Terfezia claveryi è un tartufo del deserto commestibile tradizionalmente consumato nelle regioni aride. Negli ultimi anni, ha suscitato un crescente interesse scientifico grazie alle sue potenziali proprietà antiossidanti, antimicrobiche e terapeutiche, suggerendo possibili applicazioni nei campi alimentari e sanitari. Tuttavia, nonostante le crescenti evidenze del suo potenziale biologico, l'influenza delle diverse strategie di estrazione sul recupero dei composti bioattivi e il profilo di bioattività in vitro risultante di Terfezia claveryi non è ancora stata chiarita in letteratura. In questo studio è stata valutata la bioattività in vitro degli estratti di Terfezia claveryi ottenuti utilizzando diversi metodi di estrazione e solventi con polarità variabile. È stata determinata la resa di estrazione e gli estratti ottenuti sono stati valutati per attività antiossidanti, antimicrobiche, antibiofilm e citotossici utilizzando sistemi di test consolidati. La capacità antiossidante è stata misurata utilizzando test 2,2-difenil-1-picrilidrazil (DPPH), 2,2′-azino-bis(3-etilbenzotiazolina-6-acido solfonico) (ABTS) e il potere antiossidante ferrico riducente (FRAP), mentre gli effetti citotossici sono stati studiati nelle cellule neuroblastoma SH-SY5Y. La resa di estrazione variava sia in base al metodo che alla polarità del solvente, con la resa massima ottenuta dall'estratto acquoso preparato con il metodo dell'estrazione assistita da ultrasuoni (UAE) (18,40%). È stato stabilito che l'attività antiossidante mostrava differenze significative a seconda del metodo di estrazione, e gli estratti acquosi ottenuti con il metodo di estrazione assistita dalla macerazione (MAE) hanno mostrato un profilo ricco di composti fenolici insieme alla più forte capacità di recupero radicali. L'analisi LC-MS/MS di questo estratto ha rivelato la presenza di nove composti fenolici; l'acido chinico e l'acido clorogenico sono stati identificati come componenti dominanti. Al contrario, estratti derivati da Soxhlet hanno indotto effetti citotossici maggiori nelle cellule SH-SY5Y. Le risposte antimicrobiche e antibiofilm hanno mostrato variazioni relativamente limitate tra i metodi di estrazione, indicando una dipendenza più debole dalla strategia di estrazione per queste attività. Nel complesso, questi risultati dimostrano che il metodo di estrazione biofisica e la selezione del solvente sono fattori determinanti fondamentali del profilo di bioattività in vitro degli estratti di Terfezia claveryi , con effetti marcati osservati per attività antiossidanti e citotossiche.