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Articolo metodologico

Esplorazione del meccanismo della formula San Jie Tong Mai contro l'aterosclerosi tramite farmacologia di rete e proteomica

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DOI:

10.3791/70080

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17 aprile 2026

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1Department of Cardiology, the Third Affiliated Clinical Hospital of Changchun University of Chinese Medicine, 2Department of Respiratory, The Affiliated Hospital of Changchun University of Chinese Medicine, 3The Affiliated Hospital of Changchun University of Chinese Medicine

In questo articolo

Sommario

Questo studio dimostra che la formula San Jie Tong Mai attenua l'aterosclerosi nei topi ApoE-/- regolando il metabolismo dei glucocorticoidi mediato da Hsd11b1, migliorando così la dislipidemia e l'infiammazione vascolare. Analisi integrate di farmacologia di rete, proteomica e docking molecolare rivelano un meccanismo sinergico multi-componente e multi-bersaglio alla base dei suoi effetti anti-aterosclerotici.

Abstract

Questo studio mirava a chiarire il meccanismo della Formula San Jie Tong Mai (SJTMF) contro l'aterosclerosi (AS), una delle principali cause di morbilità cardiovascolare. Utilizzando modelli murini ApoE-/- abbiamo dimostrato che SJTMF inibisce significativamente la progressione della placca AS. Attraverso una strategia integrata di farmacologia di rete e proteomica, sono stati identificati cinque componenti bioattivi principali: beta-sitosterolo, naringenina, luteolina, isorhamnetina e acido 3beta-idrossi-24-metilene-8-lanostene-21-oico. Contemporaneamente, la proteomica ha rivelato 129 proteine correlate all'AS che sono state espresse differenzialmente. L'aggancio molecolare ha confermato interazioni di legame ad alta affinità tra questi componenti e il bersaglio chiave Hsd11b1, con energie di legame tutte sotto -5 kcal/mol. Le indagini meccanicistiche hanno inoltre rivelato che la SJTMF potrebbe regolare il metabolismo dei glucocorticoidi mediato da Hsd11b1. Questa regolazione contribuisce a un miglioramento significativo sia della dislipidemia che dell'infiammazione vascolare, sopprimendo così lo sviluppo dell'AS. Collettivamente, questo lavoro dimostra, per la prima volta, il meccanismo innovativo attraverso cui una formula di medicina tradizionale cinese esercita effetti anti-AS attraverso la regolazione sinergica multicomponente del bersaglio Hsd11b1 , offrendo nuove intuizioni per l'intervento terapeutico.

Introduzione

L'aterosclerosi (SA), una malattia infiammatoria cronica che colpisce la vascolarizzazione sistemica, costituisce la principale base patologica degli eventi cardiovascolarie cerebrovascolari 1. La sua patogenesi coinvolge complesse interazioni tra fattori genetici, ambientali, psicosociali e patologici multifattoriali, mostrando caratteristiche multistadio e poligeniche. Sebbene le attuali strategie terapeutiche — in particolare agenti abbassanti i lipidi come le statine e gli inibitori della Proprotein Convertase Subtilisin/Kexin Tipo 9 (PCSK9) — riducano efficacemente i livelli di colesterolo delle lipoproteine a bassa densità (LDL-C), esse non affrontano completamente il rischio infiammatorio residuo che provoca eventi cardiovascolariricorrenti 2. Inoltre, gli effetti avversi associati alla terapia (ad esempio, diabete a nuova esorzione, miotosicità, insufficienza epatorenale) limitano l'uso a lungo termine e l'intensificazione della terapia abbassante ilipidi 3,4. Queste limitazioni evidenziano la necessità di approcci complementari che mirino direttamente all'infiammazione vascolare, incluse le terapie antinfiammatorie, per ridurre ulteriormente il rischio cardiovascolare oltre la sola riduzione dei lipidi.

Nella medicina tradizionale cinese (MTC), la SA rientra nelle categorie di "impedimento toracico" (Xiong Bi) e "accumulo vasiale" (Mai Ji), con il "intrecciamento di catarro e stasi" (Tanyu Hujie) riconosciuto come patogenesi centrale. Guidati dal principio dell'"idroterapia trasformatrice della stasi" (Yuneng Huashui), il nostro gruppo di ricerca ha sviluppato la "Formula San Jie Tong Mai (SJTMF)" composta da 14 erbe, tra cui Salvia miltiorrhiza (Danshen) e Whitmania pigra Whitman (Shuizhi), per risolvere sinergicamente la torbidità del catarro, dissipare la stasi e promuovere la diuresi. Studi clinici preliminari hanno dimostrato l'efficacia della SJTMF nel migliorare significativamente i profili lipidici e nel stabilizzare/invertire placche aterosclerotiche in pazienti anziani con AScarotide 5. Le indagini sperimentali hanno ulteriormente rivelato la sua capacità di inibire la progressione dell'AS modulando la polarizzazione dei macrofagi e le vie dell'autofagia 6,7. Tuttavia, le caratteristiche multi-componente, multi-bersaglio e multi-percorso delle formule della MTC presentano sfide nel chiarire sistematicamente i loro meccanismi regolatori integrati utilizzando approcci riduzionisti convenzionali.

Per esplorare i meccanismi molecolari che mediano gli effetti aterosclerotici della SJTMF e affrontare le sfide, questo studio ha adottato una strategia multidisciplinare integrata. La farmacologia di rete, concettualizzata daHopkins 8,9, è stata utilizzata per costruire una rete multidimensionale "componente erboristico-bersaglio-percorso malattia". Questo approccio ha facilitato la previsione dei principali composti attivi della SJTMF e dei potenziali bersagli terapeutici per l'intervento nell'AS, coerente con le caratteristiche regolatorie olistiche della MTC. A complemento di ciò, la tecnologia proteomica, sfruttando un'analisi proteica qualitativa e quantitativa ad alta produttivitàe alta precisione, ha monitorato dinamicamente i cambiamenti nel profilo di espressione proteica associato all'AS dopo l'intervento SJTMF in modelli animali. Ciò permise l'identificazione di molecole di effettore chiave ed eventi di segnalazione, fornendo così prove sperimentali per l'esplorazione meccanicistica. Successivamente, sono state eseguite simulazioni di aggancio molecolare ad alta precisione per valutare le modalità di legame e le energie di legame tra i bersagli principali previsti dalla farmacologia delle reti e i componenti bioattivi chiave, fornendo una base teorica per potenziali interazionicomponente-bersaglio 11. Rispetto ad approcci alternativi, come affidarsi esclusivamente a previsioni di farmacologia di rete (soggette ad alti tassi di falsi positivi e prive di validazione sperimentale)12 o combinare solo proteomica con docking molecolare (che potrebbe non catturare le interazioni a livello di sistema previste dall'analisi di rete), questa strategia integrata affronta sinergicamente queste limitazioniintrinseche 13.

Integrando tecniche multidimensionali, questo studio mira a chiarire sistematicamente la base farmacodinamica chiave del materiale, la rete target centrale e i meccanismi sinergici multi-percorso della SJTMF. Fornendo così supporto teorico guidato dai meccanismi per promuovere la modernizzazione della MTC e lo sviluppo di farmaci innovativi.

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Protocollo

Tutte le procedure sugli animali sono state condotte con l'approvazione del Comitato per gli Animali Sperimentali dell'Università di Medicina Cinese di Changchun (Approvazione Etica n. 2023521). Maschi specifici senza patogeno (SPF) C57BL/6J e topi ApoE⁻/⁻ (5 settimane, 18-22 g) sono stati inclusi nello studio (Licenza per l'Uso di Animali da Laboratorio n. SCXK (JI) 2023-002 e SCXK (SU) 2021-0013). Le informazioni riguardanti reagenti e strumentazione sono fornite nella Tabella dei Materiali.

1. Farmacologia delle reti

  1. Previsione dei componenti attivi e dei bersagli della SJTMF
    1. Selezionare i componenti attivi della buccia di Salvia miltiorrhiza, Panax notoginseng, Artemisia scoparia, Poria cocos, Alisma plantago-aquatica L, Amomum villosum, Santalum albumL, Citrus aurantium e Citrus reticulata peel utilizzando la biodisponibilità orale (OB) ≥ 30% e la somiglianza farmacologica (DL) ≥ 0,18 come criteri.
    2. Seleziona i componenti attivi dei materiali medicinali Whitmania pigra Whitman, Bombyx batryticatus, Periostracum cicadae, Caulis Bambusae in Taeniam e Ophicalcitum applicando la Regola dei Cinque di Lipinski, con i seguenti parametri: miLogP ≤ 5, nOHNH ≤ 5 e nOH ≤ 10.
    3. Combina i composti selezionati con i loro codici SMILES per prevedere i bersagli composti.
      NOTA: Per dettagli sui due database sopra menzionati, consulta la Tabella dei Materiali.
  2. Previsione di obiettivi legati agli AS e costruzione di una rete "drug-component-target".
    1. Utilizzare il database GeneCards per recuperare obiettivi di malattie correlate all'AS utilizzando una terminologia patologica standardizzata.
    2. Utilizzare il software Venny 2.1 per identificare i bersagli intersecanti tra SJTMF e AS come potenziali bersagli terapeutici di SJTMF per AS.
    3. Usa Cytoscape 3.9.1 per costruire un diagramma di rete "farmaco-componente-bersaglio".
      NOTA: Per i dettagli sui database menzionati sopra, consulta la Tabella dei Materiali.

2. Acclimatazione

  1. Ospita tutti i topi in strutture SPF (24 °C; 50-60% di umidità; ciclo chiaro/buio di 12 ore). Fornisci ad libitum cibo e acqua standard. Prevedi 7 giorni di acclimatazione prima degli esperimenti.

3. Preparazione del SJTMF

  1. Prepara la formulazione a 14 erbe contenente: Salvia miltiorrhiza (Dan Shen) 30 g, Artemisia scoparia (Yin Chen) 10 g, Panax notoginseng (San Qi) 10 g, Poria cocos (Fu Ling) 10 g, Amomum villosum (Sha Ren) 10 g, Alisma plantago-aquatica L (Ze Xie) 30 g, Santalum albumL (Tan Xiang) 10 g, buccia di Citrus reticulata (Chen Pi) 10 g, Citrus aurantium (Zhi Qiao) 10 g, Whitmania pigra Whitman (Shui Zhi) 10 g, Periostracum cicada (Chan Tui) 10 g, Bombyx batryticatus (Jiang Can) 10 g, Caulis Bambusae in Taeniam (Zhu Ru) 10 g, e Ophicalcitum (Hua Rui Shi) 30 g.
  2. Decoccare materiali erboristici (1.800 g totali) 3× con 8 volumi di acqua distillata (1,5 h per estrazione).
  3. Filtra attraverso garze e nylon a 100 rete.
  4. Concentrate il filtrato a 60 °C (densità: 1,23-1,27). Concentrato secco a pressione ridotta a 70 °C.
  5. Polverizzare l'estratto essiccato attraverso un setaccio da 80 mesh (resa: 20,6%).
    NOTA: A seguito di un precedente rapporto7, i topi hanno ricevuto 3,56 g∙kg⁻¹∙day⁻¹ di estratto SJTMF (normalizzato in base all'area superficiale corporea).

4. Istituzione del modello

  1. Indurre l'AS nei topi ApoE-/- utilizzando una dieta ricca di grassi di 12 settimane (HFD; 20% grassi, 1,25% colesterolo). Misura il peso corporeo ogni 7 giorni per il monitoraggio metabolico.
  2. Assegnare i topi C57BL/6J al gruppo di controllo (Controllo, dieta normale + soluzione salina). Assegnare casualmente i topi modellati con successo in quattro gruppi: gruppo modello, gruppo Atorvastatina (0,0026 mg/g atorvastatina), gruppo SJTMF-L (SJTMF a bassa dose, 3,56 g∙kg-1∙day-1), gruppo SJTMF-H (SJTMF ad alta dose, 7,12 g∙kg-1∙day-1)7. Somministrare tutti gli interventi tramite una gara standardizzata da 0,4 mL al mattino per 4 settimane.
    NOTA: Le soluzioni stock di SJTMF sono state preparate secondo il nostroprotocollo 7 stabilito. Gli interventi sperimentali sono iniziati alla nona settimana, con il dosaggio mattutino che ha mantenuto il ritmo temporale clinico. I topi sono stati definiti come modellati con successo quando sono state osservate evidenti placche aterosclerotiche nell'aorta tramite colorazione grossolana di rossoolio 7.

5. Raccolta di campioni, raccolta e conservazione dell'Aorta

NOTA: Dopo 4 settimane di somministrazione intragastrica, digiunare tutti i topi per 12 ore (acqua ad libitum). Misura il peso corporeo finale, poi sacrificalo tramite una lussazione cervicale sotto anestesia.

  1. Incisci l'addome del topo fino al processo xifoide.
  2. Isolare l'aorta dalla radice aortica fino alla biforcazione comune dell'arteria iliaca.
  3. Rimuovere il tessuto adiposo in eccesso e trasettare l'aorta circa 1 cm distale all'arco aortico.
  4. Fissa l'aorta nel paraformaldeide o congelala rapidamente in azoto liquido.
    NOTA: Raccogli il siero e conserva i tessuti aortici a -80 °C per analisi future.
  5. Macchiatura HE
    1. Posizionare le sezioni in xilene in sequenza per 20 minuti ciascuna, il doppio in totale; Poi trasferisci in etanolo assoluto per 10 minuti ciascuno, il doppio in totale. Idratare le sezioni passando attraverso una serie decrescente di etanolo classificato (95%, 90%, 80%, 70%), 5 minuti per concentrazione.
    2. Tingere in sequenza con ematossilina allo 0,4% per 3-8 minuti, poi con soluzione di eosina allo 0,5% per 1-3 minuti.
      NOTA: Sciacquare bene con acqua distillata tra un passo e l'altro.
    3. Disidratare le sezioni tramite una serie crescente di etanolo (dal 95% all'etanolo assoluto), 5 min per concentrazione. Liberare le sezioni in xilene per 5 minuti ciascuna, il doppio in totale. Lascia asciugare completamente all'aria, poi monta con resina neutra.
    4. Osserva al microscopio e cattura immagini.

6. Preparazione totale di proteine da campioni di tessuto aortico

NOTA: Le proteine sono state isolate dai tessuti aortici di ciascuno dei tre gruppi sperimentali (gruppo di controllo, gruppo modello, gruppo SJTMF-H).

  1. Omogeneizzare i tessuti aortici in tampone di lisi (1,5% SDS/100 mM Tris-HCl, pH 8,5), poi incubare a 95 °C per 15 minuti per ottenere la denaturazione proteica.
  2. Raffreddare i campioni, poi centrifugarli a 12.000 × g e 4 °C per 5 minuti e raccogliere il soprandante. Precipitare le proteine nel sovrantato utilizzando il metodo della precipitazione dell'acetone.
  3. Ridissolvi il precipitato proteico (8 M Urea/100 mM Tris-HCl, pH 8,5), poi prepara il kit di analisi BCA secondo le istruzioni del produttore e determina la concentrazione totale di proteine (vedi Tabella dei materiali).
    NOTA: Con la stessa quantità di proteina tra diversi campioni, la soluzione ridisciolta è stata utilizzata per riempire tutti i campioni allo stesso volume.
  4. Effettuare riduzione proteica e alchilazione con TCEP e CAA a 37 °C per 1 ora.
  5. Aggiungere tripsina (1:50) al campione proteico e incubare a 37 °C per 24 ore (vedi Tabella dei Materiali).
  6. Usa TFA per regolare il pH a 6,0 e interrompere la digestione. Centrifugare il campione a 12.000 × g per 15 minuti, poi purificare i peptidi dal soprantantante utilizzando una colonna di desalinizzazione SDB-RPS auto-costruita (vedi Tabella dei Materiali).
    NOTA: Il peptide eluato è stato essiccato sottovuoto e conservato a -20 °C per un uso successivo.

7. Cromatografia liquida - spettrometria di massa tandem (LC - MS/MS)

  1. Iniettare 200 ng di digestione peptidica con un volume di iniezione di 1 μL su una colonna di trappola C18 (75 μm × 2 cm, 3 μm, 100 Å). I peptidi sono stati poi separati su una colonna analitica C18 a fase inversa (75 μm × 15 cm, 1,7 μm, 100 Å) a una portata di 0,3 μL/min.
  2. Utilizzare acqua contenente 0,1% di acido formico (FA) come fase mobile A e acetonitrile (ACN) contenente 0,1% di FA come fase mobile B (vedi Tabella dei materiali). Applica un gradiente lineare dal 12% al 30% B per 0-12 minuti, seguito da un aumento dal 30% all'80% B in 12-15 minuti, e mantieni all'80% B da 15-18 minuti per il lavaggio della colonna. Imposta la portata a 0,300 μL/min da 0 a 15 min, poi aumentala a 0,400 μL/min da 16 a 18 min. Imposta la tensione capillare a 1500 V.
  3. Acquisire spettri MS e MS/MS nell'intervallo da 100 a 1700 m/z.
  4. Scansiona la mobilità degli ioni nell'intervallo da 0,6 a 1,6 Vs/cm². Imposta il tempo di accumulo e il tempo di rampa a 50 ms.

8. Analisi della funzione delle proteine

NOTA: Le proteine differenzialmente espresse (DEP) della proteomica sono state intersecate con target chiave della farmacologia di rete, e le proteine bersaglio sovrapposte sono state selezionate per l'annotazione funzionale Gene Ontology (GO) e l'analisi dell'arricchimento delle vie della Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG). Le categorie funzionali e i percorsi con P < 0,05 sono stati considerati significativi.

  1. Analizza i dati grezzi della DIA in modalità senza libreria.
  2. Cerca i file degli spettri nel database delle sequenze proteiche di Mouse.
  3. Imposta i parametri principali di ricerca.
    1. Abilitare opzioni di generazione di ioni precursori per la generazione di librerie spettrali in silico-previsto.
    2. Specificare l'enzima con un massimo di 2 clivaganti mancati consentiti (vedi Tabella dei materiali).
    3. Stabilire la carbamidilazione della cisteina (C) come modifica fissa.
    4. Considera l'ossidazione della metionina (M) e l'acetilazione N-terminale della proteina come modifiche variabili.
    5. Imposta la precisione di massa del precursore e la precisione di massa MS1 a 15 ppm.
    6. Abilita il matching tra run e inferenza euristica proteica.
    7. Imposta la soglia del Precursore del Tasso di Falsa Scoperta (FDR) all'1% per un'identificazione affidabile.
  4. Esegui l'analisi DIA-NN (1.8.2 beta 11).
    NOTA: Eseguire la quantificazione a livello proteico usando DIA-NN e condurre analisi bioinformatiche e visualizzazione usando R. I DEP significative sono stati determinati dal valore P del test t di Student e dalle soglie di cambiamento di piegatura.

9. Aggancio molecolare

  1. Scarica la struttura cristallina tridimensionale della proteina target dal database RCSB PDB e salvala in formato PDB; nel frattempo, scarica la struttura molecolare della componente attiva principale di SJTMF dal database PubChem e salvala in formato SDF.
  2. Utilizzare PyMOL 2.6.0 per effettuare la rimozione dell'acqua e l'idrogenazione sulla struttura proteica target, rimuovere liganti endogeni irrilevanti e salvare la struttura proteica processata in formato PDB; ottenere i parametri della tasca di attracco tramite il plugin Getbox di PyMOL, con i parametri della grid box impostati come segue: center_x = -7,2, center_y = 53,4, center_z = 30,6, size_x = 73,7, size_y = 85,9, size_z = 67,2, e il numero di conformazioni di attracco num_modes = 10.
  3. Importare separatamente il file della proteina target processata e il file del core compound di SJTMF in AutoDock Tools 1.5.6 per convertire entrambi i file in formato PDBQT, poi eseguire il docking molecolare con AutoDock Vina 1.1.2 basandosi sui parametri della grid box sopra definiti.
  4. Visualizza i risultati dell'aggancio molecolare con PyMOL.

10. Statistiche

  1. Esegui analisi statistiche.
  2. Esprime i risultati come media ± deviazione standard (SD).
  3. Specificare l'uso del test di Tukey Honest Significant Difference (HSD) per analisi post hoc dopo ANOVA unidirezionale quando i dati hanno raggiunto normalità e omogeneità delle varianze; applicare il test di Games-Howell per i dati eteroscedastici. Consideriamo un p < 0,05 statisticamente significativo.
  4. Visualizza i dati usando GraphPad Prism8.0.2.

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Risultati

SJTMF sopprime la formazione di placche aterosclerotiche nei topi ApoE-/-
Per indagare l'effetto inibitorio della SJTMF sull'AS, è stato utilizzato il modello murino ApoE-/- per monitorare i cambiamenti di peso corporeo e osservare alterazioni istopatologiche nell'aorta. Rispetto al gruppo modello, l'intervento SJTMF ha mitigato l'aumento di peso corporeo nei topi alimentati con ApoE-/- alimentati con...

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Discussione

Sebbene studi precedenti abbiano dimostrato che SJTMF esercita effetti antinfiammatori e induce la polarizzazione dei macrofagi nei modelli muriniApoE⁻/⁻ 6,7, i meccanismi molecolari specifici alla base della sua attività anti-aterosclerotica rimangono poco chiari. Il principio del "stesso trattamento per malattie diverse" nella medicina tradizionale cinese d...

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Dichiarazioni

Gli autori non hanno conflitti di interesse da dichiarare.

Ringraziamenti

Questo studio è stato sostenuto dalla Natural Science Foundation della provincia di Jilin (n. YDZJ202401644ZYTS).

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
2-Cloroacetamide (CAA)Sigma-AldrichC0627-100G
Soluzione di fissazione al 4% di paraformaldeideSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.80096618
0.5– 10 & micro; Micropipetta Leppendorf4924000029
10 & ndash; 100 & micro; Micropipetta Leppendorf4924000053
20 & ndash; 200 & micro; Micropipetta Leppendorf4924000061
100 & ndash; 1.000 & micro; Micropipetta Leppendorf4924000088
1000 & micro; Punte per pipette LNEST Life Science Co., Ltd.303216
10 & micro; Punte per pipette LNEST Life Science Co., Ltd.301016
20 & micro; Punte per pipette LNEST Life Science Co., Ltd.302106
Tubo centrifuga da 15 mLNEST Life Science Co., Ltd.601052
Tubo centrifuga da 1,5 mLNEST Life Science Co., Ltd.615601
Un database guidato ad alto rendimento - e riferimento - di medicina tradizionale cinese (HERB)/http://herb.ac.cn/v2
Acetonitrile (LC-MS)Thermo Fisher ScientificA955-4
Acetone acetoneSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.10000418
Acqua ammoniacaSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.10011028
AutoclaveShanghai Sanshen Medical Devices Co., Ltd.YM75
Acclaim PepMap (75µ m*2cm, C18, 3µ m, 100Å)Thermo164535
AURORA ULTIMATE (75µ m*25cm, 1,6µ m, 100Å)AURORAAUR3-25075C18-CSI
Kit per il test proteico BCASangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.C503021-0500
Centrifuga refrigerata ad alta velocità da bancoHunan Kecheng Instrument Equipment Co., Ltd.H1 - 16KR
Blu di bromofenoloSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.71008060
Riscaldatore a blocchiStrumenti Miu di HangzhouDKT-100
CloroformioSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.10006818
Sistema di imaging a chemiluminescenzaHangzhou Shenhua Technology Co., Ltd.SH - 523
Panca pulitaSuzhou Jinghua Equipment Co., Ltd.SW-CJ-2D
Vetro di coperturaJiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd.10212450C
Cytoscape v3.9.1//
DIA-NN (V1.8.1)L'Istituto Francis Crickgithub.com/vdemichev/DiaNN
Display digitale a bagno d'acqua a temperatura costanteChangzhou Jinnan Instrument Manufacturing Co., Ltd.HH - W600
Shaker di rimozioneWuhan Lingsi Biotechnology Co., Ltd.TSY-B
Macchina per disidratazioneWuhan Junjie Electronics Co., Ltd.JT-12J
EosinaWuhan Lingsi Biotechnology Co., Ltd.E8090
Incorporamento della paraffinaSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.69019361
Etanolo AssolutoSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.10009218
Macchina di IncorporamentoWuhan Junjie Electronics Co., Ltd.JB-P5
GraphPad Prism/8.0.2
Acido Acetico GlacialeSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.10000218
GeneCards/https://www.genecards.org/
GliceroloSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.10010618
GlicinaBiofroxx1275GR500
Ontologia Genica (GO)/geneontology.org
EmatossilinaWuhan Lingsi Biotechnology Co., Ltd.G1140
Shaker orizzontaleHaimen Qilinbeier Instrument Manufacturing Co., Ltd., JiangsuTS - 1
Recinto barriera idrofobicoServicebioWG1066-1
HCIFabbrica di Reagenti Chimici di XinyangGB622-89
Cromatografia liquida ad alte prestazioniAgilent1200
IsopropanoSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.80109218
Image-Pro PlusCibernetica dei MediaVersione 6.0
Sistema di imagingNikonDS-Fi3
Forbici micro-dissezionatrici IRIS-FineRWD Life Science Co., Ltd.S12004-09
Enciclopedia di Geni e Genomi di Kyoto (KEGG)/www.genome.jp/kegg/
Vetri per microscopioNantong Mevid Life Science Co., Ltd.PC2-301
Forno a microondeGalanz Ovento a Microonde Elettrodomestici Co., Ltd.P70D20TL-P4
Mini centrifugaLaboratorio del DragoD1008E
Resina neutraWuhan Lingsi Biotechnology Co., Ltd.G8590
NaClSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.10019318
NCBI/www.ncbi.nlm.nih.gov
Pulverizzatore a celle ultrasoniche senza contattoSCIENTZ08-III
n-ButanoloSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.100052190
FornoShanghai Huitai Instrument Manufacturing Co., Ltd.DHG-9140A
PubChem/https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/
PBS Fosfato Buffer PowderWuhan Lingsi Biotechnology Co., Ltd.P1010
Microtomo patologicoLeica Instruments Co., Ltd. (Shanghai)RM2016
Centrifuga portatileWuhan Lingsi Biotechnology Co., Ltd.D1008
R 4.5.1//
Buffer di lisi RIPA (1,5 ML)MeilunbioMA0151
Dodecile solfato di sodio (SDS)Sigma-AldrichL3771-500G
SpeedVacGemmyCV200
Software SPSSStatistiche IBM SPSSVersione 22
Pinze per Legare SutureRWD Life Science Co., Ltd.FC11001R-11
Microscopio stereo dissezionaleRWD Life Science Co., Ltd.77001S
Colonne di rotazione RMCWBIOCW0597S
spettrometro di massa timsTOF ProBruker DaltonicstimsTOF Pro
Piattaforma di Database e Analisi dei Sistemi di Farmacologia della Medicina Tradizionale Cinese (TCMSP)/https://tcmspw.com/tcmsp.php
TermomiscelatoreStrumenti Miu di HangzhouMTC-100
Acido trifluoroacetico (TFA)Sigma-Aldrich299537-500G
Tris(2-carbosxietil)fosfina cloridrato (TCEP)Sigma-AldrichC4706-10G
TripsinaSigma-AldrichT575-31N-10
Omogeneizzatore TissutaleStrumenti Miu di HangzhouMT-30K
Tris(idrossimetil)amminometano (Tris base)Sigma-AldrichT1503-1KG
Sistema UltiMate 3000 RSLCnanoThermo ScientificUltiMate 3000 RSLCnano
UniProt (03-01-2023)L'Istituto Francis Crickgithub.com/vdemichev/DiaNN
UreaSigma-Aldrich51456-500G
Venny2.1/https://www.bioinformatics.com.cn/static/others/jvenn/example.html
Miscelatore a vorticeKylin-BellVORTEX-5
Forbici Vannas a mollaRWD Life Science Co., Ltd.S11001-08
Acqua (LC-MS)Thermo Fisher ScientificW6-4
XyleneSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.10023418

Riferimenti

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