Analisi dei biomarcatori della piroptosi specifica per età e intervento non farmacologico nella sindrome da difficoltà respiratoria acuta

Sommario

Questo protocollo delinea un flusso di lavoro integrato di bioinformatica e apprendimento automatico per identificare biomarcatori di piroptosi stratificati secondo l'età nella sindrome da difficoltà respiratoria acuta (ARDS), abbinato a una metodologia in vivo che utilizza un modello di ratto indotto da LPS per validare sperimentalmente l'efficacia preliminare dell'energia dello spettro, dell'acqua e delle radiazioni infrarosse lontane.

Abstract

La sindrome da disabilità respiratoria acuta (ARDS) è un disturbo polmonare infiammatorio pericoloso per la vita, con alta morbilità e mortalità, in cui la pirotosi è emersa come un meccanismo patogeno fondamentale. Considerando che differenze immunitarie e molecolari legate all'età possono influenzare la piroptosi e la risposta terapeutica, questo studio ha mirato a identificare biomarcatori associati alla piroptosi specifici per età e a valutare il potenziale terapeutico dell'acqua a energia spettrale (SEW) combinata con radiazioni infrarosse lontane (FIR). Il flusso di lavoro completo del protocollo comprende l'elaborazione di dataset trascrittomici, la stratificazione per età, il machine learning e l'analisi dell'infiltrazione immunitaria per identificare geni hub specifici per età. Questa fase computazionale è seguita da una validazione sperimentale in vivo utilizzando un modello ARDS indotto da LPS, impiegando valutazione istologica, ELISA e Western blotting per valutare rigorosamente l'intervento SEW+FIR e verificare l'espressione genica del hub. Sono stati identificati sedici geni associati alla piroptosi, tra cui AXL e GSDME prevalentemente associati alla gravità dell'ARDS nei pazienti più anziani, mentre SPP1 era più rilevante negli individui più giovani. Sono state osservate firme immunitarie distinte, con arricchimento e immunosoppressione dei macrofagi M2 nei pazienti più anziani, in contrasto con un'attivazione pro-infiammatoria nei più giovani. Le analisi funzionali hanno implicato questi geni nelle vie metaboliche, infiammatorie e di regolazione immunitaria. In vivo, il trattamento SEW+FIR ha alleviato il danno polmonare, soppresso la produzione di citochine infiammatorie (IL-1β, IL-18, IL-6, TNF-α) e modulato l'espressione di AXL, GSDME e SPP1. Collettivamente, questi risultati sottolineano differenze dipendenti dall'età nei meccanismi correlati alla piroptosi nell'ARDS e identificano AXL, GSDME e SPP1 come candidati biomarcatori preliminari che giustificano ulteriori validazioni cliniche. Nell'attuale modello sperimentale murino, SEW+FIR ha dimostrato effetti protettivi alleviando l'infiammazione sistemica e modulando la segnalazione correlata alla piroptosi, fornendo un supporto fondamentale in vivo per il suo potenziale come strategia aggiuntiva non farmacologica.

Introduzione

La lesione polmonare acuta (ALI)/sindrome da difficoltà respiratoria acuta (ARDS) è una grave malattia respiratoria caratterizzata da un'insorgenza acuta di iposemia grave e edema polmonare non cardiogenico, principalmente dovuto a danni alveolari^{diffusi 1}. Può essere scatenata da una serie di insulti polmonari ed extrapolmonari. Le cause polmonari includono polmonite infettiva, aspirazione del contenuto gastrico e gravi traumi toracici, mentre i fattori scatenanti extrapolmonari derivano da risposte infiammatorie sistemiche secondarie a insulti non polmonari, come sepsi, pancreatite, traumi non toracici, ustioni gravi, trasfusioni massicce e lesioni da reperfusione dopo trapianto polmonare o^{trombomia 1,2}. Nonostante i progressi nell'assistenza di supporto, l'ARDS rimane una sfida clinica importante nella medicina di terapia intensiva, con alti tassi di morbilità e mortalità^{a livello mondiale 3}. Pertanto, comprendere la patogenesi di ALI/ARDS è fondamentale per sviluppare trattamenti efficaci.

La pirototisi, una forma infiammatoria di morte cellulare programmata ampiamente caratterizzata nel contesto della soppressione tumorale e delle terapie^{oncologiche 4}, è ora riconosciuta come un attore chiave nella fisiopatologia^{ARDS 5}. A differenza dell'apoptosi, la piroptosi è mediata dall'attivazione dell'inflammasoma e dalla successiva clivatura del gasdermin D (GSDMD), portando alla formazione dei pori di membrana, alla lisi cellulare e al rilascio di citochine pro-infiammatorie come l'interlacuchina-1β (IL-1β) e l'interleuchina-18 (IL-18)⁶. Nell'ARDS, un'eccessiva attivazione della pirottosi nei macrofagi alveolari, nelle cellule epiteliali e nelle cellule endoteliali contribuisce a una risposta infiammatoria esagerata, alla rottura della barriera alveolare-capillare, all'edema polmonare e alla progressione dell'iposemia⁷. Crescenti evidenze suggeriscono che mirare ai principali regolatori nella via della piroptosi possa rappresentare una strategia nuova per attenuare l'infiammazione e migliorare gli esiti clinici nell'ARDS ^8,9. Tuttavia, rimane una lacuna di conoscenza fondamentale riguardo all'impatto dell'invecchiamento—un fattore chiave per la suscettibilità e la prognosi all'ARDS—sul panorama pirottico. Gli studi attuali spesso trattano l'ARDS come una condizione monolitica, trascurando il potenziale di fattori molecolari specifici per età che potrebbero dettare risposte terapeutiche personalizzate.

Negli ultimi anni, l'applicazione di nuovi interventi biofisici e di materiali funzionali avanzati—come gli emettitori SEW e radiazioni infrarossi lontane (FIR)—ha guadagnato terreno come strategie non farmacologiche per modulare le risposte immunitarie e sopprimere l'infiammazione^10,11. Queste terapie sono state segnalate come potenziate per la proliferazione dei leucociti e l'attività fagocitica, per ridurre l'edema tissutale e per mitigare i disturbi microcircolatori indotti da endotossine — inclusi l'adesione dei leucociti, l'aggregazione degli eritrociti, l'attivazione delle piastrine e il danno^endoteliale 12,13,14. Nei ratti ARDS indotti da lipopolisaccaridi (LPS), il trattamento combinato SEW e FIR ha ridotto significativamente i livelli di IL-1β e IL-18—i caratteristici effettori a valle della cascata piroptotica—sia nel liquido di lavaggio siero che nel liquido broncoalveolare (BALF). Queste evidenze suggeriscono fortemente che gli effetti protettivi di SEW+FIR possano essere mediati dalla soppressione della morte cellulare guidata dall'inflamosoma. Inoltre, il SEW, applicato indipendentemente o come mezzo solvente, è stato riscontrato di ridurre i livelli di espressione di interleuchina-8 (IL-8) e fattore di necrosi tumorale α (TNF-α), aumentando al contempo i livelli di espressione di interleuchina-4 (IL-4) e interleuchina-10 (IL-10) nel siero ematico e migliorando il danno polmonare^{istopatologico} 15,16,17,18.

Partendo da queste osservazioni, abbiamo ipotizzato che l'efficacia terapeutica combinata SEW e FIR (SEW+FIR) nell'ARDS dipenda dalla sua capacità di modulare le vie pirototiche specifiche per età, ripristinando così l'omeostasi immunitaria polmonare in modo mirato. Attualmente, la base della gestione dell'ARDS si basa sulla ventilazione meccanica e su agenti farmacologici limitati come i corticosteroidi, che spesso comportano rischi di lesioni polmonari indotte da ventilazione o immunosoppressione^{sistemica 19}. Rispetto a queste terapie convenzionali, SEW+FIR offre un'alternativa non invasiva e non farmacologica che può attenuare in sicurezza le cascate infiammatorie in stadio iniziale senza tossicità secondaria per gli organi. Praticamente, questo protocollo è più adatto come intervento aggiuntivo precoce per ARDS lieve o moderato. Il suo principale limite è che la sua efficacia in ARDS fibrotico grave e avanzato rimane non dimostrata, e non può sostituire le misure essenziali di supporto vitale in un contesto di terapia intensiva. Per testare la nostra ipotesi, abbiamo introdotto una pipeline integrata che collega il profiling trascrittomico stratificato per età e il machine learning con la validazione vivo. Questo approccio non solo identifica AXL, GSDME e SPP1 come nuovi bersagli terapeutici specifici per età, ma fornisce anche la prima evidenza meccanicistica del potenziale clinico di SEW+FIR come intervento di precisione non farmacologico per l'ARDS.

Protocollo

Tutte le procedure sperimentali sugli animali sono state eseguite rigorosamente in conformità con le linee guida approvate dal Comitato Sperimentale per il Benessere Animale e l'Etica dell'Ospedale Dongzhimen, Università di Medicina Cinese di Pechino (Approvazione n. 19-54), prima dell'inizio dello studio.

Sorgente dei dati e elaborazione dei dati
Due dataset sull'espressione genica (GSE89953 e GSE116560) sono stati recuperati dal database Gene Expression Omnibus (^{GEO) 20}. Il dataset GSE89953, che include dati trascrittomici di macrofagi alveolari interi provenienti da pazienti con ARDS di diverse fasce d'età, è stato utilizzato per l'analisi differenziale di espressione e reti. Il dataset GSE116560, che include informazioni cliniche come lo stato della ventilazione meccanica, è stato utilizzato per il machine learning e la modellazione prognostica. Inoltre, sono stati estratti 608 geni associati alla piroptosi da un database completo di annotazione genica umana, utilizzando un punteggio di correlazione superiore a 1 come criterio di screening. I dati sull'espressione genica sono stati normalizzati utilizzando il pacchetto limma in R. Numero dello studio clinico: non applicabile.

Identificazione dei DEG
I pazienti nel dataset GSE89953 erano stratificati in due gruppi d'età: di età bassa (<45 anni) e di età alta (≥45 anni). Questo limite è stato selezionato sulla base di evidenze epidemiologiche che suggeriscono che l'età mediana di insorgenza dell'ARDS è di circa 45^{anni 21}. Per garantire la robustezza di questa soglia, sono state condotte analisi di sensibilità utilizzando soglie di età alternative (50 e 55 anni). Queste analisi hanno dimostrato schemi coerenti nell'identificazione dei geni hub e nel clustering dei moduli, convalidando statisticamente il limite di 45 anni per le analisi successive a valle. Il dataset è stato normalizzato utilizzando il pacchetto limma in R. I geni differenzialmente espressi (DEG) tra gruppi d'età sono stati identificati tramite modellazione lineare con moderazione bayesiana empirica. Geni con un valore P aggiustato < 0,05 e |log₂ variano| ≥ 0,5 sono stati considerati DEG statisticamente significativi. Sono stati generati grafici di vulcani e heatmap per visualizzare i DEG utilizzando il pacchetto ggplot2 in R.

Identificazione genica associata alla piroptosi e analisi dell'arricchimento
I geni correlati alla piroptosi sono stati recuperati dal database di annotazione genica utilizzando la parola chiave "pirottosi". L'intersezione tra DEG e geni associati alla piroptosi è stata definita come geni correlati alla piroptosi (DEPG) espressi differenzialmente. Le analisi di arricchimento delle vie dei DEGP sono state condotte da Gene Ontology (GO) e dalla Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) utilizzando il pacchetto clusterProfiler in R²². Le categorie Processo Biologico (BP), Componente Cellulare (CC) e Funzione Molecolare (MF) sono state annotate, e il Z-score ≥ 1 e i valori P correttivi < 0,05 sono stati considerati significativi.

Analisi della rete di coespressione genica pesata (WGCNA)
Per identificare i moduli genici associati alla piroptosi, il WGCNA è stato eseguito utilizzando il pacchetto WGCNA R. Una rete firmata fu costruita utilizzando una potenza soft-threshold (β) di 26 per garantire una topologia senza^{scala 23}. I moduli sono stati identificati tramite l'algoritmo di taglio dinamico dell'albero con una dimensione minima di 30 moduli, una suddivisione profonda di 2 e una soglia di fusione (altezza di taglio) di 0,25. È stata calcolata la correlazione tra autogeni del modulo e caratteristiche di piroptosi. L'analisi della variazione del set genico (GSVA) è stata effettuata su moduli selezionati utilizzando set di geni hallmark scaricati da MsigDB^24,25.

Apprendimento automatico
Il dataset GSE116560 è stato suddiviso in gruppi di età alta e bassa utilizzando 45 anni come soglia di età, e entrambi i gruppi sono stati analizzati utilizzando algoritmi di machine learning. L'analisi di regressione con l'Operatore di Minima Riduzione Assoluta e Selezione (LASSO) è stata implementata utilizzando il pacchetto glmnet (versione 4.1-2) in R, con il parametro di penalità ottimale (λ) determinato da una validazione incrociata a 10 volte (criteri 1-SE). Per l'algoritmo Random Forest (RF), sono stati costruiti 500 alberi (ntree = 500) e il numero di caratteristiche campionate a ogni divisione (mtry) è stato impostato alla radice quadrata del numero totale di predittori per garantire la stabilità del modello. I geni sovrapposti di entrambi i metodi sono stati definiti come geni signature specifici per età.

Costruzione e valutazione di modelli diagnostici
È stato costruito un modello di previsione diagnostica basato sui geni signature identificati. È stata impiegata una regressione logistica per sviluppare il modello e è stato creato un nomogramma per visualizzarne il potere predittivo. Le prestazioni del modello sono state valutate utilizzando una curva di caratteristiche operative del ricevitore (ROC) e l'area sotto la curva (AUC) è stata calcolata per valutarne l'accuratezza diagnostica. La validazione interna veniva effettuata tramite il campionamento bootstrap. Ulteriori valutazioni della stabilità del modello e dell'utilità clinica sono state effettuate utilizzando grafici di calibrazione e analisi delle curve decisionali (DCA).

Analisi dell'infiltrazione immunitaria
La composizione delle cellule immunitarie nei gruppi di età avanzata e bassa è stata stimata utilizzando l'algoritmo CIBERSORT basato sulla matrice di firma LM22. Le proporzioni relative di 22 tipi di cellule immunitarie sono state confrontate tra i gruppi. L'espressione differenziale dei geni hub tra i sottoinsiemi delle cellule immunitarie è stata analizzata utilizzando dati a campione singolo e visualizzata in mappe di calore e istogrammi.

Analisi dell'arricchimento degli insiemi genici (GSEA)
GSEA è stato eseguito separatamente sui geni hub dei gruppi di età alta e bassa. L'Analisi di Arricchimento dei Set Genici (GSEA) è stata effettuata utilizzando i set genici della Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG). I geni sono stati classificati in base al rapporto segnale-rumore (o Cambiamento di piega) tra gruppi ad alta e bassa espressione. Sono stati poi calcolati i punteggi di arricchimento e arricchimento normalizzato (NES) utilizzando 1.000 permutazioni per identificare percorsi significativamente arricchiti. I percorsi con un tasso di falsa scoperta (FDR) inferiore a 0,25 e un valore nominale P inferiore a 0,05 sono stati significativamente arricchiti. Questa analisi è stata poi utilizzata per dedurre le vie biologiche che possono essere regolate da ciascun gene hub.

Animali sperimentali
In questo studio sono stati utilizzati diciotto maschi di ratti SPF Sprague Dawley (di età compresa 6-7 settimane, 180 g ± 10 g). Le informazioni dettagliate sui fornitori sono elencate nella Tabella dei Materiali.

Reagenti e strumenti
Dispositivi di preparazione dell'acqua trattata in campo elettromagnetico e strumenti di emissione a infrarosso lontano sono stati utilizzati per interventi sperimentali per fornire rispettivamente energia spettrale (SEW) e radiazione infrarossa lontana (FIR). Il lipopolisaccaride (LPS) è stato utilizzato per modellare l'ARDS. I livelli di citochine (IL-1β, IL-18, IL-6, TNF-α) sono stati quantificati utilizzando kit ELISA specifici. I livelli di espressione proteica (AXL, SPP1, Caspasi-3, GSDME, GAPDH) sono stati valutati utilizzando anticorpi primari specifici e corrispondenti anticorpi secondari coniugati con HRP. L'elaborazione e l'analisi dei campioni venivano eseguite utilizzando apparecchiature standard di laboratorio, tra cui un biomicroscopio, un microtomo, una centrifuga ad alta velocità, un congelatore a temperatura ultra-bassa e un lettore di micropiastre. I dettagli completi di tutti i reagenti, anticorpi e strumenti, insieme ai rispettivi produttori, sono forniti nella Tabella dei Materiali.

Raggruppamento e modellazione degli animali
Diciotto ratti Sprague-Dawley sono stati assegnati casualmente ai gruppi Controllo, Modello e SEW+FIR, con sei ratti per gruppo. Ogni gruppo veniva pesato e documentato quotidianamente. Il gruppo SEW+FIR ha ricevuto la terapia FIR (lunghezza d'onda 4 μm–14 μm, distanza di irradiazione di 20 cm dalla superficie dorsale) per 20 minuti al giorno in un ambiente a temperatura controllata (22 °C ± 2 °C), mentre contemporaneamente riceveva SEW a una dose di 1 mL/100 g/giorno tramite gavage^{orale 7}. L'acqua distillata è stata somministrata per via orale ai gruppi di controllo e modello a una dose equivalente di 1 mL/100 g/g. L'acqua SEW e distillata sono state somministrate una volta al giorno per 7 giorni dopo il riscaldamento in un bagno caldo a 60 °C. Il settimo giorno, 6 ore dopo l'alimentazione, i gruppi modello e SEW+FIR sono stati iniettati con soluzione LPS a una dose di 2 mg/kg in peso attraverso la vena caudaria, mentre il gruppo di controllo è stato trattato con soluzione fisiologica allo 0,9% a una dose di 2 mg/kg in peso. La tecnica di modellizzazione è stata considerata un metodo maturo e stabile per indurre una risposta infiammatoria sistemica con una singola iniezione di LPS tramite la vena caudale. Il tessuto polmonare della patologia polmonare nei gruppi modellati era coerente con le caratteristiche^{ARDS 25}. Checkpoint: L'induzione riuscita dell'ARDS è indicata da letargia visibile, tachipnea e una riduzione del ~10% del peso corporeo entro 16 ore dopo l'iniezione²⁶.

Raccolta di indicatori relativi ai ratti
Sedici ore dopo, tutti e tre i gruppi sono stati iniettati intraperitonealmente con il 3% di pentobarbital sodio a una dose di 30 mg/kg di peso corporeo per indurre l'anestesia. CRITICO: La profondità dell'anestesia deve essere rigorosamente confermata dalla perdita del riflesso di ritiro del pedale prima di qualsiasi intervento procedurale. Inoltre, sono stati mantenuti protocolli di biosicurezza rigorosi; tutti i materiali contaminati da LPS, fluidi biologici e carcasse animali venivano smaltiti in contenitori designati per rifiuti biologici per una corretta incenerimento. Cinque millilitri di sangue sono stati raccolti dall'aorta addominale in tubi sterili e il siero è stato isolato tramite centrifugazione a 1.000 x g per 20 minuti a 4 °C. Il siero veniva poi conservato a −80 °C per ulteriori analisi. Dopo la toracotomia e la legatura dell'ilo polmonare destro, il liquido di lavaggio broncoalveolare (BALF) è stato ottenuto lavando il polmone sinistro tre volte con soluzione salina tamponata fosfato (PBS) pre-raffreddata tramite una cannula endotracheale. Il BALF veniva poi centrifugato a 1.000 x g per 10 minuti a 4 °C, e il sovrantantante veniva immagazzinato a −80 °C. Il lobo superiore del polmone destro è stato rimosso e pulito con soluzione fisiologica fredda per rimuovere il sangue. Nove volumi di soluzione fisiologica salina sono stati aggiunti rispetto al peso del tessuto e il campione è stato tritato in un bagno di ghiaccio usando forbici oftalmiche. È stato preparato un omogeneato del tessuto polmonare al 10% utilizzando un omogeneizzatore, seguito da centrifugazione a 700 x g per 15 minuti a 4 °C. Il soprantantante veniva raccolto e conservato a −80 °C per ulteriori analisi biochimiche. Inoltre, una porzione del tessuto polmonare destro di ciascun ratto è stata fissata al 4% di paraformaldeide per l'esame istologico.

Indicatori di osservazione e metodi di rilevamento
Il lobo inferiore del polmone destro è stato processato tramite incassamento standard, taglio di tessuto, deceratura, colorazione HE, separazione del colore, disidratazione e sigillatura del film dopo fissazione al 4% di paraformaldeide. I tessuti polmonari di ciascun gruppo mostravano alterazioni patologiche osservate al microscopio ottico.

Al microscopio lucinico sono state identificate anomalie patologiche nell'architettura alveolare e nel setto setto, nel grado di infiltrazione delle cellule infiammatorie, nell'iperemia e nell'edema capillare polmonare. Il Dipartimento di Patologia dell'Università di Medicina Cinese di Pechino ha assistito nell'osservazione. Il punteggio di lesione polmonare istologica è stato calcolato per valutare la lesione polmonare come segue: nessuna lesione = 0, lesione in meno del 25% del campo = 1, lesione nel 25–50% del campo = 2, lesione nel 50–75% del campo = 3, e lesione in più del 75% del campo = 4. Dieci campi sono stati selezionati casualmente e valutati da ricercatori che non vedevano il raggruppamento.

L'ELISA è stato eseguito su campioni di soprantantante BALF precedentemente raccolti, omogeneato del tessuto polmonare e siero sanguigno secondo le istruzioni del produttore. Per un breve periodo, i campioni sono stati incubati in pozzi pre-rivestiti a 37 °C per 90 minuti. Dopo il lavaggio cinque volte con il tampone di lavaggio, sono stati applicati anticorpi biotinilati di rilevamento (diluizione 1:100) per 60 minuti a 37 °C. Dopo un altro passaggio di lavaggio, è stato aggiunto il coniugato HRP e incubato al buio per 30 minuti a 37 °C. Successivamente, l'assorbanza è stata misurata a 450 nm utilizzando un lettore di microplacche per calcolare le concentrazioni del campione.

L'analisi Western blot è stata effettuata per valutare i livelli di espressione di AXL, SPP1, caspasi-1, GSDMD, caspasi-3, GSDME e GAPDH nei tessuti polmonari e nei campioni di BALF conservati a −80°C. Le proteine sono state raccolte e lise secondo le istruzioni del Protein Extraction Kit. Quantità uguali di estratti proteici (40 μg) sono state caricate per corsia e risolte tramite SDS-PAGE. I polipeptidi sono stati poi separati e trasferiti nelle membrane PVDF. Le membrane sono state bloccate con latte secco al 5% di scremo in TBST per 1 ora a temperatura ambiente e poi incubate durante la notte a 4 °C con gli anticorpi primari specifici (diluiti 1:1000). Dopo il lavaggio con TBST tre volte per 10 minuti ciascuno, le membrane sono state incubate con i corrispondenti anticorpi secondari coniugati con HRP (diluiti 1:5000) in soluzione bloccante a temperatura ambiente per 1 ora. Il GAPDH è stato utilizzato come proteina di riferimento interna. Le bande proteiche sono state visualizzate utilizzando un kit di chemiluminescenza avanzata (ECL) con un tempo di esposizione di 1–5 minuti, e i risultati sono stati analizzati tramite software di elaborazione delle immagini. I livelli relativi di espressione delle proteine target sono stati calcolati come il rapporto tra la proteina target e il GAPDH.

Analisi statistica
Gli indici quantitativi sono stati espressi come media ± deviazione standard, e l'analisi statistica è stata effettuata utilizzando software statistici. Il test di Kruskal–Wallis o ANOVA unidirezionale è stato utilizzato per confrontare le differenze tra diversi gruppi, a seconda che i dati fossero normalmente distribuiti. Tutte le statistiche sono state valutate tramite un test di ipotesi a due lati. Per analisi che coinvolgono confronti multipli, come l'espressione genica differenziale e la profilazione per infiltrazione delle cellule immunitarie, i valori P sono stati regolati utilizzando il metodo del tasso di falsa scoperta (FDR) di Benjamini-Hochberg. Un valore P aggiustato di 0,05 o inferiore è stato considerato statisticamente significativo. Per la graficazione veniva utilizzato software di graficazione.

Risultati

Identificazione dei DEG in GSE89953 diversi gruppi d'età e corrispondente analisi di arricchimento funzionale
I dati grezzi di espressione del dataset GSE89953 sono stati normalizzati utilizzando la funzione normalizeBetweenArrays nel pacchetto limma (Figura 1A), e i boxplot prima e dopo la normalizzazione hanno confermato un miglioramento della coerenza tra i campioni. L'analisi di espressione differenziale basata sulla matrice normalizz...

Discussione

L'accumulo di lesioni infiammatorie e disregolazione immunitaria è una caratteristica distintiva della sindrome da difficoltà respiratoria acuta (SDRA), che porta a gravi danni polmonari e alta mortalità. A causa della patogenesi complessa e della mancanza di terapie efficaci, identificare bersagli terapeutici precisi è fondamentale per migliorare i risultati. Le evidenze emergenti suggeriscono che la pirottosi, una forma di morte cellulare programmata, svolga un ruolo centrale nella pro...

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Anticorpo anti-AXL	Abcam	ab215205
Anticorpo anti-Caspasi-3	Abcam	ab184787
Anticorpi anti-GAPDH	Abcam	ab8245
Anticorpo anti-GSDME	Abcam	ab215191
Anticorpo anti-SPP1	Abcam	ab307994
Biomicroscopio	OLYMPUS, Giappone	BH2
Strumento FIR	Gruppo JFC Guangdong	JF-802
Capre Anti-Coniglio IgG H & L (HRP)	Abcam	ab6721
GraphPad Prism 10.1.2	GraphPad Software	-
Centrifuga ad alta velocità	Thermo, USA	Sorvall ST16R
Kit IL-18 ELISA	Jiangsu Meibiao Biotechnology Co., Ltd.	MB-1735B
IL-1 e beta; Kit ELISA	Jiangsu Meibiao Biotechnology Co., Ltd.	MB-1588B
Kit IL-6 ELISA	Jiangsu Meibiao Biotechnology Co., Ltd.	MB-50054A
ImageJ	NIH	-
Lipopolisaccaride (LPS)	Sigma, USA	L6511
Maschi di ratti SPF Sprague Dawley (6-7 settimane)	Beijing HFK Bioscience Co., Ltd., Cina	SCXK(Pechino) 2019-008 (Licenza)
Lettore di microplacche (Varioskan Flash)	Thermo Scientific	Varioskan Flash
Microtomo	LEICA	RM2235
R software (limma, clusterProfiler, WGCNA, glmnet, randomForest)	R Foundation for Statistical Computing	-
Strumento di preparazione SEW	Gruppo JFC Guangdong	JF-139
SPSS 26.0	IBM	-
Bilanciamento della tabella	Shanghai Cany Precision Instruments Co., Ltd.	HC· TP11· 10
TNF-α Kit ELISA	Jiangsu Meibiao Biotechnology Co., Ltd.	MB-50051A
Congelatore a bassissima temperatura	Thermo, USA	Serie Forma 900