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Articolo metodologico

Impatto dei diversi metodi di estrazione sui profili di bioattività in vitro di Terfezia claveryi

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DOI:

10.3791/69950

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20 marzo 2026

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In questo articolo

Sommario

La bioattività in vitro degli estratti di Terfezia claveryi dipendeva dal metodo di estrazione biofisica e dalla polarità del solvente. L'estratto acquoso dall'estrazione assistita dalla macerazione (MAE) ha mostrato la più forte attività antiossidante, mentre l'estratto di estrazione Soxhlet (SE) ha indotto una maggiore citotossicità nelle cellule SH-SY5Y. Questi risultati dimostrano differenze chiare dipendenti dal metodo nella bioattività in vitro degli estratti di Terfezia claveryi.

Abstract

Terfezia claveryi è un tartufo del deserto commestibile tradizionalmente consumato nelle regioni aride. Negli ultimi anni, ha suscitato un crescente interesse scientifico grazie alle sue potenziali proprietà antiossidanti, antimicrobiche e terapeutiche, suggerendo possibili applicazioni nei campi alimentari e sanitari. Tuttavia, nonostante le crescenti evidenze del suo potenziale biologico, l'influenza delle diverse strategie di estrazione sul recupero dei composti bioattivi e il profilo di bioattività in vitro risultante di Terfezia claveryi non è ancora stata chiarita in letteratura. In questo studio è stata valutata la bioattività in vitro degli estratti di Terfezia claveryi ottenuti utilizzando diversi metodi di estrazione e solventi con polarità variabile. È stata determinata la resa di estrazione e gli estratti ottenuti sono stati valutati per attività antiossidanti, antimicrobiche, antibiofilm e citotossici utilizzando sistemi di test consolidati. La capacità antiossidante è stata misurata utilizzando test 2,2-difenil-1-picrilidrazil (DPPH), 2,2′-azino-bis(3-etilbenzotiazolina-6-acido solfonico) (ABTS) e il potere antiossidante ferrico riducente (FRAP), mentre gli effetti citotossici sono stati studiati nelle cellule neuroblastoma SH-SY5Y. La resa di estrazione variava sia in base al metodo che alla polarità del solvente, con la resa massima ottenuta dall'estratto acquoso preparato con il metodo dell'estrazione assistita da ultrasuoni (UAE) (18,40%). È stato stabilito che l'attività antiossidante mostrava differenze significative a seconda del metodo di estrazione, e gli estratti acquosi ottenuti con il metodo di estrazione assistita dalla macerazione (MAE) hanno mostrato un profilo ricco di composti fenolici insieme alla più forte capacità di recupero radicali. L'analisi LC-MS/MS di questo estratto ha rivelato la presenza di nove composti fenolici; l'acido chinico e l'acido clorogenico sono stati identificati come componenti dominanti. Al contrario, estratti derivati da Soxhlet hanno indotto effetti citotossici maggiori nelle cellule SH-SY5Y. Le risposte antimicrobiche e antibiofilm hanno mostrato variazioni relativamente limitate tra i metodi di estrazione, indicando una dipendenza più debole dalla strategia di estrazione per queste attività. Nel complesso, questi risultati dimostrano che il metodo di estrazione biofisica e la selezione del solvente sono fattori determinanti fondamentali del profilo di bioattività in vitro degli estratti di Terfezia claveryi , con effetti marcati osservati per attività antiossidanti e citotossiche.

Introduzione

L'uso di varie specie di funghi per migliorare la salute e prevenire e trattare malattie risale ai tempi antichi 1,2,3. I macrofunghi sono generalmente classificati in due gruppi: epigeosi (funghi) e ipogeo (tartufi)4. Conosciuta come tartufo del deserto, Terfezia claveryi (T. claveryi) è una specie di tartufo di fama mondiale e commestibile appartenente al genere Terfezia5. T. claveryi è comunemente distribuito in regioni aride e semi-aride dove le specie

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Protocollo

NOTA: Il flusso di lavoro sperimentale complessivo per la preparazione e l'analisi degli estratti di T. claveryi è riassunto schematicamente nella Figura 1. Tutti i materiali utilizzati nello studio sono descritti nella Tabella dei Materiali.

1. Autenticazione e preparazione dei materiali fungini

  1. Raccolta e lavorazione del materiale
    NOTA: Tartufi T. claveryi freschi sono stati raccolti nel maggio 2023 da steppe e aree sabbiose, non coltivate (non agricole) nella provincia di Kırsehir, Anatolia centrale, Turchia.....

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Risultati

Identificazione molecolare di T. claveryi
L'amplificazione PCR della regione ITS è stata eseguita utilizzando i primer universali ITS1 e ITS4 per l'identificazione molecolare di T. claveryi. Le sequenze risultanti sono state analizzate e confrontate con le sequenze di riferimento nel database NCBI utilizzando l'algoritmo BLAST, permettendo un'identificazione definitiva delle specie (File supplementare 1).

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Discussione

Il presente studio stabilisce una piattaforma comparativa e standardizzata di estrazione–bioattività per T. claveryi, dimostrando che la strategia di estrazione è un determinante decisivo sia della composizione chimica che della funzionalità biologica. La principale forza metodologica di questo protocollo risiede nel rigoroso controllo dei parametri di estrazione, in particolare il rapporto solido-liquido fisso, il volume standardizzato del solvente, la lavorazione post-estrazio.......

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Dichiarazioni

Gli autori dichiarano di non avere interessi in conflitto. Tutti i dati a supporto dei risultati di questo studio sono disponibili all'interno del manoscritto principale e dei file informativi supplementari. I dataset generati e analizzati durante lo studio attuale sono disponibili dall'autore corrispondente su ragionevole richiesta.

Ringraziamenti

Gli autori hanno dichiarato che questo studio non ha ricevuto alcun sostegno finanziario.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Piastre microtitolate in polistirene a 96 pozziNest Scientific701001Coltura cellulare / piastre per analisi
ABTS (2,2'-azino-bis(3-etilbenzotiazolina-6-acido solfonico))Sigma-AldrichA3219Saggio di recupero radicale cationico
Acetone (grado analitico)Sigma-Aldrich179124Solvente per estrazione
Acetonitrile (grado LC-MS)Sigma-Aldrich34851Fase organica mobile
Acinetobacter baumanniiATCCManassas, VA, USAATCC 17978
Triple Quad LC-MS/MS con sistema UPLC 1290 InfinityTecnologie Agilent6460Analisi quantitativa
Colonna analitica (C18, 4,6 e volte 100 mm, 3,5 e mu; m)Tecnologie Agilent (Zorbax)959990-902Colonna a fase inversa
Standard antiossidanti (Acido ascorbico / Trolox)Sigma-AldrichA7506 / 238813Controlli positivi
Analizzatori di DNA Applied Biosystems 3730xlBiosistemi applicati Analizzatori di DNA 3730xlSistema di sequenziamento del DNA
Biosistemi applicati e commercio; BigDye™ Kit di sequenziamento ciclico Terminator v3.1Biosistemi applicati 4337455Kit di sequenziamento Sanger
Bacillo cereusATCCManassas, VA, USAATCC 14579
Analisi bioinformatica, software BioEdit, Algoritmo utilizzato: assemblaggio CAP contigIbis BiosciencesNASoftware di assemblaggio di sequenze
Ditale per l'estrazione della cellulosaFisherbrand e il commercio;  11724043Utilizzato per l'estrazione dei Soxhlet
Dimetilsolfossido (DMSO)Merck102952Solvente
Kit di isolamento del DNA (Plant & Plant & Kit di isolamento del DNA dei funghi (Polonia)EurX GeneMATRIXE3595Isolamento del DNA 
DPPH (2,2-difenil-1-picrilidrazile)Sigma-AldrichD9132Saggio radicale per recupero
Eagle Medium Modificato di DulbeccoCapricorno,  DMEM-HA
Enterobacter aerogenesATCCManassas, VA, USAATCC 13048
Enterococcus faecalisATCCManassas, VA, USAATCC 29212
Escherichia coliATCCManassas, VA, USAATCC 25922
EtanoloMerck100983Solvente
Acetato di etilMerck109623Solvente per l'estrazione
Siero Fetale Bovino (FBS)Capricorn ScientificFBS-16A
Kit di sequenziamento ciclico BigDyeTerminator v3.1ThermoFisher4337455Kit di sequenziamento
Reagente Folin-CiocalteuSigma-Aldrich 47641Contenuto fenolico totale
Acido formicoSigma-Aldrich 33015Additivo di fase mobile
Acido gallicoCarlo Erba406335Curva di calibrazione
Pianta e pianta Gene MATRIX Kit di isolamento del DNA dei funghiEurX E3595Kit di isolamento del DNA
GraphPad Prism (v9)Visualizzazione dei dati e analisi statisticaN/AAnalisi statistica
Mantello riscaldanteElettrotermico EME30500Usata per mantenere il reflusso solvente
HighPrep e commercio; Sistema di pulizia PCRMAGBIOAC-60005
GhiaccioGrado di laboratorio—Controllo della temperatura durante gli Emirati Arabi Uniti
Klebsiella pneumoniaeATCCManassas, VA, USAATCC 13883
L-glutaminaCapricorn ScientificGermania
Listeria monocytogenesATCCManassas, VA, USAATCC 19115
LiofilizzatoreScientzN/ALiofilizzazione degli estratti
Linea magnetica e traguardo; sistema di pulizia PCR basatoMAGBIOAC-60005PCR
MetanoloMerck106009Solvente per estrazione
n-EsanoMerck103701Solvente per estrazione
Penicillina/StreptomicinaCapricorn ScientificGermania
Pseudomonas aeruginosaATCCManassas, VA, USAATCC 27853
Carta filtro (n. 541)Cytiva1541-125 VNel processo di filtrazione con estratto
Evaporatore rotativoBuchi R10011100V101Rimozione del solvente
Shigella dysenteriaeATCCManassas, VA, USAATCC 13313
Carbonato di sodioMerck106392Analisi fenolica totale
SPECTROstar Nano Microplate Reader BMG LabtechMisurazioni di assorbanza
Staphylococcus aureusATCCManassas, VA, USAATCC 25923
Staphylococcus epidermidisATCCManassas, VA, USAATCC 12228
Software di analisi statistica (SPSS, v23)Analisi dei datiNA
Thermo Scientific Nanodrop 2000 Thermo Fisher ScientificND-2000
Triptone Soy Agar (TSA)MerckGermania—
Brodo di Soia di Triptone (TSB)MerckGermania—
Omogeneizzatore a ultrasuoniScientzSCIENTZ-650LEstrazione assistita da ultrasuoni

Riferimenti

  1. Wasser, S. P., Weis, A. L. Medicinal properties of substances occurring in higher basidiomycetes mushrooms: current perspectives (Review). Int. J. Med. Mushrooms. 1 (1), 31-62 (1999).
  2. Wasser, S. P.

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Ristampe e permessi

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