Questo video descrive il metodo di marcatura retrograda di RGC mediante l'applicazione di fluoro-oro (FG) sulla superficie del collicolo superiore (SC). Tecnica consiste nel forare il cranio, aspirando la corteccia, e l'applicazione di spugna di gelatina su tutta la superficie dorsale del SC.
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Articolo metodologico
Etichettatura retrograda di cellule gangliari della retina mediante l'applicazione di fluoro-oro sulla superficie del collicolo superiore
In questo articolo
Sommario
Abstract
Cellule gangliari della retina (RGC) conteggio è essenziale per valutare la degenerazione retinica soprattutto nel glaucoma. Etichettatura affidabile RGC è fondamentale per valutare gli effetti di qualsiasi trattamento. Nel ratto, circa il 98% del RGCs è noto per proiettare al controlaterale collicolo superiore (SC) (Forrester e Peters, 1967). L'applicazione di fluoro-oro (FG) sulla superficie di SC può etichettare quasi tutte le RGCs, in modo che possiamo concentrarci su questa neuroni più vulnerabili della retina nel glaucoma. FG è occupato dai terminali degli assoni delle cellule gangliari della retina e bilateralmente trasportato retrogrado alla sua somas nella retina. Confronta con marcatura retrograda di RGC mettendo FG a tronco di transected nervo ottico per 2 giorni, l'interferenza di sopravvivenza RGC è ridotto al minimo. Confronta con colorazione violetto cresolo che RGCs macchie, le cellule amacrine ed endotelio dei vasi sanguigni nello strato di cellule gangliari della retina, questo metodo di etichettatura più specifico per il RGC. Questo video descrive il metodo di marcatura retrograda di RGC FG applicando sulla superficie del SC. Le procedure chirurgiche includono perforazione del cranio; aspirando la corteccia per esporre la SC e l'applicazione di spugna di gelatina su tutta la superficie dorsale del SC sono mostrati. Consigli utili per evitare la massiccia emorragia intracranica e l'aspirazione delle SC sono state date.
Protocollo
- Anestetizzare il ratto di iniezione intra-peritoneale di ketamina (80mg/kg) e xilazina (8mg/kg) (rapporto tra volume a 2:1). Applicare lubrificante sterile unguento oculare per evitare l'essiccazione delle cornee durante l'intervento chirurgico.
- Accorciare il pelo testa (da occhio a livello delle orecchie) e fissare la testa sul palco testa da un capo morsetto e impostarne il incisivi nella barra degli incisivi.
- Disinfettati zona di operazione con una soluzione di iodio povidone al 10% seguito dal 70% di alcol.
- Tagliare la pelle ed i muscoli per esporre cranio e suture (sagittale, coronale e trasversale suture) (Figura 1). Applicare analgesico, ....
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Discussione
- Perché usare questo metodo chirurgico per la conta delle cellule gangliari della retina?
Nel ratto circa il 98% delle cellule gangliari retiniche (RGC) sono noti per progetto al controlaterale collicolo superiore (SC). L'applicazione di fluoro-oro sulla superficie di SC può etichettare quasi tutti i RGCs, in modo che possiamo concentrarci su questa neuroni più vulnerabili della retina nel glaucoma. Confronta con marcatura retrograda di RGC mettendo FG a tronco di transected nervo ottico per 2 giorni, l'interferenza.......
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Ringraziamenti
Gli autori desiderano ringraziare per il sostegno del Programma Nazionale Glaucoma Foundation Assistant Salute americano.
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Riferimenti
- Ahmed, A. K. M. F., Dong, K., Sugioka, K., Yamadori, T. Retrograde double labeling of retinal ganglion cells in the newborn and adult albino rat. Neurosci. Protocols. 1, 1-11 (1996).
- Chan, H. C., Chang, R. C. C., Ip, A. K. C., Chiu, K., Yuen, W. H., Zee, S. Y., So, K. F.
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Ristampe e permessi
