzate da alti tassi di prevalenza, insorgenza precoce e complicanze multisistemiche, posizionandola come una sfida critica per la salute pubblica globale2. Il pancreas grasso è una condizione ....

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Protocol

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La procedura di trattamento degli animali è stata approvata dal Comitato etico animale dell'Università di Medicina Tradizionale Cinese di Nanchino (202006A016) ed è conforme alle linee guida ARRIVE (Animal Research: Reporting of In Vivo Experiments), alle linee guida etiche, alle linee guida sul funzionamento dell'Animals (Scientific Procedures) Act 1986 e alle linee guida associate, Direttiva UE 2010/63 per la protezione degli animali utilizzati per scopi scientifici. Tutti gli animali da esperimento sono stati anestetizzati in conformità con le procedure di anestesia dei roditori approvate prima della dissezione. La procedura è stat....

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Results

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Descriviamo un protocollo riproducibile per stabilire un semplice modello di obesità che mostri in modo affidabile il pancreas grasso (Figura 1). L'intero processo, dall'alimentazione animale e dalla raccolta dei tessuti alla successiva validazione molecolare, è schematicamente riassunto nella Figura 1. Sono state registrate le variazioni di peso settimanali del gruppo modello (n = 5) e del gruppo di controllo (n = 5) e non vi è.......

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Discussion

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Come fattore primario della sindrome metabolica, l'obesità non complicata rappresenta la manifestazione iniziale della disregolazione sistemica del metabolismo lipidico. Senza intervento, può progredire verso il diabete di tipo 2 e gravi complicanze diabetiche, sottolineando la necessità di una correzione metabolica precoce30. La steatosi pancreatica (pancreas grasso), un marcatore precoce della deposizione ectopica di lipidi nell'obesità, ridefinisce il pancreas .......

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Disclosures

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Gli autori non hanno conflitti di interesse da rivelare.

Acknowledgements

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Questo lavoro è stato sostenuto dal Progetto degli Eredi e degli Istruttori per l'Eredità dell'Esperienza Accademica del Settimo Gruppo di Esperti di Medicina Tradizionale Cinese di Fama Nazionale; La Fondazione Nazionale di Scienze Naturali della Cina, Progetto del Fondo per i Giovani Scienziati [numero di sovvenzione 82305376]; Progetto di sostegno ai giovani talenti della scienza e della tecnologia nella provincia di Jiangsu nel 2024 [numero di sovvenzione JSTJ-2024-380].

I diagrammi di flusso sono stati prodotti utilizzando FigDraw, Biorender.

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Materiale
Tubo microcentrifuga da 1,5 mLBiosharp Bioengineering Co. Ltd.BS-15-MWB
Tubo di congelamento da 2 mlLABSELECTCV-002-200-EXWB
Tubo di macinazione da 2 mlWuhan Servicebio Technology Co., LtdHT-200-MWB
3% di H2O2Booster Electronics Technology Co., Ltd.20A23CIHC
4% di paraformaldeideBiosharp Bioengineering Co. Ltd.BL539AOperazione di dissezione del pancreas per perfusione
Soluzione BSA al 5%Biofroxx4240GR100IHC
Tubo centrifuga da 50 mL  Biosharp Bioengineering Co. Ltd.BS-500-MConservazione dei tessuti
AccuWest ECL Plus, Raegent ANanchino Gene Easy Biotechnology Co., Ltd.Q201220WB
AccuWest ECL Plus, Raegent BNanchino Gene Easy Biotechnology Co., Ltd.Q201220WB
etanolo anidroShanghai SCR-Biotech Co., Ltd.10009257IHC
Anti-coniglio IgG, anticorpo legato alla HRPTecnologia di Segnalazione Cellulare.Inc,7074WB
Cocktail di inibitori della proteasi cOmpleteHoffmann-La Roche Ltd 82256300WB
coperturaCITOTEST LABWARE MANUFACTURING Co., LTD10212450CIHC
Soluzione cromogenica DABBooster Electronics Technology Co., Ltd.AR2017-1IHC
PinzeShenzhen RWD Life Science Co., Ltd.SP0007-Mdissezione del ratto SD
vetri & nbsp;CITOTEST LABWARE MANUFACTURING Co., LTD188105IHC
barattolo di vetro per le tinteShanghai Beyotime Biotechnology Co., Ltd.FG010IHC
EmatossilinaShanghai Beyotime Biotechnology Co., Ltd.ST2067-20gIHC
Dieta ricca di grassiSuzhou Shuangshi Laboratory Animal Feed Technology Co., Ltd.Tabella1alimentazione su animali sperimentali
Acido cloridrico alcolShanghai Beyotime Biotechnology Co., Ltd.C0163MIHC
isofluranoShenzhen RWD Life Science Co., Ltd.R510-22-10Ratti anestetizzati
metanolo Biofroxx67-56-1WB
MOPS Liquido tampone in corso 20 volte e pochi;Nanjing Genscript Biotechnology Co., Ltd. C36842504WB
Balsamo neutroBeijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd.G8590IHC
Resina neutraShanghai SCR-Biotech Co., Ltd.G8590IHC
Soluzione PBSJiangsu Keygen Biotech Corp., LtdKGL2206-500Conservazione dei tessuti
Kit per il saggio proteico Pierce BCA & nbsp;Thermo Fisher Scientific Inc, Waltham, USA.ZB382867
Kit per il saggio proteico Pierce BCA & nbsp;hermo Fisher Scientific Inc, Waltham, USAZB382867WB
Cocktail di inibitori della proteasiHoffmann-La Roche Ltd 82256300
Membrana PVDF (Membrana di trasferimento Immobilon-P, Millipore, 0000380346) Merck Millipore0000380346WB
Buffer di lisi RIPABiosharp Bioengineering Co. Ltd.BL504A, 70096436WB
SABCBooster Electronics Technology Co., Ltd.20C03AIHC
SalinaSHANXI SHENGAO ANIMAL PHARMACEUTICAL CO., LTD. 270071460Conservazione dei tessuti
Maschi di ratti SDJiangsu GemPharmatech Co., Ltd. D000017ratti
Citrato di sodioMerck Life ScienceS1804IHC
Alimentazione per manutenzione standardSuzhou Shuangshi Laboratory Animal Feed Technology Co., Ltd.Tabella2alimentazione su animali sperimentali
il concentrato di equilibrio eBlot L2 5 volte;Nanjing Genscript Biotechnology Co., Ltd. C97212410 WB
il trasferimento concentra eBlot L2 5 volte;Nanjing Genscript Biotechnology Co., Ltd. C97211504WB
Tris Soluzione Salina Tamponata, Polvere & nbsp;Biosharp Bioengineering Co. Ltd.BL602AWB
Preadolescenti 20BiofroxxEZ681A3EA8WB
UretanoSigma-Aldrich Co., Ltd.U2500-100GRatti anestetizzati
Anticorpo policlonale di vinculinaProteintech Group, Inc,26520-1-APWB
xileneNanchino Reagent CorporationC0430530223IHC
Young PAGE, Bis-Tirs, 10 e volte; 8Nanjing Genscript Biotechnology Co., Ltd. C33152505WB
Equipaggiamento
Macchina per anestesiaShenzhen RWD Life Science Co., Ltd.Modello R5805Ratti anestetizzati
mulino a sfera Retsch Technology GmbH - MicrotracMM400WB
CentrifugheEppendorf SE5418RWB
Asciugatore di tessuti biologici computerizzatiZhejiang Jinhua Kedi Instrument Co.SC2013-G-KITIHC
reagenti a chemiluminescenza avanzata (ECL)  BIOIMAGING DI VILBER00170961WB
microtomo Thermo Fisher Scientific Inc, Waltham, USA.HM325IHC
MicroondeShanghai Boxun Industry Co., Ltd. 97000IHC
Sistema Mini-PROTEAN TetraBio-Rad Laboratories, Inc.1658004WB
FornoShanghai Jinghong Scientific Co., Ltd.DNP-9082IHC
Acqua puraSichuan UPT Ultra-Pure Technology Co., Ltd.ULUP-TEZIHC

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Wang, G., et al. Comparative effectiveness of massage combined with lifestyle intervention and lifestyle intervention alone for simple obesity: a systematic review and meta-analysis. Medicine. 104 (2), e41074(2025).
  2. World Obesity Federation. World Obes....

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Obese Rat ModelsFatty PancreasPancreatic SteatosisHigh Fat DietDiet Induced ObesityLipid DepositionTissue HarvestingWestern BlottingParaformaldehyde FixationMetabolic Dysfunction

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